一种纳米结构人工酶信号探针的多通道Fibrin检测方法技术

本发明专利技术公开了一种纳米结构人工酶信号探针的多通道Fibrin检测方法。一种新型的DNA四面体三维探针合成的人工酶，用于检测纤维蛋白，具有良好的稳定性和较强的穿透性及灵敏度,DNA作为一种多功能的生物纳米材料，在纳米结构自组装、生物免疫传感器等领域有着突出的应用，DNA四面体三维探针作为人工酶的骨架，给hemin/G4‑DNAzyme提供一个稳定的化学环境，而构建一种新型人工酶(Tetrazyme)。人工酶中仅需要浓度为0.6μM的DNA、80μM的CREKA就可以对纤维蛋白进行高效地检测。结果表面，该新型电化学检测方法能高效便捷的检测纤维蛋白且灵敏度高。

Multi channel fibrin detection method for nanostructured artificial enzyme signal probe

【技术实现步骤摘要】
一种纳米结构人工酶信号探针的多通道Fibrin检测方法
本专利技术涉及医疗检测
，尤其涉及一种纳米结构人工酶信号探针的多通道Fibrin检测方法。
技术介绍
肿瘤是威胁人们生命健康的主要疾病之一，并且恶性肿瘤的发病率逐年增加，所以肿瘤细胞的高效筛查、诊断与治疗成为了关键因素，而纤维蛋白的检测对于癌细胞的早期筛查有着重要的意义，通过研究表明，恶性肿瘤细胞间质中含有高浓度纤维网状结构的纤维蛋白，并且能够使得血管的通透性变大，血浆蛋白渗出的间质形成纤维蛋白，从而给癌细胞的生长与转移提供了良好的条件。目前检测纤维蛋白的方法主要是萤光成像、乳胶凝集、酶联免疫法。荧光成像法虽然检测灵敏度高，但由于需要使用自发荧光物质和血红蛋白的吸收从而限制了其在活体细胞中的应用。乳胶凝集法因其具有良好的稳定性和较高的灵敏度是检测纤维蛋白最常用的方法，但是由于特异性较差、操作比较繁琐从而限制了其在临床诊断中的应用。酶联免疫吸附法采用生物酶，使其具有较高的特异选择性，但是采用的生物酶存在价格昂贵、结构复杂、易变性失活且不易保存等缺点，不易于临床上对纤维蛋白进行检测。因此本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种纳米结构人工酶信号探针的多通道Fibrin检测方法，其特征包括以下步骤：/n步骤1、合成具有类HRP活性的新型人工酶；/n步骤2以免疫电极为工作电极，碳电极为对电极，AgCl电极为参比电极，取出电极条，用Milli-Q水冲洗电极表面，再用氮气吹干残留的水珠；/n步骤3、在电极通道上滴入纤维蛋白37℃反应2h，用1×PBS缓冲溶液冲洗，氮气吹干，再取30μL2％的BSA溶液滴在电极表面37℃封闭30min，用1×PBS缓冲溶液冲洗，氮气吹干，再将制备好的信号探针人工酶取10μL滴到电极通道上，37℃孵育2.5h，用1×PBS缓冲溶液冲洗，氮气吹干，将底物TMB滴在吹干后的电极表面；/n步...

【技术特征摘要】
1.一种纳米结构人工酶信号探针的多通道Fibrin检测方法，其特征包括以下步骤：
步骤1、合成具有类HRP活性的新型人工酶；
步骤2以免疫电极为工作电极，碳电极为对电极，AgCl电极为参比电极，取出电极条，用Milli-Q水冲洗电极表面，再用氮气吹干残留的水珠；
步骤3、在电极通道上滴入纤维蛋白37℃反应2h，用1×PBS缓冲溶液冲洗，氮气吹干，再取30μL2％的BSA溶液滴在电极表面37℃封闭30min，用1×PBS缓冲溶液冲洗，氮气吹干，再将制备好的信号探针人工酶取10μL滴到电极通道上，37℃孵育2.5h，用1×PBS缓冲溶液冲洗，氮气吹干，将底物TMB滴在吹干后的电极表面；
步骤4、用电化学检测仪器以循环伏安曲线法和稳态时间-电流曲线法进行电化学表征，以检测所制作电极的灵敏度。


2.如权利要求1所述的一种纳米结构人工酶信号探针的多通道Fibrin检测方法，所述步骤1合成新型人工酶具体步骤为：
步骤1、取100μM的Tetra-a-NH2、Tetra-b-G4、Tetra-c-G4、Tetra-d-G4四条单链各2μL和12μL的TMK缓冲液均匀混合，溶液放置PCR仪，95℃加热5min，迅速降温到4℃，持续30s以上，得到终浓度为10μM的DNA四面体/G4信号探针；
步骤2、用Q水将归巢肽(CREKA)配制成5mg/mL的溶液，再称取3.1mg(15...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾冬冬，王彬，徐晓慧，李晖，潘洪志，
申请(专利权)人：上海健康医学院，
类型：发明
国别省市：上海;31