一种腺相关病毒载体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种AAV衣壳蛋白突变体、包含编码所述AAV衣壳蛋白突变体的核酸序列的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体以及包含所述载体的宿主细胞。本发明专利技术还涉及包含所述AAV衣壳蛋白突变体的腺相关病毒(AAV)载体，从其构建的携带有基因表达盒的重组腺相关病毒粒，生成此类腺相关病毒载体或病毒粒的方法，以及此类腺相关病毒载体和病毒粒在疾病治疗方面的用途。

An adeno-associated virus vector and its application

【技术实现步骤摘要】
一种腺相关病毒载体及其用途
本专利技术涉及基因工程和基因治疗领域，具体地，本专利技术涉及一种AAV衣壳蛋白突变体，包含所述衣壳蛋白突变体的腺相关病毒(AAV)载体，从其构建的携带有基因表达盒的AAV病毒粒，生成和使用此类腺相关病毒载体或病毒粒的方法，以及此类腺相关病毒载体和病毒粒在疾病治疗方面的用途。序列表本申请包含序列表，其通过提述并入本文。
技术介绍
内耳的耳蜗是我们的外周声音感知器官。耳蜗的听觉细胞在我们感知外周声音的过程中扮演着非常重要的角色，它把外界的声波信号转化为电生理信号，然后通过内耳螺旋神经节细胞逐步传递到大脑听觉中枢。先天遗传性或者后天各种创伤引起的毛细胞死亡均可以引起不同程度的听力损伤，甚至终身性耳聋。根据世界卫生组织(WHO)的调查，0.3％的新生儿、5％的45岁以前的人群和50％的70岁以上的人群患有不同程度的听力损伤。听力损伤不仅仅影响听力本身，而且也能引起不同程度的社交障碍。其中，遗传性耳聋是由于内耳中某些基因的突变所导致的。目前已知的导致耳聋的基因已经多达100多个。其中比例最高的是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种AAV衣壳蛋白突变体或其功能性片段，所述AAV衣壳蛋白突变体包含与AAV亲本或野生型衣壳蛋白的氨基酸序列相比，在对应于如SEQ ID NO:1所示亲本或野生型AAV衣壳蛋白的氨基酸序列中第491位、第500位和第666位的一个或多个氨基酸位置处具有氨基酸突变的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种AAV衣壳蛋白突变体或其功能性片段，所述AAV衣壳蛋白突变体包含与AAV亲本或野生型衣壳蛋白的氨基酸序列相比，在对应于如SEQIDNO:1所示亲本或野生型AAV衣壳蛋白的氨基酸序列中第491位、第500位和第666位的一个或多个氨基酸位置处具有氨基酸突变的氨基酸序列。


2.根据权利要求1所述的AAV衣壳蛋白突变体或其功能性片段，其中所述亲本或野生型AAV衣壳蛋白具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列或者与其有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。


3.根据权利要求1所述的AAV衣壳蛋白突变体或其功能性片段，其中所述亲本或野生型AAV衣壳蛋白来自AAV1、AAV2、AAV3A、AAV3B、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、或AAV13，优选地，所述亲本或野生型AAV衣壳蛋白具有选自SEQIDNO:6-19的氨基酸序列或者与其有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的AAV衣壳蛋白突变体或其功能性片段，其中所述AAV衣壳蛋白突变体包含：
与SEQIDNO:1所示的亲本或野生型AAV-DJ衣壳蛋白的氨基酸序列相比，在对应于亲本或野生型AAV-DJ衣壳蛋白的氨基酸序列中第491位、第500位和第666位中一个或多个氨基酸位置处具有氨基酸突变的氨基酸序列；
与SEQIDNO:7所示的亲本或野生型AAV2衣壳蛋白的氨基酸序列相比，在对应于亲本或野生型AAV2衣壳蛋白的氨基酸序列中第489位和第498位的一个或多个氨基酸位置处具有氨基酸突变的氨基酸序列；
与SEQIDNO:14所示的亲本或野生型AAV8衣壳蛋白的氨基酸序列相比，在对应于亲本或野生型AAV8衣壳蛋白的氨基酸序列中第492位、第501位和第667位的一个或多个氨基酸位置处具有氨基酸突变的氨基酸序列；或
与SEQIDNO:15所示的亲本或野生型AAV9衣壳蛋白的氨基酸序列相比，在对应于亲本或野生型AAV9衣壳蛋白的氨基酸序列中第490位和第499位的一个或多个氨基酸位置处具有氨基酸突变的氨基酸序列。


5.根据权利要求1所述的AAV衣壳蛋白突变体或其功能性片段，其中所述突变导致该AAV衣壳蛋白突变体具有增加的靶向受试者内耳的支持细胞例如顶端、中间和基底支持细胞的活性。


6.根据权利要求1-4中任一项所述的AAV衣壳蛋白突变体或其功能性片段，其中所述氨基酸突变是氨基酸缺失或氨基酸取代。


7.根据权利要求6所述的AAV衣壳蛋白突变体或其功能性片段，其中所述氨基酸取代是取代为不易被磷酸化修饰的氨基酸，例如取代为酸性氨基酸、碱性氨基酸、非极性氨基酸、或除酪氨酸外的芳香族氨基酸或者除苏氨酸外的小氨基酸，优选取代为丙氨酸。


8.根据权利要求7所述的AAV衣壳蛋白突变体或其功能性片段，其包含在对应于如SEQIDNO:1所示亲本或野生型AAV衣壳蛋白的氨基酸序列中第491位、第500位和第666位的一个或多个位置处具有选自下组的一个或多个氨基酸取代的氨基酸序列：S491A、S500A、和S666A。


9.根据权利要求1-3中任一项所述的AAV衣壳蛋白突变体或其功能性片段，其中所述功能性片段为N端氨基酸缺失的片段。


10.根据权利要求1所述的AAV衣壳蛋白突变体或其功能性片段，其中所述功能性片段为与SEQIDNO:1所示亲本或野生型AAV-DJ衣壳蛋白氨基酸序列中的第1-137位或第1-202位对应的位置处的氨基酸缺失的片段。


11.根据权利要求1所述的AAV衣壳蛋白突变体或其功能性片段，其中所述AAV衣壳蛋白突变体具有SEQIDNO:2-4中的任一序列。


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【专利技术属性】
技术研发人员：姚璇，施霖宇，王少冉，柏伟娅，
申请(专利权)人：辉大上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31