一种亚临界水提取和分离灵芝三萜提取物的方法技术

本发明专利技术提供一种使用亚临界技术提取和分离灵芝三萜提取物的方法：将灵芝经过亚临界水提取技术，采用不同压力和温度条件，依次将灵芝中的活性成分：灵芝三萜酸性部位和灵芝三萜中性部位从灵芝子实体中提取并分离出来。本发明专利技术利用亚临界水提取技术高效和经济的得到灵芝中的不同活性提取物。所得活性提取物中灵芝三萜酸性部位DPPH清除率的抗氧化活性可达到88.38%，灵芝三萜中性部位对人的大细胞肺癌细胞H460的半抑制率IC

【技术实现步骤摘要】
一种亚临界水提取和分离灵芝三萜提取物的方法
本专利技术属于天然产物提取和食药用菌领域，涉及灵芝的加工利用
，具体涉及一种亚临界水提取和分离灵芝三萜类活性提取物的方法
技术介绍
灵芝(Ganodermalucidum(Leyss.exFr.)Karst.)为多孔菌科真菌灵芝中的一种(中国药典2015版一部)，味甘性平，扶正固本，主要活性成分为灵芝多糖和灵芝三萜，灵芝三萜具有抗氧化，增强免疫力，抗肿瘤，保肝等多种药理功效。灵芝三萜分为酸性部位和中性部位，其中酸性部位包含已有大量文献报道的灵芝酸A等五环三萜酸物质。中性部位包含目前较少研究的灵芝酮三醇等甾醇类物质。目前对于灵芝(灵芝三萜)的加工利用仅限于乙醇提取等传统提取方法，方法简单，较为安全，但是传统提取方法耗时较长，提取效率低，成本较高，一般提取率为5～6％，灵芝三萜含量15～20％(以熊果酸或齐墩果酸计)，也未有报道检测其中灵芝三萜酸性部位和灵芝三萜中性部位成分含量。已有报道使用超声、酶解等辅助手段提取灵芝，但都仅限于优化传统提取方法，提取效率提升有限。亦有报道使用超临界二氧化碳萃取技术提取灵芝中三萜活性成分，但二氧化碳不溶于水，超临界物料需事先干燥脱水，增加成本；超临界二氧化碳萃取技术用于萃取低分子、低极性、亲脂性、低沸点的化合物较为理想，但对萃取极性较强、相对分子质量大的化合物则有一定困难，在实际操作中往往需要加入提携剂来增加化合物的溶解度和选择性，不但增加了操作的繁琐性，也存在着有机溶剂的残留问题。超临界二氧化碳萃取灵芝三萜通常要在50Mpa以上的超高压状态下才能进行，超临界二氧化碳设备价格较高，流体又需要制冷液化，设备制造和运行成本较高。CN102898539“一种使用亚临界水提取灵芝多糖的方法”使用的提取温度(100～200℃)和压力(1～20Mpa)范围过宽，导致提取产物成分复杂，需经过超滤，除蛋白，醇沉步骤得到灵芝多糖，且提取时间(10～80min)较长。未充分发挥亚临界水提取的高效特性。未说明其得到的灵芝多糖纯度和药理活性。邓辰辰等人(“亚临界水提取灵芝多糖的工艺研究”，邓辰辰等，河南工业大学学报(自然科学版)，2016，37(2)：105～108)虽然对亚临界水提取灵芝多糖的条件进行优化，但仍需经过超滤，除蛋白，醇沉步骤得到灵芝多糖，步骤繁琐，也未说明其得到的灵芝多糖纯度和药理活性。徐瑞聆等人(“亚临界水提取灵芝子实体中灵芝酸类成分的工艺优化”，徐瑞聆等，华西药学杂志，2019，34(4)：393～395)对亚临界提取灵芝酸类(即灵芝三萜酸性部位)成分进行优化，但其液相检测条件是以灵芝酸A和灵芝酸C2作为对照品，仅仅检测灵芝酸A和灵芝酸C2的总含量，由于它们在灵芝酸的酸性部位的占比过小，不易体现灵芝酸复杂性；由于也未对灵芝三萜中性部位进行检测，就难以真实反映亚临界提取灵芝三萜成分的提取率。同时也未说明其得到的灵芝三萜酸的纯度和药理活性。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服传统提取和超临界提取灵芝中存在的缺陷，提供一种亚临界水提取和分离灵芝三萜提取物的方法，能使用水作为提取溶剂从灵芝中高效快速的提取出灵芝三萜的酸性部位和中性部位，从而得到纯度较高的提取物，经药理实验发现其具有良好的抗氧化活性和抑制肿瘤细胞生长活性。本专利技术所采用的技术方案为一种亚临界水提取和分离灵芝三萜活性提取物的方法，其灵芝活性提取物是由如下步骤制得：1将灵芝子实体粉碎，得到灵芝颗粒；2将步骤1灵芝颗粒，加水，在第一恒定的亚临界压力和温度下提取，过滤，加水冲洗，合并得到滤液Ⅰ；滤液Ⅰ经浓缩，乙醇醇沉，离心，上清液浓缩干燥后得到灵芝三萜酸性部位；3将步骤2提取后的灵芝颗粒，加水，在第二恒定的亚临界压力和温度下提取，过滤，加水冲洗，合并得到滤液Ⅱ；滤液Ⅱ经浓缩，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层浓缩干燥后得到灵芝三萜中性部位。具体参数为：所述步骤1的灵芝颗粒粒度为40～60目；所述步骤2中所述的灵芝颗粒与提取时的水的重量比为1:10，所述的第一恒定的亚临界压力和温度的压力为5MPa，温度为170～190℃，提取时间10min，灵芝颗粒与冲洗时的水的重量比为1:10，滤液Ⅰ经浓缩后相对密度25℃时为1.00～1.10，乙醇浓度为95％，醇沉终浓度为70％，离心时分离因数6000～8000，上清液的浊度为100NTU以下。本专利技术的提取时间短，提取时间仅10min，生产效率高。所述步骤3中所述的灵芝颗粒与提取时的水的重量比为1:10，所述的第二恒定的亚临界压力和温度的压力为8Mpa，温度为240～260℃，提取时间10min，灵芝颗粒与冲洗时的水的重量比为1:10，滤液Ⅱ经浓缩后相对密度25℃时为1.10～1.20，浓缩液与乙酸乙酯体积比为1:1，萃取次数3次。本专利技术的提取时间短，提取时间仅10min，生产效率高。所述步骤2中所得的灵芝三萜酸性部位含量达到25％以上，DPPH清除率的抗氧化活性可达到88.38％，活性高于灵芝醇提取物。所述步骤3中所得的灵芝三萜中性部位物质含量达到14％以上，对人大细胞肺癌细胞H460的半抑制率IC50为95.0μg/ml，对人肝癌细胞HepG2的半抑制率IC50为77.7μg/ml。所述的灵芝为多孔菌科真菌灵芝(Ganodermalucidum(Leyss.exFr.)Karst.)的干燥子实体；所述的水为洁净水，乙醇为95％食用级乙醇，乙酸乙酯为分析纯试剂，纯度99.9％以上。所述步骤2的灵芝三萜酸性部位的灵芝三萜酸类物质含量是以液相色谱进行检测，以灵芝酸A作为对照品，一测多评法计算12种灵芝三萜酸的总量得到的，其12种灵芝三萜酸峰面积占图谱内所有灵芝三萜酸峰面积的70％以上；抗氧化活性以1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)清除率计算。所述步骤3的灵芝三萜中性部位的灵芝甾醇类物质含量是以液相色谱进行检测，以灵芝酮三醇作为对照品，峰面积归一化法计算图谱内所有灵芝的酮醇醛类的总量；肿瘤细胞株系为人大细胞肺癌细胞H460和人肝癌细胞HepG2。本专利技术通过亚临界水提取和分离灵芝三萜活性提取物，使用水作为提取溶剂从灵芝中高效快速的提取出灵芝三萜的酸性部位和中性部位，得到纯度较高的提取物，工艺过程简单，省时、提取效率高，成本较低，经药理实验发现其具有良好的抗氧化活性和抑制肿瘤细胞生长活性。附图说明图1灵芝酸A对照品液相谱图图2灵芝三萜酸性部位供试品液相谱图图3灵芝酮三醇对照品液相谱图图4灵芝三萜中性部位供试品液相谱图具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术做详细说明，以下实施例进一步说明本专利技术的内容，但不应理解为对本专利技术的限制，在不背离本专利技术的精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所做的修改或替换，均属于本专利技术的范围。一种亚临界水提取和分离灵芝三萜提取物的方法，所述的亚临界水提取技术为：常温常压下，水是极性很大的溶剂，它能很好地溶解极性化合物，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种亚临界水提取和分离灵芝三萜提取物的方法，其特征在于：灵芝三萜提取物是由以下步骤提取分离得到的：/n1.1 将灵芝子实体粉碎，得到灵芝颗粒；/n1.2 将1.1灵芝颗粒，加水，在第一恒定的亚临界压力和温度下提取，过滤，加水冲洗，合并得到滤液Ⅰ；滤液Ⅰ经浓缩，乙醇醇沉，离心，上清液浓缩干燥后得到灵芝三萜酸性部位；/n1.3 将1.2提取后的灵芝颗粒，加水，在第二恒定的亚临界压力和温度下提取，过滤，加水冲洗，合并得到滤液Ⅱ；滤液Ⅱ经浓缩，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层浓缩干燥后得到灵芝三萜中性部位。/n

【技术特征摘要】
20200331 CN 20201024234721.一种亚临界水提取和分离灵芝三萜提取物的方法，其特征在于：灵芝三萜提取物是由以下步骤提取分离得到的：
1.1将灵芝子实体粉碎，得到灵芝颗粒；
1.2将1.1灵芝颗粒，加水，在第一恒定的亚临界压力和温度下提取，过滤，加水冲洗，合并得到滤液Ⅰ；滤液Ⅰ经浓缩，乙醇醇沉，离心，上清液浓缩干燥后得到灵芝三萜酸性部位；
1.3将1.2提取后的灵芝颗粒，加水，在第二恒定的亚临界压力和温度下提取，过滤，加水冲洗，合并得到滤液Ⅱ；滤液Ⅱ经浓缩，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层浓缩干燥后得到灵芝三萜中性部位。


2.根据权利要求1所述的一种亚临界水提取和分离灵芝三萜提取物的方法，其特征在于：步骤1.1中所述的灵芝颗粒粒度为40～60目。


3.根据权利要求1所述的一种亚临界水提取和分离灵芝三萜提取物的方法，其特征在于：
步骤1.2中所述的灵芝颗粒与提取时的水的重量比为1:10，所述的第一恒定的亚临界压力和温度的压力为5MPa，温度为170～190℃，提取时间10min，灵芝颗粒与冲洗时的水的重量比为1:10，...

【专利技术属性】
技术研发人员：周岩飞，李晔，姚渭溪，朱忠敏，林真，陈桂秋，吴长辉，许建华，郑光耀，
申请(专利权)人：福建仙芝楼生物科技有限公司，仙芝科技福建股份有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35