一种谷子大斑病早期诊断的方法技术

本发明专利技术公开了一种谷子大斑病早期诊断的方法，属于植物病原真菌分子生物学检测技术领域。该方法根据谷子大斑病菌核糖体ITS基因序列设计出一对特异性引物，利用实时荧光定量PCR对大斑病菌进行定量检测，分析谷子接种后叶片中不同时间点的样本中的大斑病菌的DNA含量动态变化。本发明专利技术建立的谷子大斑病菌荧光定量PCR检测方法具有非常好的特异性和灵敏性，可以检测到谷子叶片中微量谷子大斑病菌，为谷子大斑病菌的准确鉴定和早期诊断等奠定了基础。

A method of early diagnosis of foxtail blotch

【技术实现步骤摘要】
一种谷子大斑病早期诊断的方法
本专利技术属于植物病原真菌分子生物学检测
，尤其涉及一种谷子大斑病早期诊断的方法。
技术介绍
谷子(Setariaitalica)属禾本科、黍族、狗尾草属一年生粮食作物，是我国干旱地区主要栽培作物之一。谷子耐旱、耐脊薄、抗逆性强、适应性广，是很好的抗旱作物。在近几年的谷子病害调查中，在河北的谷子产区发现了一种新的叶斑类病害，该病害可以导致谷子叶片提早衰亡，严重影响后期的谷子灌浆，导致谷子的产量和品质有明显下降，并且在部分地区爆发成灾，对谷子的安全生产造成了很大的威胁。谷子大斑病由狗尾草平脐蠕孢菌(Bipolarissetaria)引起的一种谷子叶部病害。该病害在谷子的整个生育周期内均可发生，通常在谷子的中后期发生较重，尤其是谷子拔节抽穗后症状表现的更为明显。该病主要危害植株叶片部位，一般从植株的底部叶片开始发病，然后逐渐向上蔓延发展。发病初期，谷子大斑病主要症状表现为叶片上有椭圆形、黄色或青灰色的水浸状斑点。在合适的条件下，植株感病后，斑点沿着叶脉迅速增大，形成大小不一的长梭形病斑，呈黄褐色，发病严重本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种谷子大斑病早期诊断的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)提取样本DNA；/n(2)以步骤(1)中提取的DNA为模板，SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示的核苷酸序列为引物组进行PCR；/n(3)对PCR扩增产物进行检测；/n所述SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示的核苷酸序列如下：/nSEQ ID No.4：5’-TCTCTTGGTTCTGGCATCGA-3’；/nSEQ ID No.5：5’-CCCAGCAAGAGGGAGACAA-3’。/n

【技术特征摘要】
1.一种谷子大斑病早期诊断的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取样本DNA；
(2)以步骤(1)中提取的DNA为模板，SEQIDNo.4和SEQIDNo.5所示的核苷酸序列为引物组进行PCR；
(3)对PCR扩增产物进行检测；
所述SEQIDNo.4和SEQIDNo.5所示的核苷酸序列如下：
SEQIDNo.4：5’-TCTCTTGGTTCTGGCATCGA-3’；
SEQIDNo.5：5’-CCCAGCAAGAGGGAGACAA-3’。


2.根据权利要求1所述的谷子大斑病早期诊断的方法，其特征在于，所述步骤(2)中采用25.0μL的PCR反应体系，其中2×EsTaqMasterMix12.5μL，引物浓度都为10μM，加入量各1.0μL，模板DNA1.0μL，ddH2O9.5μL。


3.根据权利要求2所述的谷子大斑病早期诊断的方法，其特征在于，所述步骤(2)中PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃30s，55℃30s，72℃1min，35个循环；72℃延伸10min。


4.根据权利要求1-3任一项所述的谷子大斑病早期诊断的方法，其特征在于，所述步骤(3)中PCR能扩增出194bp的特异性条带则...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志勇，白辉，王永芳，申浩冉，董志平，马继芳，全建章，刘磊，
申请(专利权)人：河北省农林科学院谷子研究所，
类型：发明
国别省市：河北;13