用于检测水稻HIS1基因是否存在BBC类除草剂抗性的分子标记物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测水稻HIS1基因是否存在BBC类除草剂抗性的分子标记物，及其应用，可以快速、高效、准确、方便地鉴定水稻品系HIS1基因中是否存在BBC类除草剂抗性，并鉴定水稻HIS1基因显隐性类型，为BBC类除草剂的使用提供一定的理论依据。本发明专利技术还公开了上述分子标记物在杂交水稻制种中的应用，可大大提高制种纯度，快速、准确、高效的获得真杂交种后代，操作简单，大大解放了劳动力，还可以在“两系法”制种过程中缓解“打摆子”现象，在杂交水稻种子纯度提升以及种质资源创新上都具有重要意义。本发明专利技术还公开了上述分子标记物在转育抗/感BBC类除草剂水稻材料中的应用，适用性广，操作简单，快速，准确。

Molecular markers used to detect the presence of BBC herbicide resistance in rice his1 gene and their application

【技术实现步骤摘要】
用于检测水稻HIS1基因是否存在BBC类除草剂抗性的分子标记物及其应用
本专利技术属于分子标记
，尤其涉及一种用于检测水稻HIS1基因中是否存在28bp缺失的分子标记物，及其该分子标记物在鉴定水稻HIS1基因中是否存在28bp缺失，和该分子标记物在杂交水稻制种中获得真杂交种后代的应用。
技术介绍
水稻(OryzasativaL.)是我国乃至世界上最重要的粮食作物之一，全球有超过35亿人口以水稻作为主食，在农业生产与实践中占有举足轻重的地位。在水稻整个生活周期中，杂草是影响稻米品质的重要因素，杂草与水稻在稻田中共生，互相竞争生长空间和土壤养分，可导致水稻产量降低10％-20％，严重时甚至使水稻减产90％以上。目前，最为经济、快捷、有效的除草方式是化学除草。一种新型的稻田除草剂：双环磺草酮(BBC)除草剂，由日本SDS生物公司研究开发，是一种双环辛烷类白化型三酮类除草剂。作为内吸传导、茎叶喷雾型除草剂，BBC水溶性较低，向下移动性增强，水田外流失减少，对环境的负面影响减轻；其次，BBC具有低毒性、杀草谱宽，药效持久性强的优点，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测水稻HIS1基因是否存在BBC类除草剂抗性的分子标记物，其特征在于，所述分子标记物包括以下序列的正向引物F和反向引物R：/n正向引物F：5’-GTACAACTTGACGATGTATCAAG-3’；/n反向引物R：5’-GTTGAATCTTGCAAATGCAGGAGC-3’。/n

【技术特征摘要】
20191228 CN 20191138509481.一种用于检测水稻HIS1基因是否存在BBC类除草剂抗性的分子标记物，其特征在于，所述分子标记物包括以下序列的正向引物F和反向引物R：
正向引物F：5’-GTACAACTTGACGATGTATCAAG-3’；
反向引物R：5’-GTTGAATCTTGCAAATGCAGGAGC-3’。


2.一种如权利要求1所述的分子标记物在检测水稻HIS1基因是否存在BBC类除草剂抗性或检测水稻HIS1基因显隐性类型的应用。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，具体包括如下步骤：
S1、采用CTAB法提取待鉴定水稻叶片的DNA样本；
S2、以所述步骤S1的DNA样本为模板，用所述的分子标记物进行PCR扩增；
S3、取所述步骤S2后得到的扩增产物进行电泳，读取其片段大小；若扩增出的产物片段为单一的一条182bp条带，表示该水稻HIS1基因为隐性纯合子，则鉴定该水稻HIS1基因不存在BBC类除草剂抗性；若扩增出的产物片段为一条单一的210bp条带，表示该水稻HIS1基因为显性纯合子，则鉴定该水稻HIS1基因存在BBC类除草剂抗性；若扩增出的产物片段包含一条182bp条带和一条210bp条带，表示该水稻HIS1基因为杂合子，则鉴定该水稻HIS1基因存在BBC类除草剂抗性。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，用所述的分子标记物进行PCR扩增的具体操作包括如下步骤：将所述的分子标记物稀释为10mM，配置PCR反应体系：20μLPCR反应体系包含50ng/μL基因组DNA2μL，5μM/mL前后引物各1μL，1.1×PCRMix16μL；PCR反应条件如下：95℃预变性4min；95℃20s，58℃20s，72℃20s，共35个循环；72℃延伸5min。


5.一种权利要求1所述的分子标记物在杂交水稻制种中的应用，其特征在于，所述应用时，采用混播混收的方式或光温敏雄性不育系的“两系法”进行杂交水稻制种，包括如下步骤：首先，采用所述的分子标记物检测水稻父本、母本的HIS1基因是否存在BBC类除草剂抗性，选择一方存在BBC类除草剂抗性、另一方不存在BBC类除草剂抗性的父本、母本进行杂交，然后用BBC类除草剂进行均匀喷洒，以除去对除草剂不具抗性的父本、母本或假杂交种，即获得真杂交种后代。


6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，采用混播混收的方式进行杂交水稻制种时，具体包括如下步骤：首先，采用所述的分子标记物检测水稻父本、母本的HIS1基因是否存在BBC类除草剂抗性，选择母本HIS1基因存在BBC类除草剂抗性、父本HIS1基因不存在BBC类除草剂抗性的水稻品种进行混播，其中母本为不育系，待水稻完成自然授粉后，用BBC类除草剂对父本、母本水稻植株进行均匀喷洒，以除去对BBC类除草剂不具抗性的父本，存活的母本水稻植株上结出的后代即为真杂交种后代。


7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，采用混播混收的方式进行杂交水稻制种时，采用的母本中，两系杂交稻母本包括033S、1892S、33S、66S、99S、GD-1S、GD-7S、N111S、N5088S、Y58S、创5S、德S、凤S、福龙S2、广湘24S、广占63-4S、华68S、简S、建S、晶4155S、隆科638S、绿敏S、孟S、梦S、培矮64S、深08S、谭农S、天安S、天源6S、望S、新安S、新华S、星光S、宣69S和株1S中的任意一种或几种；
三系杂交稻母本：Ⅱ-32A、D62A、F32A、K17A、Q1A、Q4A、Q6A、T98A、V20A、安丰A、奥富A、炳1A、博ⅡA、博ⅢA、博A、昌丰A、川106A、川谷A、川农1A、川农2A、川农3A、川农4A、川香29A、春江12A、春江16A、丰田1A、丰源A、福香1A、福伊A、赣香A、冈46A、冈48A、冈901A、冈香1A、谷丰A、广8A、广和A、广抗13A、恒丰A、洪A、沪旱1A、健645A、金23A、金谷A、旌3A、旌7A、旌香1A、科113A、科20A、科金A、龙特浦A、隆香634A、泸98A、泸香618A、泸香618A、珞红3A、珞红4A、绿永A、绵2A、绵5A、绵7A、绵香1A、内香2A、内香3A、内香5A、内香7A、内香8A、荃9311A、荣丰A、蓉18A、深97A、神9A、神农2A、蜀21A、蜀8A、泰3A、泰丰A、天丰A、万23A、万73A、万8A、万9A、万金A、五丰A、湘8A、湘丰70A、协青早A、欣荣A、新IIA、宜香1A、元丰A、岳4A、粤泰A、云109A、珍汕97A、中2A、中3A和中9A中的任意一种或几种；
采用的父本包括西恢18号、鉴真2号、德恢381、福恢2098、中组3号、IR64、盐恢559、桂582、宜恢3551、成恢727、明恢73、HR1128、苏恢728、珍珠早、宜恢2308、泉恢039、金航丝苗、华恢352、华恢118、叶青伦、宜恢1313、辐恢838、金早47、镇恢084、镇恢42、泸恢H103、内恢94-11、泉恢131、明恢100、绵恢725、杭959、南丰糯、内恢2539、福恢5138、绵恢2040、绵恢9939、南特号、蜀恢202、多系1号、明恢77、广恢3550、绵恢146、湘早籼13、蜀恢204、宜恢1577、明恢67、广恢312、多系一号、明恢63、雅恢2115、绵恢3724、红410、广恢122、蜀恢498、湘晚籼9号、蜀恢707、绵恢501、晋南晚、青小金早、川恢907、窄叶青8号、锡利贡米、南恢445、明恢2155、余赤231-8、温恢689、团结1号、R527、蜀恢203、明恢82、密阳23、奥R15、成都矮8号、涪恢9801、成恢19、明恢78、湘早籼13号、奥R69、桂朝13、绵恢9937、乐恢188、明恢1273、胜优2号、云恢310、广二104、德恢3485、川航恢1618、南恢115、川农422、云恢68、胜利籼、宜恢3003、泸恢615、亚恢627、广二石、昌丰B、湘晚籼13号、黔恢1385、南恢716、菲恢6号、红南、地谷、七桂早25、黔恢489、南恢1659、闽恢3301、八四矮63、IR36、雷火占、黔恢104、福恢676、常恢117、矮沱谷151、CDR22、鄂中5号、绵恢2009、南恢183、万恢88和IR56中的任意一种或几种。


8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，采用光温敏雄性不育系的“两系法”进行杂交水稻制种时，具体包括如下步骤：首先，采用所述的分子标记物检测水稻父本、母本HIS1基因是否存在BBC类除草剂抗性，选择母本HIS1基因不存在BBC类除草剂抗性、父本HIS1基因存在BBC类除草剂抗性的水稻品种进行杂交，其中父本、母本的HIS1基因均为纯合子，正常收获F1代种子进行种植，用BBC类除草剂对F1代植株进行均匀喷洒，以除去因温度不稳定导致母本自交接种的后代，即获...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕启明，张秀丽，赵炳然，唐丽，韶也，毛毕刚，黄志远，
申请(专利权)人：湖南杂交水稻研究中心，
类型：发明
国别省市：湖南;43