一种先天性骨髓衰竭性疾病基因分型的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种先天性骨髓衰竭性疾病基因分型的检测方法，包括以下步骤：a.利用二代测序对样本进行检测；b.将测序结果分为基因型明确和基因型不明确；c.对基因型不明确的样本进行RT‑PCR、单细胞单点突变验证和微量蛋白检测，明确基因分型。本发明专利技术为临床解决先天性骨髓衰竭性疾病的基因分型治疗提供快速准确及有效的检测手段，为IBMFS患儿的后期治疗及临床预后提供依据；本发明专利技术提高了此类疾病总体的诊断水平，并可为其他系统遗传性疾病的诊断提供可参考方法。

A method for genotyping of congenital bone marrow failure

【技术实现步骤摘要】
一种先天性骨髓衰竭性疾病基因分型的检测方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种先天性骨髓衰竭性疾病基因分型的检测方法。
技术介绍
先天性骨髓衰竭综合征（Inheritedbonemarrowfailuresyndromes,IBMFS）是一组以骨髓衰竭、先天畸形及易发生肿瘤为主要表现的疾病的总称。IBMFS包括范可尼贫血（Fanconianemia,FA）、先天性角化不良（dyskeratosiscongenita,DC）、先天性胰腺脂肪过多症（Shwachman-diamondsyndrome,SDS）、无巨核细胞性血小板减少（Amegakaryocyticthrombocytopenia）、先天性纯红细胞再生障碍性贫血（diamond-blackfananemia,DBA）、网状组织发育不良（reticulardysgenesis）、家族性再生障碍性贫血（Familialaplasticanemia）、伴桡骨缺失的血小板减少症（TAR）、严重的先天性中性粒细胞减少症等。诊断这些疾病的重要依据是较典型的临床表现、家族史、染色体断裂实验、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种先天性骨髓衰竭性疾病基因分型的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：/na. 利用二代测序对样本进行检测；/nb. 将测序结果分为基因型明确和基因型不明确；/nc. 对基因型不明确的样本进行RT-PCR、单细胞单点突变验证和微量蛋白检测，明确基因分型。/n

【技术特征摘要】
1.一种先天性骨髓衰竭性疾病基因分型的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
a.利用二代测序对样本进行检测；
b.将测序结果分为基因型明确和基因型不明确；
c.对基因型不明确的样本进行RT-PCR、单细胞单点突变验证和微量蛋白检测，明确基因分型。


2.根据权利要求1所述的一种先天性骨髓衰竭性疾病基因分型的检测方法，其特征在于：步骤c中，同时设定正常对照组和基因型明确对照组。


3.根据权利要求1所述的一种先天性骨髓衰竭性疾病基因分型的检测方法，其特征在于：步骤c中，单细胞DNA扩增及Sanger测序方法如下：
a.利用荧光激活细胞分选术将外周血淋巴细胞分到96孔板中；
b.利用单细胞DNA扩增试剂盒对细胞进行DNA扩增；
c.用已知突变位点引物进行扩增后，利用Sanger测序技术进行突变位点分析。


4.根据权利要求1所述的一种先天性骨髓衰竭性疾病基因分型的检测方法，其特征在于：步骤c中，毛细胞免疫电泳进行微量蛋白检测方法如下：
a.在6孔板的每个孔中分别培养外周血淋巴细胞，分为2组，每组3个孔，一组加入丝裂霉素C，另一组不加丝裂霉素C，培养18小时；
b.所有细胞加入细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：竺晓凡，常丽贤，袁卫平，邹尧，刘晓明，阮敏，初雅静，
申请(专利权)人：中国医学科学院血液病医院中国医学科学院血液学研究所，
类型：发明
国别省市：天津;12