高纯度鱼精蛋白硫酸盐制造技术

含有包含特定序列的肽的4种主要成分和至少1种副成分的鱼精蛋白硫酸盐为高纯度，可以提供作为医药品用的鱼精蛋白硫酸盐的高纯度鱼精蛋白。

High purity protamine sulfate

【技术实现步骤摘要】
高纯度鱼精蛋白硫酸盐
本专利技术涉及一种鱼精蛋白硫酸盐。根据本专利技术，可以将高纯度的鱼精蛋白硫酸盐用于医药品、食品或化妆品等中。
技术介绍
鱼精蛋白是鲱鱼或鲑鱼等鱼类或鸡等脊椎动物的成熟精子核中存在的分子量4000～8500Da的碱性蛋白质，作为医药品或食品、化妆品等的抗菌剂在全世界被广泛使用。特别是医药品中，可以作为肝素拮抗药或使胰岛素作用持续的胰岛素制剂中的添加剂使用(专利文献1、非专利文献1)。现有技术文献专利文献专利文献1：第9664685号美国专利非专利文献非专利文献1：ProteinExpressionAndPurification(美国)1990年，第1卷，p.127-133。
技术实现思路
专利技术要解决的问题本专利技术的目的在于提供可以在医药品中使用的高纯度的鱼精蛋白硫酸盐。解决问题的手段本专利技术人对可以在医药品中使用的高纯度的鱼精蛋白硫酸盐进行了深刻研究，结果发现：令人吃惊的是，含有4种主要成分和副成分的鱼精蛋白硫酸盐为高纯度，作为医药品用的鱼精蛋白硫酸盐是有用的。本专利技术是基于以上见解得到的。因此，本专利技术涉及：[1]一种鱼精蛋白硫酸盐，其为含有由序列号1表示的氨基酸序列组成的肽A、由序列号2表示的氨基酸序列组成的肽B、由序列号3表示的氨基酸序列组成的肽C以及由序列号4表示的氨基酸序列组成的肽D作为主要成分，且进一步含有至少1种副成分的鱼精蛋白硫酸盐，将所述鱼精蛋白硫酸盐在下述HPLC条件下进行分析时，所述副成分为以下述式：相对保留时间＝副成分的保留时间(分)/肽D的保留时间(分)得到的相对于肽D的副成分的相对保留时间(RRT)为0.75～0.87的肽T、0.84～0.96的肽U、0.85～0.99的肽V、0.89～1.02的肽W、1.09～1.24的肽X、1.21～1.37的肽Y或1.25～1.41的肽Z；HPLC条件柱子：Phenomenex公司制JupiterC18(载体粒径5μm柱内径4.6mm、柱长250mm)流动相A：0.1mol/LNaH2PO4(pH1.8)流动相B：0.1mol/LNaH2PO4/6.5％乙腈(pH1.8)分离条件：流动相速度：1.0mL/min测定波长：214nm测定时间：25min柱温：50℃附近的恒温。[2]根据[1]中所述的鱼精蛋白硫酸盐，其中所述鱼精蛋白硫酸盐含有肽T、肽U、肽V、肽W、肽X、肽Y以及肽Z。[3]根据[1]或[2]中所述的鱼精蛋白硫酸盐，其中所述肽X为含有序列号5表示的氨基酸的肽。[4]根据[1]～[3]的任一项所述的鱼精蛋白硫酸盐，其中所述鱼精蛋白硫酸盐来源于鲑目(Salmoniformes)所属的鱼种的鱼白。[5]根据[1]～[4]的任一项所述的鱼精蛋白硫酸盐，其中所述鲑目(Salmoniformes)所属的鱼种为大西洋鲑、虹鳟、银鲑、帝王鲑(キングサーモン)、红鲑(ベニザケ)、大麻哈鱼(カラフトマス)、樱鳟、白鲑(シロサケ)、五月鳟(サツキマス)、褐鳟(ブラウントラウト)以及它们的人工交配种类；以及[6]根据[1]～[5]的任一项所述的鱼精蛋白硫酸盐，其中在所述HPLC分析时，所述4种主要成分以及7种副成分的总计为98％以上。专利技术效果本专利技术的鱼精蛋白硫酸盐为高纯度，因此作为肝素拮抗药或胰岛素制剂中的添加剂稳定，而且可以安全地使用。附图说明图1是表示鱼精蛋白硫酸盐中含有的主要成分A～D以及副成分T～Z的根据HPLC的分析结果的图。具体实施方式本专利技术的鱼精蛋白硫酸含有由序列号1表示的氨基酸序列组成的肽A、由序列号2表示的氨基酸序列组成的肽B、由序列号3表示的氨基酸序列组成的肽C以及由序列号4表示的氨基酸序列组成的肽D作为主要成分，而且进一步含有至少1种副成分。将所述鱼精蛋白硫酸盐在特定的HPLC条件下进行分析时，所述副成分为以下述式：相对保留时间＝副成分的保留时间(分)/肽D的保留时间(分)得到的相对于肽D的副成分的相对保留时间(RRT)为0.75～0.87的肽T、0.84～0.96的肽U、0.85～0.99的肽V、0.89～1.02的肽W、1.09～1.24的肽X、1.21～1.37的肽Y或1.25～1.41的肽Z。鱼精蛋白硫酸盐为含有很多精氨酸的分子量4000～5000Da的高碱性蛋白质的混合物，且含有4种主要成分与1种或多种副成分。主要成分本专利技术的鱼精蛋白硫酸盐的主要成分为具有“PRRRRRSSSRPIRRRRRPRASRRRRRGGRRRR”(序列号1)的氨基酸序列的肽A、具有“PRRRRSSRRPVRRRRRPRVSRRRRRRGGRRRR”(序列号2)的氨基酸序列的肽B、具有“PRRRRSSSRPVRRRRRPRVSRRRRRRGGRRRR”(序列号3)的氨基酸序列的肽C以及具有“PRRRRASRRIRRRRRPRVSRRRRRGGRRRR”(序列号4)的氨基酸序列的肽D。各肽的含量没有限定，但肽B的含量最多，肽C以及肽D的含量相同，肽A的含量最少。副成分本专利技术的鱼精蛋白硫酸盐的副成分为选自由肽T、肽U、肽V、肽W、肽X、肽Y以及肽Z构成的组的至少1种的肽。肽T～Z的分子量为约4000～5000Da。本专利技术的鱼精蛋白硫酸盐可以含有肽T、肽U、肽V、肽W、肽X、肽Y以及肽Z中的1种的肽，也可以含有其中的任意2种肽的组合，也可以含有其中的任意3种肽的组合，也可以含有其中的任意4种肽的组合，也可以含有其中的任意5种肽的组合，也可以含有其中的任意6种肽的组合，也可以含有其中的7种肽的组合，但最优选为含有其中的7种肽的组合的鱼精蛋白硫酸盐。另外，肽X为含有(S/P)RR(R/I/V)XA(S/G)GR(P/I)RVSRRPRV(G/V)GRRRX(G/R)GGR(序列号5)的氨基酸序列的肽。本专利技术的鱼精蛋白硫酸盐没有特别的限定，但用HPLC分析时，所述4种主要成分以及7种副成分的总计优选为98％以上，更优选为98.5％以上，进一步优选为99％以上，最优选为99.5％以上。肽A的含量没有限定，但为12.64％～16.84％，肽B的含量没有限定，但为28.69～38.12％，肽C的含量没有限定，但为21.45～26.22％，肽D的含量没有限定，但为19.69～24.50％，肽T的含量没有限定，但为3.27％以下，肽U的含量没有限定，但为1.85％以下，肽V的含量没有限定，但为2.36％以下，肽W的含量没有限定，但为2.75％以下，肽X的含量没有限定，但为2.31％以下，肽Y的含量没有限定，但为0.76％以下，而且肽Z的含量没有限定，但为1.66％以下。HPLC中各肽的保留时间主要成分及副成分的HPLC分析时的保留时间可以在下述的HPLC条件下得到。HPLC条件本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鱼精蛋白硫酸盐，其为含有由序列号1表示的氨基酸序列组成的肽A、由序列号2表示的氨基酸序列组成的肽B、由序列号3表示的氨基酸序列组成的肽C以及由序列号4表示的氨基酸序列组成的肽D作为主要成分，且进一步含有至少1种副成分的鱼精蛋白硫酸盐，/n将所述鱼精蛋白硫酸盐在下述HPLC条件下进行分析时，所述副成分为以下述式：/n相对保留时间＝副成分的保留时间(分)/肽D的保留时间(分)/n得到的相对于肽D的副成分的相对保留时间(RRT)为0.75～0.87的肽T、0.84～0.96的肽U、0.85～0.99的肽V、0.89～1.02的肽W、1.09～1.24的肽X、1.21～1.37的肽Y或1.25～1.41的肽Z；/nHPLC条件/n柱子：Phenomenex公司制Jupiter C18，载体粒径5μm，

【技术特征摘要】
20200123 JP 2020-0094781.一种鱼精蛋白硫酸盐，其为含有由序列号1表示的氨基酸序列组成的肽A、由序列号2表示的氨基酸序列组成的肽B、由序列号3表示的氨基酸序列组成的肽C以及由序列号4表示的氨基酸序列组成的肽D作为主要成分，且进一步含有至少1种副成分的鱼精蛋白硫酸盐，
将所述鱼精蛋白硫酸盐在下述HPLC条件下进行分析时，所述副成分为以下述式：
相对保留时间＝副成分的保留时间(分)/肽D的保留时间(分)
得到的相对于肽D的副成分的相对保留时间(RRT)为0.75～0.87的肽T、0.84～0.96的肽U、0.85～0.99的肽V、0.89～1.02的肽W、1.09～1.24的肽X、1.21～1.37的肽Y或1.25～1.41的肽Z；
HPLC条件
柱子：Phenomenex公司制JupiterC18，载体粒径5μm，柱内径4.6mm、柱长250mm
流动相A：0.1mol/LNaH2PO4，pH1.8
流动相B：0.1mol/LNaH2P...

【专利技术属性】
技术研发人员：武佳和，
申请(专利权)人：有机合成药品工业株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP