用于调节肿瘤微环境的TLR-9激动剂制造技术

一种用于治疗肿瘤疾病、特别是结肠癌，及用于调节肿瘤微环境的TLR‑9激动剂。

TLR-9 agonist for regulating tumor microenvironment

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于调节肿瘤微环境的TLR-9激动剂
本专利技术涉及肿瘤疗法的领域，特别是涉及治疗实体肿瘤的领域，更特别是涉及在人类中治疗结肠癌。本专利技术进一步涉及TLR-9激动剂的领域及其于治疗所述肿瘤疾病的用途。在本专利技术的又另一方面中，其涉及调节肿瘤(特别是实体肿瘤)的肿瘤微环境，及由此支持肿瘤疗法的领域。
技术介绍
肿瘤微环境(TME)为其中存在肿瘤的细胞环境，包括周围血管、免疫细胞、纤维母细胞、骨髓衍生的炎性细胞、淋巴细胞、信号传导分子及胞外基质。肿瘤与周围微环境密切相关且持续地相互作用。肿瘤可通过释放细胞外信号、促进肿瘤血管生成及诱导周边免疫耐受性而影响微环境，同时微环境中的免疫细胞可影响癌细胞的生长及演化。历史上，患者中黑色素瘤特异性T细胞的发现导致过继性转移大量体外扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的策略，其已经证实免疫系统具有控制癌症能力。然而，利用TIL的过继性T细胞疗法(ACT)尚未具有利用病毒特异性CD8+T细胞的ACT的成效。实体癌症的TME似乎基本上与白血病的TME不同，在白血病中利用嵌合抗原受体T细胞的临床ACT试验已展现效力。肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)为穿透肿瘤(即浸润至肿瘤中)的淋巴细胞。临床前小鼠研究指示接近癌细胞的T细胞累积受到限制，克服此限制显示增强的抗肿瘤效果。T细胞经由循环系统到达肿瘤位点。TME似乎优先自该系统招募其他免疫细胞，而非T细胞。一个此种机制为释放细胞类型特异性趋化因子。另一个为TME翻译后改变趋化因子的能力。因此，本领域技术人员已知TIL涉及杀死肿瘤细胞，且肿瘤中淋巴细胞的存在通常与更好的临床结果相关联。肿瘤相关巨噬细胞(TAM)主要源自肿瘤周围组织或骨髓且可分成两种主要类型：M1及M2。特别地，M1巨噬细胞具有抗肿瘤性质。因此，M2巨噬细胞转变为M1巨噬细胞或M1巨噬细胞的优先浸润有利于抗肿瘤免疫反应。因此，进一步需要鉴别调节TME以改良肿瘤疗法的手段及方法。特别地，需要刺激TIL(特别是T细胞，诸如CD3+T细胞)及巨噬细胞的浸润至肿瘤中及由此支持肿瘤疗法的进一步改良的方法及措施。
技术实现思路
在一实施方式中，通过提供一种用于在有需要的对象中治疗肿瘤疾病、优选结肠癌的TLR-9激动剂来解决此目的，所述TLR-9激动剂包含i.包含至少一个未甲基化CG二核苷酸的寡脱氧核糖核苷酸，其中C为脱氧胞苷及G为脱氧鸟苷，及ii.至少三个、特别是四个连续脱氧鸟苷的至少一个片段，且寡脱氧核糖核苷酸的脱氧核糖部分通过磷酸二酯键相连，其中用所述TLR-9激动剂的治疗刺激CD3+T细胞浸润至肿瘤中。在一优选实施方式中，浸润的CD3+T细胞为CD4+或CD8+T细胞，在一更优选实施方式中为CD8+T细胞。在另一优选实施方式中，用所述TLR-9激动剂的治疗导致在肿瘤中的CD8+T细胞群体内的细胞毒性效应T细胞(CD8+CD69+颗粒酶(Granzyme，Grz)B+)的频率增加。细胞毒性效应T细胞的群体(CD8+CD69+颗粒酶B+)也可称为具有溶细胞潜力的活化的CD8+T细胞，即此细胞群体优先具有抗肿瘤发生潜力。在另一优选实施方式中，用所述TLR-9激动剂的治疗导致CD8+T细胞(优选细胞毒性效应T细胞(CD8+CD69+颗粒酶B+))与调节T细胞的比率增加。调节T细胞具有促肿瘤发生潜力。调节T细胞可抑制T细胞的抗肿瘤效应，例如，通过分泌抑制性细胞因子，除去IL-2或通过于其表面上表达的抑制性分子(例如CTLA-4)。由此，一个目的为用所述TLR-9激动剂的治疗是用于刺激CD3+T细胞的浸润至肿瘤中。在一优选实施方式中，用所述TLR-9激动剂的治疗是用于提高肿瘤中的CD8+T细胞群体内的细胞毒性效应T细胞(CD8+CD69+颗粒酶(Grz)B+)的频率和/或用于提高CD8+T细胞(优选细胞毒性效应T细胞(CD8+CD69+颗粒酶B+))与调节T细胞的比率。在一实施方式中，肿瘤在其周边和/或其中心浸润，优选在其中心浸润。由此，一个目的为用所述TLR-9激动剂的治疗是用于在其周边和/或其中心(优选在其中心)浸润肿瘤。在一实施方式中，肿瘤为实体肿瘤，优选结肠癌，及待治疗的对象为人类。进一步通过应用用于增加CD3+T细胞(优选CD8+T细胞)至肿瘤(优选结肠癌)中的浸润的方法来解决本专利技术的目的，其包括向有此需要的患者施用TLR-9激动剂，其中所述TLR-9激动剂包含i.包含至少一个未甲基化CG二核苷酸的寡脱氧核糖核苷酸，其中C为脱氧胞苷及G为脱氧鸟苷，及ii.至少三个、特别是四个连续脱氧鸟苷的至少一个片段，且其中所述寡脱氧核糖核苷酸的脱氧核糖部分通过磷酸二酯键相连。在另一实施方式中，所述方法用于提高肿瘤中的CD8+T细胞群体内的细胞毒性效应T细胞(CD8+CD69+颗粒酶B+)的频率。在另一实施方式中，所述方法用于提高CD8+T细胞(优选细胞毒性效应T细胞(CD8+CD69+颗粒酶B+))与调节T细胞的比率。本专利技术人等已发现所述TLR-9激动剂可导致T细胞转运至肿瘤的增加。由此，TME和/或肿瘤中的T细胞的局部浓度提高，即T细胞累积于肿瘤附近并浸润至其中，因此T细胞受TME的限制似乎得到克服。因此，T细胞可展现其抗肿瘤效应。因此，在本专利技术的一特定方面中，使用TLR-9激动剂来提高CD3+T细胞(优选CD8+T细胞)的效力。在另一实施方式中，通过提供一种用于在有此需要的对象中治疗肿瘤疾病(优选结肠癌)的TLR-9激动剂来解决本专利技术的目的，所述TLR-9激动剂包含i.包含至少一个未甲基化CG二核苷酸的寡脱氧核糖核苷酸，其中C为脱氧胞苷及G为脱氧鸟苷，及ii.至少三个、特别是四个连续脱氧鸟苷的至少一个片段，且所述寡脱氧核糖核苷酸的脱氧核糖部分通过磷酸二酯键相连，其中用所述TLR-9激动剂的治疗刺激巨噬细胞(优选M1巨噬细胞)浸润至肿瘤中和/或用所述TLR-9激动剂的治疗导致肿瘤内M1巨噬细胞与M2巨噬细胞的比率增加。由此，一个目的为用所述TLR-9激动剂的治疗是用于刺激巨噬细胞(优选M1巨噬细胞)浸润至肿瘤中和/或用所述TLR-9激动剂的治疗是用于增加肿瘤内M1巨噬细胞与M2巨噬细胞的比率。优选地，肿瘤被CD3+T细胞和/或经巨噬细胞(优选M1巨噬细胞)的浸润与没有TLR-9激动剂的治疗的浸润相比受到刺激和/或肿瘤内M1巨噬细胞与M2巨噬细胞的比率与没有TLR-9激动剂的治疗的M1巨噬细胞与M2巨噬细胞的比率相比增加。在另一实施方式中，通过应用用于增加巨噬细胞(优选M1巨噬细胞)浸润至肿瘤(优选结肠癌)中、和/或用来增加肿瘤(优选结肠癌)内M1巨噬细胞与M2巨噬细胞的比率的方法来解决本专利技术的目的，其包括向有此需要的患者施用TLR-9激动剂，其中所述TLR-9激动剂包含i.包含至少一个未甲基化CG二核苷酸的寡脱氧核糖核苷酸，其中C为脱氧胞苷及G为脱氧鸟苷，且ii.至少三个、特别是四个连续脱氧鸟苷的至少一个片本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于在有此需要的对象中治疗肿瘤疾病、优选结肠癌的TLR-9激动剂，所述TLR-9激动剂包含/ni.包含至少一个未甲基化CG二核苷酸的寡脱氧核糖核苷酸，其中C为脱氧胞苷及G为脱氧鸟苷，及/nii.至少三个、特别是四个连续脱氧鸟苷的至少一个片段，/n所述寡脱氧核糖核苷酸的脱氧核糖部分通过磷酸二酯键相连，且所述寡脱氧核糖核苷酸包含至少一个呈L-构型的核苷酸，优选地，所述至少一个呈L-构型的核苷酸包含在所述寡脱氧核糖核苷酸的至少一端的末端五个核苷酸内，优选在所述寡脱氧核糖核苷酸的3’端的末端五个核苷酸内，其中用所述TLR-9激动剂的治疗刺激CD3+T细胞浸润至肿瘤中和/或刺激巨噬细胞，优选M1巨噬细胞浸润至肿瘤中和/或导致肿瘤内M1巨噬细胞与M2巨噬细胞的比率增加。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170831 EP 17001465.8;20180115 EP 18151734.31.一种用于在有此需要的对象中治疗肿瘤疾病、优选结肠癌的TLR-9激动剂，所述TLR-9激动剂包含
i.包含至少一个未甲基化CG二核苷酸的寡脱氧核糖核苷酸，其中C为脱氧胞苷及G为脱氧鸟苷，及
ii.至少三个、特别是四个连续脱氧鸟苷的至少一个片段，
所述寡脱氧核糖核苷酸的脱氧核糖部分通过磷酸二酯键相连，且所述寡脱氧核糖核苷酸包含至少一个呈L-构型的核苷酸，优选地，所述至少一个呈L-构型的核苷酸包含在所述寡脱氧核糖核苷酸的至少一端的末端五个核苷酸内，优选在所述寡脱氧核糖核苷酸的3’端的末端五个核苷酸内，其中用所述TLR-9激动剂的治疗刺激CD3+T细胞浸润至肿瘤中和/或刺激巨噬细胞，优选M1巨噬细胞浸润至肿瘤中和/或导致肿瘤内M1巨噬细胞与M2巨噬细胞的比率增加。


2.根据权利要求1的用于所述用途的TLR-9激动剂，其中肿瘤被CD3+T细胞和/或被巨噬细胞，优选M1巨噬细胞的浸润与没有用TLR-9激动剂的治疗的浸润相比受到刺激和/或肿瘤内M1巨噬细胞与M2巨噬细胞的比率与没有用TLR-9激动剂的治疗的M1巨噬细胞与M2巨噬细胞的比率相比增加。


3.根据权利要求1或2的用于所述用途的TLR-9激动剂，其中所述CD3+T细胞为CD4+或CD8+T细胞，优选CD8+T细胞。


4.根据权利要求3的用于所述用途的TLR-9激动剂，其中用所述TLR-9激动剂的治疗导致在肿瘤中的CD8+T细胞群体内的细胞毒性效应T细胞(CD8+CD69+颗粒酶B+)的频率增加和/或导致CD8+T细胞，优选细胞毒性效应T细胞(CD8+CD69+颗粒酶B+)与调节T细胞的比率增加。


5.根据先前权利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激动剂，其中所述肿瘤在其周边和/或其中心被浸润，优选在其中心被浸润。


6.根据先前权利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激动剂，其中所述肿瘤为实体肿瘤，优选结肠癌，及待治疗的所述对象为人类。


7.根据先前权利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激动剂，其中所述TLR-9激动剂被肿瘤内施用或皮下施用。


8.根据先前权利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激动剂，其中所述至少一个CG二核苷酸为序列N1N2CGN3N4的部分，其中N1N2为AA、TT、GG、GT、GA或AT及N3N4为CT、TT、TG或GG及C为脱氧胞苷，G为脱氧鸟苷，A为脱氧腺苷，及T为脱氧胸苷。


9.根据先前权利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激动剂，其中所述寡脱氧核糖核苷酸包含至少三个CG二核苷酸。


10.根据先前权利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激动剂，其中所述寡脱氧核糖核苷酸为单链的和/或部分或完全双链的。


11.根据先前权利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激动剂，其具有SEQIDNO：5至SEQIDNO：14的任意的序列，优选具有SEQIDNO：5的序列。


12.根据先前权利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激动剂，其中，待治疗的所述对象先前已接受和/或随后接受另一癌症治疗，优选为化学治疗剂和/或检查点抑制剂。


13.根据先前权利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激动剂，其中用所述TLR-9激动剂的治疗导致冷肿瘤转变为热肿瘤。


14.一种用于将冷肿瘤转变为热肿瘤的TLR-9激动剂，...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·卡普，M·施密特，
申请(专利权)人：莫洛根股份公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE