一种痰热清注射液中熊胆粉超高效液相色谱测定法制造技术

本发明专利技术涉及一种痰热清注射液中熊胆粉超高效液相色谱测定法，步骤包括：S1、制备对照品溶液；S2、制备供试品溶液；S3、限量检测。还涉及一种如前所述痰热清注射液中熊胆粉超高效液相色谱测定法得到的指纹图谱，所述指纹图谱中共有4个特征峰，各峰以熊去氧胆酸峰为参比峰。本发明专利技术的超高效液相色谱测定法对供试品的前处理方法简单，具有操作简便、结果稳定、重现性好、精密度高、通用性广等优点；本发明专利技术的超高效液相色谱测定法是通过计算供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度，准确高效全面监控产品质量同时鉴别产品真伪。

Determination of bear bile powder in Tanreqing Injection by ultra high performance liquid chromatography

【技术实现步骤摘要】
一种痰热清注射液中熊胆粉超高效液相色谱测定法
本专利技术涉及药物分析检测
，尤其涉及一种痰热清注射液中熊胆粉超高效液相色谱测定法。
技术介绍
熊胆粉是痰热清注射液中主要药味，其以熊胆粉提取物投料，物质基础研究发现熊胆粉提取物的主要成分为熊去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、鹅去氧胆酸和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸等，因此本研究采用超高效液相色谱法新建特征图谱用于监测注射液中的熊胆粉成分的质量。熊去氧胆酸为熊胆粉提取物的主要成分之一，含量占注射液中熊胆粉提取物总量的75％，且其含量非常稳定，33批注射液中熊去氧胆酸含量的RSD仅4.9％，另外其色谱峰的保留时间适中，因此选其作为参照物。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种痰热清注射液中熊胆粉超高效液相色谱测定法。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是：提供一种痰热清注射液中熊胆粉超高效液相色谱测定法，步骤包括：S1、制备对照品溶液：取熊去氧胆酸对照品，加入甲醇溶解并稀释成熊去氧胆酸浓度为4.0mg/mL的溶液，作为对照品溶液；S2、制备供试品溶液：提供不同批次的痰热清注射液10mL，精密加入0.08％乙酸乙腈10mL，混匀，加入氯化钠5g，振摇2min，离心5min，转速为4000转/分钟，取上清液，作为供试品溶液；S3、限量检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入超高效液相色谱仪进行测定，色谱测定条件为：采用ACQUITYUPLCBEHC18(Waters，0.3×10cm，1.7μm)作为色谱柱；采用乙腈-0.1％磷酸作为流动相，梯度洗脱，其洗脱时间与流动相体积分别为：0min，乙腈20％，0.1％磷酸80％；1min，乙腈38％，0.1％磷酸62％；3min，乙腈38％，0.1％磷酸62％；5min，乙腈50％，0.1％磷酸50％；10min，乙腈50％，0.1％磷酸50％；其中，理论板数按熊去氧胆酸峰计算应不低于10000；其中，供试品指纹图谱与对照品指纹图谱经相似度计算，6min后色谱峰的相似度不低于0.90。优选地，所述色谱测定条件还包括：柱温为30～40℃。优选地，所述色谱测定条件还包括：检测波长为200～400nm。优选地，所述检测波长为203nm。优选地，所述色谱测定条件还包括：流速为0.5～0.7mL/min。优选地，所述色谱测定条件还包括：进样量为3～7μL。优选地，所述进样量为5μL。还提供一种如前所述痰热清注射液中熊胆粉超高效液相色谱测定法得到的指纹图谱，所述指纹图谱中共有4个特征峰，各峰以熊去氧胆酸峰为参比峰的相对保留时间为：鹅去氧胆酸峰为1.379～1.384；3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸峰为1.117～1.120；7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸峰为1.465～1.469。本专利技术采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：本专利技术的超高效液相色谱测定法对供试品的前处理方法简单，具有操作简便、结果稳定、重现性好、精密度高、通用性广等优点；本专利技术的超高效液相色谱测定法是通过计算供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度，准确高效全面监控产品质量同时鉴别产品真伪。附图说明图1为实施例1得到的痰热清注射液中熊胆粉的对照指纹图谱；其中，峰1为熊去氧胆酸；峰2为3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸；峰3为鹅去氧胆酸；峰4为7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸；图2为实施例1得到的痰热清注射液中熊胆粉指纹图谱叠加图；图3为实施例2得到的痰热清注射液中熊胆粉精密度考察的指纹图谱；图4为实施例3得到的痰热清注射液中熊胆粉重复性考察的指纹图谱；图5为实施例4得到的痰热清注射液中熊胆粉稳定性考察的指纹图谱；图6为实施例5得到的痰热清注射液中熊胆粉5μL进样量时指纹图谱。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。需要说明的是，在不冲突的情况下，本专利技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，但不作为本专利技术的限定。实施例1提供一种痰热清注射液中熊胆粉超高效液相色谱测定法，步骤包括：S1、制备对照品溶液：取熊去氧胆酸对照品，加入甲醇溶解并稀释成熊去氧胆酸浓度为4.0mg/mL的溶液，作为对照品溶液；S2、制备供试品溶液：提供不同批次的痰热清注射液10mL，精密加入0.08％乙酸乙腈10mL，混匀，加入氯化钠5g，振摇2min，离心5min，转速为4000转/分钟，取上清液，作为供试品溶液；S3、限量检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入超高效液相色谱仪进行测定，色谱测定条件为：采用ACQUITYUPLCBEHC18(Waters，0.3×10cm，1.7μm)作为色谱柱；采用乙腈-0.1％磷酸作为流动相，梯度洗脱，其洗脱时间与流动相体积分别为：0min，乙腈20％，0.1％磷酸80％；1min，乙腈38％，0.1％磷酸62％；3min，乙腈38％，0.1％磷酸62％；5min，乙腈50％，0.1％磷酸50％；10min，乙腈50％，0.1％磷酸50％；其中，供试品指纹图谱与对照品指纹图谱经相似度计算，6min后色谱峰的相似度不低于0.90。优选地，所述色谱测定条件还包括：柱温为35℃。优选地，所述色谱测定条件还包括：检测波长为203nm。优选地，所述色谱测定条件还包括：流速为0.6mL/min。优选地，所述色谱测定条件还包括：进样量为5μL。还提供一种如前所述痰热清注射液中熊胆粉超高效液相色谱测定法得到的指纹图谱，所述指纹图谱中共有4个特征峰，各峰以熊去氧胆酸峰为参比峰的相对保留时间和相对峰面积为：相对保留时间：3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸峰为1.117～1.120；鹅去氧胆酸峰为1.379～1.384；7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸峰为1.465～1.469。采用所述痰热清注射液中熊胆粉超高效液相色谱测定法分析33批痰热清注射液，其中2016年13批，2017年10批，2018年10批，叠加图如图2所示，分别计算每批样品与对照指纹图谱的相似度，相似度均大于0.99。表1痰热清注射液相似评价结果实施例2取熊去氧胆酸对照品、鹅去氧胆酸对照品、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸对照品和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸对照品，加甲醇溶解并稀释成每1mL本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种痰热清注射液中熊胆粉超高效液相色谱测定法，其特征在于，步骤包括：/nS1、制备对照品溶液：取熊去氧胆酸对照品，加入甲醇溶解并稀释成熊去氧胆酸浓度为4.0mg/mL的溶液，作为对照品溶液；/nS2、制备供试品溶液：提供不同批次的痰热清注射液10mL，精密加入0.08％乙酸乙腈10mL，混匀，加入氯化钠5g，振摇2min，离心5min，转速为4000转/分钟，取上清液，作为供试品溶液；/nS3、限量检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入超高效液相色谱仪进行测定，色谱测定条件为：采用ACQUITY UPLC BEH C18(Waters，0.3×10cm，1.7μm)作为色谱柱；采用乙腈-0.1％磷酸作为流动相，梯度洗脱，其洗脱时间与流动相体积分别为：/n0min，乙腈20％，0.1％磷酸80％；/n1min，乙腈38％，0.1％磷酸62％；/n3min，乙腈38％，0.1％磷酸62％；/n5min，乙腈50％，0.1％磷酸50％；/n10min，乙腈50％，0.1％磷酸50％；/n其中，理论板数按熊去氧胆酸峰计算应不低于10000；/n其中，供试品指纹图谱与对照品指纹图谱经相似度计算，6min后色谱峰的相似度不低于0.90。/n...

【技术特征摘要】
1.一种痰热清注射液中熊胆粉超高效液相色谱测定法，其特征在于，步骤包括：
S1、制备对照品溶液：取熊去氧胆酸对照品，加入甲醇溶解并稀释成熊去氧胆酸浓度为4.0mg/mL的溶液，作为对照品溶液；
S2、制备供试品溶液：提供不同批次的痰热清注射液10mL，精密加入0.08％乙酸乙腈10mL，混匀，加入氯化钠5g，振摇2min，离心5min，转速为4000转/分钟，取上清液，作为供试品溶液；
S3、限量检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入超高效液相色谱仪进行测定，色谱测定条件为：采用ACQUITYUPLCBEHC18(Waters，0.3×10cm，1.7μm)作为色谱柱；采用乙腈-0.1％磷酸作为流动相，梯度洗脱，其洗脱时间与流动相体积分别为：
0min，乙腈20％，0.1％磷酸80％；
1min，乙腈38％，0.1％磷酸62％；
3min，乙腈38％，0.1％磷酸62％；
5min，乙腈50％，0.1％磷酸50％；
10min，乙腈50％，0.1％磷酸50％；
其中，理论板数按熊去氧胆酸峰计算应不低于10000；
其中，供试品指纹图谱与对照品指纹图谱经相似度计算，6min后色谱峰的相似度不低于0.90。


2.根据权利要求1所述的痰热清注射液中熊胆...

【专利技术属性】
技术研发人员：季申，李雯婷，胡青，苗水，张小利，
申请(专利权)人：上海凯宝药业股份有限公司，上海市食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：上海;31