一种痰热清注射液中熊胆粉提取物的限量检测方法及其指纹图谱技术

本发明专利技术涉及一种痰热清注射液中熊胆粉提取物的限量检测方法，所述熊胆粉提取物包括熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、3α‑羟基‑7‑氧代‑5β‑胆烷酸和7α‑羟基‑3‑氧代‑5β‑胆烷酸；所述限量检测方法为HPLC‑DAD法，步骤包括：S1、制备对照品溶液；S2、制备供试品溶液；S3、限量检测。还涉及一种如前所述的限量检测方法得到的指纹图谱，所述指纹图谱中共有4个特征峰，各峰以熊去氧胆酸峰为参比峰。本发明专利技术的限量检测方法通过供试品的峰面积与对照品的峰面积以外标法计算对熊胆粉提取物做限量检测；通过计算供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度，准确高效全面监控产品质量同时鉴别产品真伪。

A method of limited quantity detection and fingerprint of bear bile powder extract in Tanreqing Injection

【技术实现步骤摘要】
一种痰热清注射液中熊胆粉提取物的限量检测方法及其指纹图谱
本专利技术涉及药物分析检测
，尤其涉及一种痰热清注射液中熊胆粉提取物的限量检测方法及其指纹图谱。
技术介绍
痰热清注射液中熊胆粉的主要成分包括熊去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、鹅去氧胆酸、7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸。痰热清注射液原料熊胆粉药材和饮片中的主要成分是牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸，在制备痰热清注射液的过程中，由于工艺导致了两个牛磺去氧胆酸水解，在熊胆粉提取物中，以熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸为主，另外还产生了少量3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸。现行标准中，由于熊去氧胆酸为主要药效成分和特征成分，因此作为含量测定项进行控制，且仅对熊胆粉中鹅去氧胆酸含量上限进行控制。而3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸两种成分的临床有效性暂无报道，由于工艺导致到注射剂中含量有所增加，故需要将其与鹅去氧胆酸一并进行限量控制。因此，将熊去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、鹅去氧胆酸、7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸呈现在一张指纹图谱中，对其进行限量检测是本领域技术人员需要解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种痰热清注射液中熊胆粉提取物的限量检测方法及其指纹图谱。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是：本专利技术第一方面是提供一种痰热清注射液中熊胆粉提取物的限量检测方法，所述熊胆粉提取物包括熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸；所述限量检测方法为HPLC-DAD法，步骤包括：S1、制备对照品溶液：取熊去氧胆酸对照品、鹅去氧胆酸对照品、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸对照品和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸对照品适量，精密称定，加入甲醇溶解并稀释成每1mL中含熊去氧胆酸4.0mg、鹅去氧胆酸0.6mg、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸0.02mg和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸0.06mg的混标溶液，作为对照品溶液；S2、制备供试品溶液：提供不同批次的痰热清注射液作为供试品溶液；S3、限量检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪进行二极管阵列扫描限量检测，色谱测定条件为：采用Poroshell120EC-C18(2.7μm，0.46×5cm)作为色谱柱；采用乙腈-0.1％磷酸作为流动相，梯度洗脱，其洗脱时间与流动相体积分别为：0min，乙腈20％，0.1％磷酸80％；13min，乙腈38％，0.1％磷酸62％；30min，乙腈50％，0.1％磷酸50％；35min，乙腈50％，0.1％磷酸50％；35.1min，乙腈20％，0.1％磷酸80％；40min，乙腈20％，0.1％磷酸80％。优选地，每1mL痰热清注射液含熊去氧胆酸3.5～6.4mg；含鹅去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸及7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸之和不超过1.4mg。优选地，所述色谱测定条件还包括：柱温为25～40℃。优选地，所述色谱测定条件还包括：检测波长为200～400nm。进一步优选地，所述检测波长为203nm。优选地，所述色谱测定条件还包括：流速为0.8～1.2mL/min。优选地，所述色谱测定条件还包括：进样量为10～30μL。进一步优选地，所述进样量为10μL。本专利技术第二方面是提供一种如前所述的限量检测方法得到的指纹图谱，所述指纹图谱中共有4个特征峰，各峰以熊去氧胆酸峰为参比峰的相对保留时间和相对峰面积为：相对保留时间：3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸峰为1.128～1.129；鹅去氧胆酸峰为1.377～1.378；7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸峰为1.442～1.444；相对峰面积：3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸峰为0.086～0.087；鹅去氧胆酸峰为0.184～0.185；7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸峰为0.070～0.071。本专利技术采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：本专利技术的限量检测方法对供试品的前处理方法简单，具有操作简便、结果稳定、重现性好、精密度高等优点；本专利技术的指纹图谱各特征峰分离效果较好，能够较全面的反映出产品的质量信息，有利于全面监控产品质量，及鉴别产品的真伪；本专利技术的限量检测方法通过供试品的峰面积与对照品的峰面积以外标法计算对熊胆粉提取物做限量检测；通过计算供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度，准确高效全面监控产品质量同时鉴别产品真伪。附图说明图1为实施例1得到的痰热清注射液中熊胆粉提取物对照指纹图谱；其中，峰1为熊去氧胆酸；峰2为3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸；峰3为鹅去氧胆酸；峰4为7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸；图2为实施例1得到的痰热清注射液中熊胆粉提取物指纹图谱叠加图；图3为实施例5得到的痰热清注射液中熊胆粉提取物对照品DAD光谱图；其中，图3a为熊去氧胆酸DAD光谱图；图3b为3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸DAD光谱图；图3c为鹅去氧胆酸DAD光谱图；图3d为7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸DAD光谱图；图4为实施例5得到的痰热清注射液中熊胆粉提取物10μL进样量时指纹图谱。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。需要说明的是，在不冲突的情况下，本专利技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，但不作为本专利技术的限定。实施例1提供一种痰热清注射液中熊胆粉提取物的限量检测方法，其特征在于，所述熊胆粉提取物包括熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸；所述限量检测方法为HPLC-DAD法，步骤包括：S1、制备对照品溶液：取熊去氧胆酸对照品、鹅去氧胆酸对照品、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸对照品和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸对照品适量，精密称定，加入甲醇溶解并稀释成每1mL中含熊去氧胆酸4.0mg、鹅去氧胆酸0.6mg、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸0.02mg和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸0.06mg的混标溶液，作为对照品溶液；S2、制备供试品溶液：提供不同批次的痰热清注射液作为供试品溶液；S3、限量检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪进行二极管阵列扫描限量检测，色谱测定条件为：采用P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种痰热清注射液中熊胆粉提取物的限量检测方法，其特征在于，所述熊胆粉提取物包括熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸；所述限量检测方法为HPLC-DAD法，步骤包括：/nS1、制备对照品溶液：取熊去氧胆酸对照品、鹅去氧胆酸对照品、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸对照品和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸对照品适量，精密称定，加入甲醇溶解并稀释成每1mL中含熊去氧胆酸4.0mg、鹅去氧胆酸0.6mg、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸0.02mg和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸0.06mg的混标溶液，作为对照品溶液；/nS2、制备供试品溶液：提供不同批次的痰热清注射液作为供试品溶液；/nS3、限量检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪进行二极管阵列扫描限量检测，色谱测定条件为：采用Poroshell 120EC-C18(2.7μm，0.46×5cm)作为色谱柱；采用乙腈-0.1％磷酸作为流动相，梯度洗脱，其洗脱时间与流动相体积分别为：/n0min，乙腈20％，0.1％磷酸80％；/n13min，乙腈38％，0.1％磷酸62％；/n30min，乙腈50％，0.1％磷酸50％；/n35min，乙腈50％，0.1％磷酸50％；/n35.1min，乙腈20％，0.1％磷酸80％；/n40min，乙腈20％，0.1％磷酸80％。/n...

【技术特征摘要】
1.一种痰热清注射液中熊胆粉提取物的限量检测方法，其特征在于，所述熊胆粉提取物包括熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸；所述限量检测方法为HPLC-DAD法，步骤包括：
S1、制备对照品溶液：取熊去氧胆酸对照品、鹅去氧胆酸对照品、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸对照品和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸对照品适量，精密称定，加入甲醇溶解并稀释成每1mL中含熊去氧胆酸4.0mg、鹅去氧胆酸0.6mg、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸0.02mg和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸0.06mg的混标溶液，作为对照品溶液；
S2、制备供试品溶液：提供不同批次的痰热清注射液作为供试品溶液；
S3、限量检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪进行二极管阵列扫描限量检测，色谱测定条件为：采用Poroshell120EC-C18(2.7μm，0.46×5cm)作为色谱柱；采用乙腈-0.1％磷酸作为流动相，梯度洗脱，其洗脱时间与流动相体积分别为：
0min，乙腈20％，0.1％磷酸80％；
13min，乙腈38％，0.1％磷酸62％；
30min，乙腈50％，0.1％磷酸50％；
35min，乙腈50％，0.1％磷酸50％；
35.1min，乙腈20％，0.1％磷酸80％；
40min，乙腈20％，0.1％磷酸80％。


2.根据权利要求1所述的限量检测方法，其特征在于，每1mL痰热清注射液含熊去氧胆酸3...

【专利技术属性】
技术研发人员：季申，李雯婷，胡青，苗水，张小利，
申请(专利权)人：上海凯宝药业股份有限公司，上海市食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：上海;31