【技术实现步骤摘要】
一种兼容不同实验条件及下游应用的环境DNA提取方法
本专利技术涉及环境样本的DNA提取
，尤其涉及一种兼容不同实验条件及下游应用的环境DNA提取方法，属于生物
技术介绍
生物监测是环境监测的重要组成部分。分子监测技术相比于传统监测方法能够精确反映环境中的生物多样性，并且有效捕捉环境中的痕量生物残留。对环境DNA的分析是分子监测的核心步骤，而不同的DNA分析技术对于样本质量有不同的要求。例如16S测序技术对DNA完整度要求不高但要求尽量去除PCR抑制成分；宏基因组测序则对DNA的完整度有很高的要求；而应急现场快速检测则要求对样本DNA的快速提取。除了对样本的要求，在不同的实验条件，如野外、流动监测站、基层监测站和中心监测站等，可用于DNA提取与分析的实验设备也不同。因此，需要一种灵活的DNA提取方案可以兼容多种实验条件提取环境DNA并且可以以最便捷高效的方法制备适用于不用分析技术的DNA。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种兼容不同实验条件及下游应用的环境DNA提取方法，解决生物监测...
【技术保护点】
1.一种兼容不同实验条件及下游应用的环境DNA提取方法，其特征在于包括，/n步骤一，采集环境样本，每份样本含10
【技术特征摘要】
1.一种兼容不同实验条件及下游应用的环境DNA提取方法，其特征在于包括，
步骤一，采集环境样本，每份样本含106～108个细胞；
步骤二，样本裂解，在每份样本中加入碱裂解液0.65～0.75ml和ProteaseK溶液65～75μl，充分混匀，96±2℃反应1小时，加入0.65～0.75mlTrisHCl，提取粗纯度DNA上清液。
2.根据权利要求1所述的环境DNA提取方法，其特征在于，以步骤二所得粗纯度DNA上清液进行纯化，获取高纯度DNA样本的具体步骤为：
DNA抽提：加入与粗纯度DNA上清液等体积的酚氯仿异戊醇溶液，混匀，6,000～7,000g离心10min，保留水相溶液；
DNA沉淀：在水相溶液中加入水相溶液0.6倍体积的预冷异丙醇，颠倒混匀，12,000～13,000g离心5min，弃上清；
DNA洗涤：加入0.8～1ml70％乙醇洗涤DNA，12,000～13,000g离心1min，弃上清，重复洗涤两次；室温晾干5～10min，40～60μl双蒸水重悬DNA，得到高纯度DNA样本。
3.根据权利要求1所述的环境DNA提取方法，其特征在于：以步骤二所得的上清液进行纯化，获取高纯度DNA样本的具体步骤为：
将DNA吸附柱放入1.5mlEP管中，上清液700～800μl加入DNA吸附柱，12,000～13,000g离心1min，弃去流出液，两次加入700～800μl洗涤液，12,000～13,000g离心1min，弃去流出液；将DNA吸附柱放于新1.5mlEP管中，向DNA吸附柱中加入10mmo...
【专利技术属性】
技术研发人员：周克茹，单锴，孙蓓丽，陈志伟，吴梦昊，
申请(专利权)人：江苏宏众百德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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