用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物制造技术

本发明专利技术提供了一种用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物，属于移植物抗宿主病治疗用组合物领域，包括按重量份数计的如下组分：WDR5抑制剂：1份，DOT1L抑制剂：1份；WDR5抑制剂包括WDR5‑MLL抑制剂，通过WDR5抑制剂抑制组蛋白甲基化转移酶MLL1与其催化复合物WDR5蛋白‑蛋白相互作用，通过DOT1L抑制剂抑制组蛋白H3赖氨酸79甲基转移酶DOT1L；两种药物合用起到协同作用，作用时间短，副作用轻微，疗效维持时间长；减轻器官移植后淋巴细胞向Th1，Th17效应细胞方向分化的同时仍保留一定的分化，避免影响移植后的抗感染能力和移植物抗肿瘤效应。

Composition for the prevention and treatment of acute graft-versus-host disease

【技术实现步骤摘要】
用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物
本专利技术属于移植物抗宿主病治疗用组合物领域，具体涉及一种用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物及其应用。
技术介绍
移植物抗宿主病是由于移植后异体供者移植物中的T淋巴细胞，经受者发动的一系列“细胞因子风暴”刺激，大大增强了其对受者抗原的免疫反应，以受者靶细胞为目标发动细胞毒攻击，其中皮肤、肝及肠道是主要的靶目标。根据移植物抗宿主病在移植后发生的时间，如在100天内发生者称为急性移植物抗宿主病，在100天后发生者称为慢性移植物抗宿主病；急性移植物抗宿主病的发生率为30％～45％，发生在移植后早期，是移植后早期死亡的重要并发症之一，慢性者发生率低于急性。目前用于治疗急性排异的药物均为免疫抑制剂，如环孢素，他克莫司等，这类药物有比较严重的肾毒性，这类药物均需要长期使用，停药后其免疫抑制作用均消失，部分急性排异不能控制。另一类药物如舒莱(CD25单抗)，将急性排异中产生的大量效应T细胞清除，这类药物虽然对急性排异相比较传统免疫抑制剂效果稍好，但也需要反复给药。因为大量清除效应T细胞，后期感染并发症高，并且严重影响移植物抗肿瘤效应。目前有关于WDR5-MLL抑制剂和DOT1L抑制剂均处于临床实验阶段，均用来治疗肿瘤的临床试验，比如在clinicaltrials上的NCT02141828，NCT03701295，(DOT1L抑制剂)，发表在NatureChemicalBiologyvolume11,pages571–578(2015)上治疗急性白血病的WDR5-MLL抑制剂，目前将WDR5MLL抑制剂应用在治疗急性GVHD中，在世界范围内仍未有尝试。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的一是提供一种用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物。为实现本专利技术的上述专利技术目的，本专利技术提出以下技术方案：一种用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物，包括按重量份数计的如下组分；WDR5抑制剂：1-8份；DOT1L抑制剂：1-8份。优选的，包括按重量份数计的如下组分；WDR5抑制剂：1-5份；DOT1L抑制剂：1-5份。优选的，包括按重量份数计的如下组分；WDR5抑制剂：3-5份；DOT1L抑制剂：1份。优选的，包括按重量份数计的如下组分；WDR5抑制剂：5份；DOT1L抑制剂：1份。优选的，所述WDR5抑制剂包括WDR5-MLL抑制剂。本专利技术的目的二是提供一种用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物的应用。为实现本专利技术的上述专利技术目的，本专利技术提出以下技术方案：一种WDR5抑制剂和DOT1L抑制剂用于制备预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物的应用。通过专利技术人的研究，仅为小鼠注射DOT1L抑制剂，并不能减轻急性GVHD，只有将DOT1L抑制剂和WDR5MLL抑制剂联合注射，才能够减轻急性GVHD，起到治疗急性GVHD的效果。综上所述，与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：(1)本专利技术组合物为表观遗传学抑制剂，作用在T细胞向效应细胞分化方向，便于减轻器官移植后淋巴细胞向Th1，Th17效应细胞方向分化，但仍保留一定的分化，故不会严重影响移植后的抗感染能力和移植物抗肿瘤效应；(2)使用表观遗传学抑制剂在免疫细胞分化增殖的阶段可以将这些遗传信息向下一代遗传，因此本专利技术组合物具有应用时间短，副作用轻微，疗效维持时间长等特点；(3)本专利技术提供的组合物不仅可以用于预防器官移植中的急性排异，也可以用于治疗器官移植后的急性排异。附图说明通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术的其它特征、目的和优点将会变得更明显：图1为实施例1用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物应用于混合淋巴细胞反应系统的体外试验后小鼠Th1，Th17，Treg细胞比例示意图；图2为实施例1-2、对比例1-4用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物中小鼠非清髓异基因移植模型，在植入供者淋巴细胞后使用OICR-9429或者EPZ5676或者两种药联合使用后的小鼠生存时间示意图；图3为实施例1用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物使用两种化合物注射后的小鼠的肝脏和肠道HE染色、制片图；图4为实施例1用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物中使用组合物注射后的小鼠脾脏研磨液的Th1，Th17，Treg细胞的比例图；图5为实施例1-8用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物中组分筛选流程示意图。具体实施方式以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变化和改进，这些都属于本专利技术的保护范围。下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明：如图5所示，从众多化合物中筛选出有可能治疗急性排异的化合物：选取selleck公司的epigeneticcompoundlibrary，共包括464种化合物，体外实验使用Balb/c小鼠的淋巴细胞(经丝裂霉素灭活，作为抗原提呈细胞)和C57BL/6小鼠的淋巴细胞混合，构建混合淋巴细胞反应。后加入各种化合物，孵育2天后，经流式细胞仪检测淋巴细胞混合液中Th1，Th17，Treg细胞比例(PS:急性排异的主要效应细胞为Th1细胞和Th17细胞，主要为T细胞接受HLA不同抗原后向效应方向分化而来)。观察哪些化合物可以减低Th1，Th17细胞数量，但对Treg细胞数量影响不大。经体外实验筛选，WDR5-MLL抑制剂和DOT1L抑制剂成为备选化合物，进而在实验中验证这些化合物的作用。图1为体外试验使用WDR5-MLL抑制剂(代表物为OICR-9429)与DOT1L抑制剂(代表物为EPZ5676)，将这些化合物以不同的剂量在体外试验中应用于混合淋巴细胞反应系统中(这时，淋巴细胞会出现扩增分化，T细胞会向Th1，Th17，Treg细胞进行分化，使用流式细胞检测不同剂量药物孵育后Th1，Th17，Treg细胞比例，我们发现，随着WDR5-MLL抑制剂和DOT1L抑制剂剂量增加，T细胞向Th1，Th17分化逐渐减少；图2为建立小鼠非清髓异基因移植模型，然后在植入供者淋巴细胞后使用OICR-9429或者EPZ5676或者两种药联合使用后观察小鼠生存时间，我们发现，两药联合使用并且达到一定剂量后，小鼠生存时间显著延长；图3将使用两种化合物注射后的小鼠处死，取肝脏和肠道做HE染色，制片，我们发现，相比较未用药组肝脏，肠道急性GVHD明显减轻。图4将使用两种化合物注射后的小鼠处死，取脾脏研磨后使用流式细胞仪检测Th1，Th17，Treg细胞比例，我们发现，相比较未用药组Th1，Th17细胞明显减少，但仍保留一定分化，故仍保留一定抗感染能力及抗肿瘤细胞活性；一、检测方法与检测指标1、用于预防器官移植后的急性移植物抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物，其特征在于，包括按重量份数计的如下组分：/nWDR5抑制剂： 1-8份；/nDOT1L抑制剂： 1-8份。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物，其特征在于，包括按重量份数计的如下组分：
WDR5抑制剂：1-8份；
DOT1L抑制剂：1-8份。


2.根据权利要求1所述的用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物，其特征在于，包括按重量份数计的如下组分：
WDR5抑制剂：1-5份；
DOT1L抑制剂：1-5份。


3.根据权利要求1或2所述的用于预防和治疗急性移植物抗宿主病的组合物，其特征在于，包括按重量份数计的如下组分：
WDR...

【专利技术属性】
技术研发人员：马洁娴，
申请(专利权)人：华东医院，
类型：发明
国别省市：上海;31