基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法技术

本发明专利技术涉及生物组织样本整体染色、三维成像领域，具体涉及一种基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法；该方法向小鼠心脏灌注后取出小肠；然后将小肠组织置于的多聚甲醛溶液中固定；用缓冲液对固定后的小肠组织进行漂洗；将小肠组织分别置于不同体积分数的乙醇溶液中进行脱水；超声处理；超声漂洗；将石蜡块放在真空泵加热，经双层滤纸过滤，将透明好的小组织浸在过滤后的石蜡中，抽真，然后进行缓慢降温；将制作好的石蜡包埋样品置于在PBS缓冲液水槽中，利用TDI～fMOST相机进行采集。本发明专利技术借助超声加热的方式将Dil染料快速的渗透到组织内部，从而实现脏器组织大样本的整体染色。

Three dimensional imaging method of biological tissue samples based on DIL ultrasonic staining

【技术实现步骤摘要】
基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法
本专利技术涉及生物组织样本整体染色、三维成像领域，具体涉及一种基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法。
技术介绍
Dil细胞膜红色荧光探针(1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanineperchlorate)；DiI的分子式为C59H97ClN2O4，分子量为933.88是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现橙红色荧光，最大激发波长549nm，最大发射波长565nm。Dil在细胞膜外呈现弱的荧光特性，与细胞膜或者单位膜结合后则呈现很强的荧光特性，并可沿着单位膜做侧向扩散，逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。它的荧光强而稳定，不影响被标记细胞的存活和生长，在标记细胞内消失慢，因此可以作为一种独特细胞膜(单位膜)标记物。作为神经科学研究领域中常用的荧光示踪剂，可以清晰揭露神经元精细的形态结构，如胞体、轴突、树突及树突棘等，Dil除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移、检测细胞毒性和标记脂蛋白。...

【技术保护点】
1.一种基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于：包括以下步骤：/n1)向小鼠心脏灌注后取出小肠；然后将小肠组织置于质量分数为3～5％的多聚甲醛溶液中固定6～24h；/n2)用0.05～0.2M的PBS缓冲液对固定后的小肠组织进行漂洗20～60min；漂洗2～4次；/n3)将小肠组织分别置于不同体积分数的乙醇溶液中进行脱水；/n4)然后将脱水的小肠组织置于无水乙醇配置浓度0.1～0.3μg/mL Dil工作液中，在超声条件下进行超声处理；/n5)将小肠组织置于无水乙醇中超声漂洗，重复2～4次；/n6)将小肠组织置于二甲苯，透明1～3次，每次0.5～2h；/n7)将石蜡块放在真空泵...

【技术特征摘要】
1.一种基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)向小鼠心脏灌注后取出小肠；然后将小肠组织置于质量分数为3～5％的多聚甲醛溶液中固定6～24h；
2)用0.05～0.2M的PBS缓冲液对固定后的小肠组织进行漂洗20～60min；漂洗2～4次；
3)将小肠组织分别置于不同体积分数的乙醇溶液中进行脱水；
4)然后将脱水的小肠组织置于无水乙醇配置浓度0.1～0.3μg/mLDil工作液中，在超声条件下进行超声处理；
5)将小肠组织置于无水乙醇中超声漂洗，重复2～4次；
6)将小肠组织置于二甲苯，透明1～3次，每次0.5～2h；
7)将石蜡块放在真空泵加热到65～70℃，经双层滤纸过滤，将透明好的小组织浸在过滤后的石蜡中3～5h，抽真，然后进行缓慢降温；
8)将制作好的石蜡包埋样品置于在0.05～0.2M的PBS缓冲液水槽中，利用TDI～fMOST相机进行采集。


2.根据权利要求1所述基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于：所述步骤1)中，多聚甲醛溶液的质量分数为4％，固定时间12h。


3.根据权利要求1所述基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于：所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：程柯，郑廷，陈谦，李龙辉，毛珂，
申请(专利权)人：武汉沃亿生物有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42