一种芝麻SSR分子标记的扩增方法及其应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域的一种芝麻SSR分子标记的扩增方法及其应用，包括：获取芝麻的DNA；以所述芝麻的DNA为模板，对SSR分子标记进行PCR扩增；聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR扩增产物；所述芝麻的DNA获取方法为：芝麻新鲜叶片置于40μl的0.5mol/L NaOH溶液中静置10‑15min，然后向其中加入100mmol/L PH 8.0的Tris‑HCL溶液400μl，混匀，所得溶液即为所述芝麻的DNA溶液。本发明专利技术DNA模板的获取步骤操作简便，单个样品只需要10分钟左右；所需化学药品少，只需要NaOH和Tris‑HCL，且基本无毒无害；无需专业实验设备，成本低。

Amplification of SSR molecular markers in sesame and its application

【技术实现步骤摘要】
一种芝麻SSR分子标记的扩增方法及其应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种芝麻SSR分子标记的扩增方法及其应用。
技术介绍
SSR(Simplesequencerepeats)标记，也称为微卫星DNA(MicrosatelliteDNA)标记，是近年来植物研究中应用最为广泛的常用分子标记之一，该标记因具有稳定性高、信息量丰富及易于操作等优点，已经在遗传多样性、指纹图谱鉴定、关联分析、遗传图谱构建及QTL定位等方面得到广泛应用。传统的SSR分子标记技术，包括DNA提取、PCR扩增和凝胶电泳检测等步骤。DNA提取过程中需要样品的液氮研磨、水浴、离心、吸取上清液、沉淀、漂洗、干燥、溶解等多个步骤，操作繁琐，且需要大量的化学试剂和相关的仪器设备，一定程度上影响了大规模样品的实验进程。此外，芝麻含有大量的多聚糖、油脂类等黏性生物物质尤其是成株期叶片的DNA提取过程中，黏性类物质严重影响了DNA提取过程中样品研磨、吸取上清液、沉淀、晾干、溶解等操作，常出现提取失败或DNA质量不佳的状况。随着分子标记检测、分子标记辅助选择育种研究的不断深入，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种芝麻SSR分子标记的扩增方法，其特征在于，包括：获取芝麻的DNA；以所述芝麻的DNA为模板，对SSR分子标记进行PCR扩增；/n所述芝麻的DNA获取方法为：取0.3μg新鲜叶片置于40μl的0.5mol/L NaOH溶液中静置10-15min，然后向其中加入100mmol/L pH 8.0的Tris-HCL溶液400μl，混匀，所得溶液即为所述芝麻的DNA溶液。/n

【技术特征摘要】
1.一种芝麻SSR分子标记的扩增方法，其特征在于，包括：获取芝麻的DNA；以所述芝麻的DNA为模板，对SSR分子标记进行PCR扩增；
所述芝麻的DNA获取方法为：取0.3μg新鲜叶片置于40μl的0.5mol/LNaOH溶液中静置10-15min，然后向其中加入100mmol/LpH8.0的Tris-HCL溶液400μl，混匀，所得溶液即为所述芝麻的DNA溶液。


2.根据权利要求1所述的扩增方法，其特征在于，所述芝麻新鲜叶片选自芽期的子叶、幼苗期的全展叶片、苗期的四对真叶期叶片或成株期的上部幼嫩叶片；
所述取样的芝麻叶片直径为0.6-0.8mm。


3.根据权利要求1或2所述的扩增方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为：模板2μl，10×Taqbufferwith(NH4)2SO41μl，25mmolMgCl20.8μl，10mmoldNTP0.2μl，50ng/μl正向引物0.3μl，50ng/μl反向引物0.3μl，5U/μlTaqDNA聚合酶0.2μl，ddH2O补充至10μl。


4.根据权利要求1-3任一项所述的扩增方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：94-95℃变性3min；10个循环：94℃变性1min，60℃-...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙建，叶艳英，乐美旺，颜廷献，梁俊超，颜小文，饶月亮，周红英，
申请(专利权)人：江西省农业科学院作物研究所，
类型：发明
国别省市：江西;36