用于检测食源性致病菌的引物组、产品、检测方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种用于检测食源性致病菌的引物组、产品、检测方法及应用，涉及食品安全技术领域，本发明专利技术提供的用于检测食源性致病菌的引物组，包括用于检测沙门氏菌的引物对、用于检测大肠杆菌O157：H7的引物对和用于检测副溶血弧菌的引物对。在同一检测体系中加入本发明专利技术提供的用于检测食源性致病菌的引物组，能够实现同时对三种致病菌的目标序列进行扩增检测，有效节约时间成本。并且，本发明专利技术是针对沙门氏菌、大肠杆菌O157、副溶血弧菌三种致病菌的保守序列设计的引物，与其它种类细菌均无交叉反应，特异性强，并且对三种致病菌的检测限都能达到100CFU/mL，灵敏度满足相应国标的要求。

Primer set, product, detection method and application for detection of foodborne pathogens

【技术实现步骤摘要】
用于检测食源性致病菌的引物组、产品、检测方法及应用
本专利技术涉及食品安全
，尤其是涉及一种用于检测食源性致病菌的引物组、产品、检测方法及应用。
技术介绍
食源性致病菌是能够引起食物中毒等食源性疾病的一类微生物，它们主要通过食物和水传播，在世界范围内广泛流行。食源性致病菌的致病力强，并具有影响范围广、暴发流行等特点，其疾病种类繁多，如：腹泻、痢疾、伤寒、脑膜炎、菌血症，还能导致死亡，严重危害着公众的身体健康。沙门氏菌是肠杆菌科中重要的常见人畜共患病原菌。该菌以肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌最为常见。在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌引起的中毒病例占首位或第二位。我国细菌性食物中毒中70％-80％是由沙门氏菌引起的。肠出血性大肠杆菌O157：H7是一种重要的人畜共患传染病原菌，主要通过污染的水源及食物感染人，从而带来极大的危害，该病原菌于1982年在美国首次被发现以来，在世界各地有多次暴发流行，大肠杆菌O157已成为最重要的食源性致病菌之一。副溶血弧菌广泛存在于近岸海水、海底沉积物和鱼类、贝类等海洋生物中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测食源性致病菌的引物组，其特征在于，所述引物组包括用于检测沙门氏菌的引物对、用于检测大肠杆菌O157：H7的引物对和用于检测副溶血弧菌的引物对；/n所述用于检测沙门氏菌的引物对包括SA-F和SA-R；/n所述SA-F包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列；/n所述SA-R包括如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列；/n所述用于检测大肠杆菌O157：H7的引物对包括EC-F和EC-R；/n所述EC-F包括如SEQ ID NO...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测食源性致病菌的引物组，其特征在于，所述引物组包括用于检测沙门氏菌的引物对、用于检测大肠杆菌O157：H7的引物对和用于检测副溶血弧菌的引物对；
所述用于检测沙门氏菌的引物对包括SA-F和SA-R；
所述SA-F包括如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.1所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列；
所述SA-R包括如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.2所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列；
所述用于检测大肠杆菌O157：H7的引物对包括EC-F和EC-R；
所述EC-F包括如SEQIDNO.4所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.4所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列；
所述EC-R包括如SEQIDNO.5所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.5所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列；
所述用于检测副溶血弧菌的引物对包括VP-F和VP-R；
所述VP-F包括如SEQIDNO.7所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.7所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列；
所述VP-R包括如SEQIDNO.8所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.8所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列。


2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述引物组还包括探针组，所述探针组包括用于检测沙门氏菌的探针、用于检测大肠杆菌O157：H7的探针和用于检测副溶血弧菌的探针。


3.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于，用于检测沙门氏菌的探针SA-probe包括如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.3所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列；
用于检测大肠杆菌O157：H7的探针EC-probe包括如SEQIDNO.6所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.6所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列；
用于检测副溶血弧菌的探针VP-probe包括如SEQIDNO.9所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.9所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列。


4.根据权利要求2或3所述的引物组，其特征在于，用于检测沙门氏菌的探针、用于检测大肠杆菌O157：H7的探针和用于检测副溶血弧菌的探针均独立地含有互不相同的荧光基团；
优选地，所述荧光基团包括FAM、HEX和ROX；
优选地，所述用于检测沙门氏菌的探针含有FAM，所述用于检测大肠杆菌O157：H7的探针含有HEX，所述用于检测副溶血弧菌的探针含有ROX。


5.一种用于检测食源性致病菌的产品，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的引物组。


6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述产品包括试剂或试剂盒；
优选地，所述试剂盒还包括PCR反应试剂；
优选地，所述PCR反应试剂包括10×PCRbuffer、Mg2+、dNTP、TaqDNA聚合酶和牛血清白蛋白；
优选地，所述10×PCRbuffer的pH为8.0-8.5，优选为8.3；
优选地，所述Mg2+为MgCl2溶液，优选浓度为20-30mM的MgCl2溶液，更优选浓度为25mM的MgCl2溶液；
优选地，所述dNTP包括dATP、dTTP、dGTP和dCTP，优选dATP、dTTP、dGTP和dCTP的浓度比为1:1:1:1，优选浓度为2-3mM的dNTP，更优选浓度为2.5mM的dNTP；
所述TaqD...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴凡，陈芝娟，王虹军，贺贤汉，
申请(专利权)人：杭州博日科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33