定量检测苍白杆菌的聚合酶链式反应引物、试剂盒和定量检测苍白杆菌的方法技术

本发明专利技术提供了检测苍白杆菌的一对引物，可以快速对任意可能含有苍白杆菌的菌群样本进行测定，对苍白杆菌实现特异性识别。本发明专利技术提供的方法将待测样本的宏基因组提取出来并稀释分装以后,各自取出少量稀释的宏基因组样本等量混合后使用一对引物进行扩增，扩增产物经过浓度测定作为QPCR定量标准原液，之后对全部样本进行苍白杆菌的定量测定。采用本发明专利技术提供的引物对对苍白杆菌进行检测，能够避免其他具有高度相似核糖体RNA基因片段菌种的干扰，实现对苍白杆菌的准确测定。

PCR primers, kits and methods for quantitative detection of pale bacilli

【技术实现步骤摘要】
定量检测苍白杆菌的聚合酶链式反应引物、试剂盒和定量检测苍白杆菌的方法
本申请涉及生物检测及微生物
，尤其涉及一种定量检测苍白杆菌的聚合酶链式反应引物、试剂盒和定量检测苍白杆菌的方法。
技术介绍
苍白杆菌是一种具平行边和圆端的杆菌，通常单个出现；细胞染色为革兰氏阴性；通过周生鞭毛运动；是一类专性好氧，严格呼吸代谢，以氧为末端电子受体，能利用各种氨基酸、有机酸和碳水化合物为碳源的菌群；最适生长温度为20～37℃；在营养琼脂上的菌落无色；在低温环境下，生长过程中可产生多种纤维素酶，用于分解玉米秸秆等农作物，从而改善土壤理化性质，提高土壤肥力。苍白杆菌发酵液的乳化指数较高，具有较强的乳化作用，代谢降解饱和烃和芳香烃，降低原油中的饱和烃以及轻质组分，改善原油物性，有效降解石油烃；并为其进一步应用于现场驱油试验以及石油污染土壤等修复领域提供可能。已经有大量研究资料表明苍白杆菌还能够降解一批范围广泛的工农业常见有机污染物或残留物，例如甲苯、对二甲苯、1,2-二氯苯，苯胺，正己烷，十二烷基苯磺酸钠，草甘膦，芘类物质，多环芳烃，某些芳香族化合物(如本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.定量检测苍白杆菌的聚合酶链式反应引物对，包括上游引物和下游引物，所述上游引物具有如OA3F所示核苷酸序列，所述下游引物具有如OA3R所示核苷酸序列：/nOA3F:5'-CAACGGGAACCAGTCGAAGAACGAGCCGCC-3'/nOA3R:5'-TCAAGGAAAAGATGCCGGTTTCAATCTCGC-3'。/n

【技术特征摘要】
1.定量检测苍白杆菌的聚合酶链式反应引物对，包括上游引物和下游引物，所述上游引物具有如OA3F所示核苷酸序列，所述下游引物具有如OA3R所示核苷酸序列：
OA3F:5'-CAACGGGAACCAGTCGAAGAACGAGCCGCC-3'
OA3R:5'-TCAAGGAAAAGATGCCGGTTTCAATCTCGC-3'。


2.权利要求1所述聚合酶链式反应引物对在检测苍白杆菌中的应用。


3.检测苍白杆菌的PCR试剂盒，包括：NPK02buffer(2×)、特异性引物对、Taq酶和ddH2O；所述特异性引物对为权利要求1所述定量检测苍白杆菌的聚合酶链式反应引物对。


4.根据权利要求3所述的PCR试剂盒，其特征在于，所述特异性引物的终浓度为1～3μM。


5.采用权利要求3或4所述PCR试剂盒检测苍白杆菌的反应体系：包括NPK02buffer(2×)6μL，特异性引物各1.5μL，DNA模板1μL，Taq酶0.3μL，ddH2O3.2μL；所述特异性引物的终浓度为1～3μM，所述DNA模板的浓度为10ng/μL。


6.采用权利要求5所述反应体系检测苍白杆菌的方法：包括以下步骤：
以提取得到的待测样品的宏基因组DNA为模板，将所...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄婕，吉鸿睿，金龙，史宏伟，张治洲，
申请(专利权)人：威海以琳生物制品有限公司，哈尔滨工业大学威海，
类型：发明
国别省市：山东;37