通过CRISPR系统产生蛋白序列多样性筛选文库的方法技术方案

本发明专利技术属于生物技术领域和基因工程技术领域,提供一种简便灵活的方法对整合的外源蛋白基因序列定向编辑产生多样性文库，用于目标蛋白的后续筛选。本发明专利技术的方法包括以下步骤：构建CRISPR系统质粒和含目的蛋白基因表达元件的质粒；目的蛋白基因表达元件整合细胞基因组，得到表达目的蛋白基因的细胞株；转化CRISPR系统质粒，诱变产生蛋白序列多样性筛选文库；定向筛选目标蛋白。使用该方法可以自发产生多样化突变，可循环地形成文库，用于筛选，具有操作灵活简单、周期短、成本低的特点。

A method of screening library by generating protein sequence diversity through CRISPR system

【技术实现步骤摘要】
通过CRISPR系统产生蛋白序列多样性筛选文库的方法
本专利技术涉及生物
和基因工程
，具体为通过CRISPR系统对整合目的蛋白基因产生突变文库，筛选目标蛋白的方法。
技术介绍
分子的定向进化技术通过突变、重组和筛选编码基因，模拟加快自然界缓慢的进化过程从而优化或者创造全新功能的蛋白质，促进了蛋白质工程的快速发展，在工业酶、药物蛋白的活性、稳定性、代谢途径等优化方面有着广泛应用。分子进化的策略主要有定点突变(Site-directedmutagenesis)、易错PCR(Error-PCR)、DNA改组(DNAshuffling)、随机引导重组(randompriminginvitrorecombination，RPR)和交错延伸(Staggeredextensionprocess，StEP)等，结合高通量的定向筛选方法如细胞表面展示、流式分选等，快速灵敏的将理想的蛋白筛选出来。但是这些方法仍然存在局限并且过程繁琐，成本高、周期较长，从而开发新的定向进化技术意义重大。CRISPR系统作为功能强大的基因编辑器，自发现后，快速发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于CRISPR系统产生蛋白序列多样性筛选文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)构建CRISPR系统质粒和含目的蛋白基因表达元件的质粒；/n(2)目的蛋白基因表达元件整合细胞基因组，得到表达目的蛋白基因的细胞株；/n(3)转化CRISPR系统质粒，诱变产生蛋白序列多样性筛选文库；/n(4)定向筛选目标蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.基于CRISPR系统产生蛋白序列多样性筛选文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)构建CRISPR系统质粒和含目的蛋白基因表达元件的质粒；
(2)目的蛋白基因表达元件整合细胞基因组，得到表达目的蛋白基因的细胞株；
(3)转化CRISPR系统质粒，诱变产生蛋白序列多样性筛选文库；
(4)定向筛选目标蛋白。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的CRISPR系统质粒是表达cas9、dcas9蛋白或者sgRNA系统的质粒。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的CRISPR系统是与胞嘧啶脱氨酶或者腺苷脱氨酶联合的系统。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的目的蛋白基因表达元件整合细胞基因组是指利用步骤(1)中所述的含目的蛋白基因表达元件的质粒，通过合适的整合方法将外源基因整合到相应细胞基因组上。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的CRISPR系统质粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘贇，徐值姣，应天雷，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31