一种植物作为宿主表达病毒疫苗的方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及一种植物作为宿主表达2019新型冠状病毒(2019‑nCoV)疫苗的方法。植物作为宿主在表达肺炎2019新型冠状病毒(2019‑nCoV)疫苗中，本发明专利技术利用生菜来瞬时表达疫苗以应对2019新型冠状病毒，在较短的时间内(4d)可产生高含量的疫苗蛋白质用于鼻腔喷雾接种或者静脉注射接种。本发明专利技术最大限度地减少了生物安全问题，生菜基本不含有植物有毒物质，而且其本身纤维少，利于下游的蛋白纯化。本发明专利技术试验结果表明，利用植物如生菜系统生产疫苗可以大大缩短生产周期和生产成本。

A method of expressing virus vaccine with plant as host

【技术实现步骤摘要】
一种植物作为宿主表达病毒疫苗的方法
本专利技术涉及生物
，特别涉及植物作为宿主在表达新型冠状病毒疫苗中的应用。
技术介绍
2019年12月以来，发现多起病毒性肺炎病例，经相关病毒分型检测，2020年1月7日，确认系一种新型冠状病毒，1月10日完成了病原核酸检测，1月12日，世界卫生组织正式将造成肺炎疫情的新型冠状病毒命名为“2019新型冠状病毒(2019-nCoV)”。截至1月21日24时，国家卫健委收到国内13省(区、市)，累计报告新型冠状病毒感染的肺炎确诊病例440例，死亡9例。在境外，分别在美国、泰国、日本、韩国以及澳大利亚都有发现疑似肺炎病例。冠状病毒是病毒中变异性很高的一类，可以引发普通感冒，也可以引发重症肺部感染。此前的传染性非典型肺炎SARS病毒、中东呼吸综合征MERS病毒都属此列。通过对新型冠状病毒基因组与SARS冠状病毒、“中东呼吸综合征”MERS冠状病毒进行了全基因组比对，发现平均分别有～70％和～40％的序列相似性，其中可产生病毒表面糖蛋白“S”基因差异尤为明显。此外，通过分子结构模拟的计算方法，对冠状病毒S-蛋白和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种植物作为宿主表达新型病毒2019-nCoV疫苗的方法，其特征在于，包括：/nS1、选取植物器官；/nS2、构建表达载体；/nS3、将所述的表达载体转化到农杆菌中；/nS4、通过所述农杆菌介导真空渗透入植物组织；/nS5、提取、分离蛋白质，获得病毒疫苗。/n

【技术特征摘要】
1.一种植物作为宿主表达新型病毒2019-nCoV疫苗的方法，其特征在于，包括：
S1、选取植物器官；
S2、构建表达载体；
S3、将所述的表达载体转化到农杆菌中；
S4、通过所述农杆菌介导真空渗透入植物组织；
S5、提取、分离蛋白质，获得病毒疫苗。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中所述植物器官包括生菜、烟草、白菜、水稻、玉米、大豆或小麦的叶片、种子、根茎或整株植物。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中的表达载体包括：CTB、新型病毒2019-nCoVSpikereceptorbindingdomain(RBD)、Fc以及载体。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述载体为双元植物载体。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤S2构建表达载体包括：
S2.1、将所述CTB以及所述RBD融合为一个蛋白，获得CTB-RBD疫苗蛋白；
S2.2、将所述CTB-RBD疫苗蛋白的密码子优化为植物偏好的密码子，获得CTB-RBD的优化序列；
S2.3、将所述CTB-RBD的优化序列5’末端加入Kpnl限制性酶切位点，在3’末端加入Sacl和Pacl位点，生成pCTB-RBD载体；
S2.4、通过Kpnl/Sacl获得基因片段CTB-RBD，并克隆到植物表达载体pCam35S，获得瞬时表达载体p35S-CTB-RBD。


6.根据权利要求4所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王跃驹，
申请(专利权)人：王跃驹，
类型：发明
国别省市：美国;US