一种表达肝素酶的融合基因MBP-H1及其重组质粒和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种表达肝素酶的融合基因MBP‑H1及其重组质粒和应用，涉及肝素酶生产技术领域。本发明专利技术所述融合基因MBP‑H1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，然后利用所述融合基因MBP‑H1构建pET‑28a‑MBP‑H1融合蛋白重组质粒，最后对pET‑28a‑MBP‑H1进行初步诱导表达条件优化，确定其最优诱导表达条件为在37℃，200rpm条件下培养至菌液OD600为0.7左右时，加入IPTG(100mM)至终浓度为0.1mM，30℃，200rpm诱导9h，肝素酶酶活最高可达4512U/L。

A fusion gene mbp-h1 expressing heparanase and its recombinant plasmid and Application

【技术实现步骤摘要】
一种表达肝素酶的融合基因MBP-H1及其重组质粒和应用
本专利技术属于肝素酶生产
，具体涉及一种表达肝素酶的融合基因MBP-H1及其重组质粒和应用。
技术介绍
目前市场上已有的几种肝素类药物大多都是由化学法制备，该方法处理过于激烈，容易导致肝素失去生物活性，使得该法制备的低分子量肝素具有微观非均相、多分散性和结构变异大等缺点。相比之下，酶法制备的反应条件更加温和，产物中不会引入有毒物质，反应效率高，而且肝素酶和产物易于分离，同时利用固定化酶技术还可实现生产的连续化，大大节约成本，是一种生产低分子量肝素的工业化途径。迄今为止，虽然有许多通过肝素酶裂解法制备低分子量肝素的研究报道，但仍然存在许多限制因素，例如肝素酶来源狭隘，许多制备低分子量肝素所用的肝素酶基本都是来源于肝素黄杆菌，此外肝素酶的制备成本较高。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种表达肝素酶的融合基因MBP-H1及其重组质粒和应用，将该肝素酶基因构建麦芽糖结合蛋白-肝素酶融合蛋白，以提高其表达量和可溶性，有望解决工业上应用酶法制备低分子量肝素的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达肝素酶的融合基因MBP-H1，其特征在于，所述融合基因MBP-H1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种表达肝素酶的融合基因MBP-H1，其特征在于，所述融合基因MBP-H1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述融合基因MBP-H1，其特征在于，所述融合基因MBP-H1中H1的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.根据权利要求1或2所述融合基因MBP-H1，其特征在于，所述基因H1来源于拉乌尔菌(Raoultellasp.)NX-TZ-3-15，所述拉乌尔菌(Raoultellasp.)NX-TZ-3-15的保藏编号为CGMCCNo.13723。


4.一种包含权利要求1或2所述融合基因MBP-H1的重组质粒。


5.权利要求4所述重组质粒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述融合基因MBP-H1克隆至载体pET-28a上，得重组质...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵丽青，李茵茵，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东;44