一种包被液及在ELISA中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种包被液及在ELISA中的应用，所述包被液是在现有普通包被液中加入浓度为0.01‑1％的多聚赖氨酸。该包被液配制简单，成本低，保质期长，能够显著提高包被抗体的结合率，降低成本，同时能够降低背景值，提高信噪比，可用于ELISA中稀释抗体进行包被。

A coating solution and its application in ELISA

【技术实现步骤摘要】
一种包被液及在ELISA中的应用
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种包被液及在ELISA中的应用。
技术介绍
酶联免疫吸附测定(ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。包被就是将抗体结合到固相载体上，包被液是稀释抗体的溶液，为反应提供孵育环境。目前ELISA包被液一般为pH值为9.6的碳酸盐缓冲液，这种包被液包被效率比较低，大约10％的抗体才能被动吸附到固相载体上，剩余的抗体就被浪费掉了，而提高抗体浓度会造成成本的提高以及后期背景值的升高，同时包被液容易长菌。多聚赖氨酸多用在细胞实验方面，使用多聚赖氨酸处理载玻片，然后再吸附细胞，在《生物技术通讯》2019年1期中文献《多聚赖氨酸在悬浮细胞转染中的应用》就是用预处理的多聚赖氨酸包被的细胞培养板,使培养时的悬浮细胞贴壁，还有《中华检验医学杂志》2002年3期《多聚-L-赖氨酸包被载玻片改良法》，但是这种方式就是用作预处理培养板或者玻片，且部细胞贴壁不能同步操作。有些文献中报道的是先有多聚赖氨酸将酶标板进行预处理，从而提升部分酶标板的结合效率，例如《多聚赖氨酸预处理ELISA(PL-ELISA)检测抗DNA抗体》但是这种方法操作复杂，需要进行多步包被，增加研发工作者的工作量。
技术实现思路
基于此，本专利技术提供一种包被液，该包被液配制简单，成本低，保质期长。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种包被液，它包括多聚赖氨酸0.01-1％wt，余量为缓冲液；所述包被液在使用时直接与抗体混合实现对抗体的包被。优选地，所述缓冲液为Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液或者碳酸盐缓冲液。优选地，所述缓冲液的浓度为5mM-100mM。优选地，所述缓冲液的pH值为7.0-10.0。优选地，多聚赖氨酸的分子量为1000-5000000Da。优选地，所述多聚赖氨酸的含量为0.1％wt。进一步优选地，所述缓冲液的浓度为50mM，pH值9.6的碳酸盐缓冲液。进一步优选地，所述多聚赖氨酸的分子量为20000Da。同时，本专利技术还提供了上述包被液可在ELISA实验中对抗体进行直接包被这类应用，该包被液能够显著提高包被抗体的结合率，降低成本，同时能够降低背景值，并能够实现一步包被，提高信噪比。具体来说，应用过程可以为包被过程中，使用本专利技术提供的包被液进行稀释抗体，加入酶标板孔中，然后在振荡器上震荡10-20分钟，放在2-8℃正常孵育，完成包被过程。本专利技术的有益效果：1)本专利技术是在普通的包被液中加入了多聚赖氨酸，多聚赖氨酸是一种广谱的天然防腐剂，能够起到抑制细菌的作用，增加了溶液的保质期；2)本专利技术是在普通的包被液中加入了多聚赖氨酸，多聚赖氨酸粘附力比较强，能够增强酶标板表面固相载体的吸附力，增强被动吸附的效果，使后期的反应更稳定；3)酶标板表面固相载体的吸附力能力强，可以在包被的过程中降低抗体的使用量，可以显著的降低成本；4)酶标板表面固相载体的吸附力能力强，在第二步封闭的过程中能够牢牢的将封闭液中的封闭蛋白吸附在酶标板表面，减少后期检测抗体与酶标板的非特异性结合，降低背景值，提高信噪比；5)包被过程中振荡器上震荡10-20分钟，能够使溶液混匀，增强布朗运动，提升包被效率。附图说明图1：本专利技术包被液与常规包被液包被效果数据比较图2：本专利技术包被液与常规包被液稳定性比较镜检图具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术的具体实施方法作进一步详细描述。以下实施例用于说明专利技术，但不用来限制专利技术的范围实施例1：本专利技术包被液的制备工艺(配制100mL)称取碳酸钠0.159g，碳酸氢钠2.94g，加入纯水，然后加入0.1g分子量为20000的多聚赖氨酸，搅拌均匀，定容至100mL。常规包被液的制备工艺(配制100mL)称取碳酸钠0.159g，碳酸氢钠2.94g，加入纯水，搅拌均匀，定容至100mL。实施例2：本专利技术包被液与常规包被液在相同实验条件下，包被抗体结合效果的比较1)按照常规工艺分别使用本专利技术包被液与常规包被液以0.12μg/mL、0.25μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL的浓度包被抗人IL-6抗体(厂家：R&DSystems,Inc.，货号：MAB206)，然后封闭；2)加入100μL100pg/mL人IL-6标准品(厂家：R&DSystems,Inc.，货号：206-IL)，37℃孵育1h；3)洗板三次；4)加入100μL酶标记的抗人IL-6的检测抗体(厂家：R&DSystems,Inc.，货号：AF-206)，37℃孵育1h；5)洗板三次；6)加入100μL底物溶液，37℃孵育15min，让后加入50μL终止液；7)酶标仪上进行OD测值。OD测值结果见下表包被浓度本专利技术包被液常规包被液0.120.680.070.251.260.160.52.570.3112.490.6822.591.2942.522.57数据比较图见附图1从比较结果看，本专利技术包被液的包被效果是常规包被液的八倍，可以节约87.5％的抗体，显著节约成本注：本专利技术的包被液在多聚赖氨酸浓度为0.01％与1％时，也可以起到提高包被效果的用途，但是效果没有浓度0.1％的多聚赖氨酸包被液明显。实施例3：本专利技术包被液与常规包被液在相同实验条件下，包被抗体结合效果的比较1)按照常规工艺分别使用本专利技术包被液与常规包被液以0.5ug/mL的浓度包被抗人BDNF抗体(厂家：R&DSystems,Inc.，货号：MAB848R)，然后封闭；2)分别加入100μL0、1000pg/mL人BDNF标准品(厂家：R&DSystems,Inc.，货号：248-BD)，37℃孵育1h；3)洗板三次；4)加入100μL酶标记的抗人BDNF的检测抗体(厂家：R&DSystems,Inc.，货号：MAB648)，37℃孵育1h；5)洗板三次；6)加入100μL底物溶液，37℃孵育15min，让后加入50μL终止液7)酶标仪上进行OD测值。OD测值结果见下表本专利技术包被液常规包被液1000pg/mL2.6260.4210pg/mL0.043...

【技术保护点】
1.一种包被液，其特征在于：所述包被液包括多聚赖氨酸0.01-1％wt，余量为缓冲液；所述包被液在使用时直接与抗体混合实现对抗体的包被。/n

【技术特征摘要】
1.一种包被液，其特征在于：所述包被液包括多聚赖氨酸0.01-1％wt，余量为缓冲液；所述包被液在使用时直接与抗体混合实现对抗体的包被。


2.根据权利要求1所述的包被液,其特征在于:所述缓冲液为Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液或者碳酸盐缓冲液。


3.根据权利要求2所述的包被液,其特征在于:所述缓冲液的浓度为5mM-100mM。


4.根据权利要求1所述的包被液,其特征在于:所述缓冲液的pH为7.0-10.0。


5.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：冷毅斌，张念元，王长乐，朱峰胜，
申请(专利权)人：武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42