时间分辨流式荧光检测分析装置及其使用方法制造方法及图纸

本申请公开了一种时间分辨流式荧光检测分析装置，包括前置系统，样品管，鞘液池，流动室，第一激光器，第二激光器，毛细管，集光器，第二激光器时间分辨荧光检测单元，第一激光器荧光检测器，数据采集系统，其中，所述鞘液池和所述流动室的底部设有开口，所述毛细管用于引导待测的微球混合液的流动，所述毛细管设置在所述鞘液池内，所述毛细管的底部探出所述流动室的开口，并形成检测区，所述第一激光器和所述第二激光器被布置成能够激发所述检测区内的微球混合液。本申请还提供了所述时间分辨流式荧光检测分析装置的使用方法。

Time-resolved flow cytometry and its application

【技术实现步骤摘要】
时间分辨流式荧光检测分析装置及其使用方法
本申请涉及医疗诊断设备
，具体地，涉及一种新型时间分辨流式荧光检测分析仪。
技术介绍
流式细胞仪(FlowCytometer)通过测量细胞及其它生物颗粒的散射光和标记荧光强度，来快速分析颗粒的物理或化学性质，能同时从一个细胞中测得多个特征参数，进行定性或定量分析，具有速度快、精度高、准确性好的特点，流式细胞仪主要由液流系统，光学系统，电子系统，数据分析系统组成。液路系统作为流式细胞仪的基础系统，将含有被荧光染色的细胞或微粒的样本液与鞘液一起输送到流动室，利用液流聚焦原理使细胞或微粒在层流状态下形成样本流，细胞或微粒依次通过流动室检测区域。稳定的样本流是后续信号检测的保障，也是整个仪器核心技术之一。目前流式细胞检测荧光信号影响因素很多，收到非特异性荧光的干扰，本底值高，检测灵敏度低，可重复性不高。在生物流体和血清中的许多复合物和蛋白本身就可以发荧光，因此使用传统的发色团进而进行荧光检测的灵敏度就会严重下降。大部分背景荧光信号是短时存在的，荧光寿命非常短，激发光消失，荧光也消失。不过有非常少的稀土金属(Eu、Tb、Sm、Dy)或量子点物质的荧光寿命较长，可达1～2ms，能够满足测量要求，因此而产生了时间分辨荧光或量子点荧光分析法。其技术目前是主要用在临床和科研上，它利用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素发光的特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分析，可以有效抵排除非特异性荧光，极大地提高分析的灵敏度，降低本底干扰，重复性好。目前时间分辨荧光技术不能有高通量一次检测多个指标，实现样本的批量处理。
技术实现思路
本申请的主要目的在于提一种时间分辨流式荧光检测分析装置及其使用方法，以解决相关技术中时间分辨荧光和流式细胞技术无法结合的问题。为了实现上述目的，第一方面，本申请提供了一种时间分辨流式荧光检测分析装置，其特征在于，包括前置系统，样品管，鞘液池，流动室，第一激光器，第二激光器，毛细管，集光器，第二激光器时间分辨荧光检测单元，第一激光器荧光检测器，数据采集系统，其中，所述鞘液池和所述流动室的底部设有开口，所述毛细管用于引导待测的微球混合液的流动，所述毛细管设置在所述鞘液池内，所述毛细管的底部探出所述流动室的开口，并形成检测区，所述第一激光器和所述第二激光器被布置成能够激发所述检测区内的微球混合液。优选地，所述的第一激光器的激发波长为600-650nm，所述第二激光器的最佳激发波长为290-380nm。所述的第一激光器最优激发波长为635nm，其和第一激光器荧光检测器通过集光器配合使用，第二激光器最优激发波长为295nm，340nm和365nm，和第二激光器时间分辨荧光检测单元通过集光器配合使用优选地，所述的第二激光器激发脉冲后，第二激光器时间分辨荧光检测单元延缓4ns-60000ms后检测记录第二激光器激发的荧光信号。优选地，所述的第二激光器时间分辨荧光检测单元延缓的时间间隔为8ns-2000ms。优选地，所述的微球混合液包含荧光染料高分子编码微球，待测样本和稀土镧系元素或其螯合物的液体或固体微球。优选地，所述的第二激光器激发的微球混合液内的荧光物质包括量子点荧光物质或稀土镧系元素或其螯合物的液体或固体微球，所述镧系元素优选为铕(Eu)、铽(Tb)、钐(Sm)之一或其任意组合。优选地，第一激光器激发的荧光物质包括至少两种光谱特性不同的荧光染料高分子编码微球，优选地，所述高分子编码微球的直径为1微米到20微米。本申请的另一个方面，提供所述时间分辨流式荧光检测分析装置的使用方法，其特征在于，第一激光器激发的微球与蛋白、抗体或核酸探针的共价交联，第二激光器激发的时间分辨荧光物质与蛋白、抗体或核酸探针的共价交联，加入待测样本后，使用前置系统对待测样本进行孵育震荡处理，样本液与鞘液一起输送到流动室，待测液微粒依次通过流动室的毛细管检测区域，第一激光器激发，第一激光器荧光检测器通过集光器收集荧光信号，同时第二激光器激发，延迟一段时间后，第二激光器时间分辨荧光检测单元开启，通过集光器记录采集荧光信号，采集的信号经数据采集系统分析处理。本申请具有以下优点：本申请的装置将量子点物质或时间分辨荧光技术和流式细胞技术有机互补结合，包括前置系统、流动室、流动池、鞘液管、样品管、毛细管、第一激光器(用于激发微球自身荧光物质)、第二激光器(用于激发时间分辨荧光微球或量子点荧光微球)、集光器、荧光检测器、时间分辨荧光检测单元和数据采集系统。时间分辨流式荧光检测分析仪同时用波长和时间两个参数进行信号分辨，可进行高速的进行多指标联检、既可对细胞、蛋白也可对核酸进行分析、可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。附图说明构成本申请的一部分的附图用来提供对本申请的进一步理解，使得本申请的其它特征、目的和优点变得更明显。本申请的示意性实施例附图及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：图1为本专利技术时间分辨流式荧光检测分析装置的结构示意图；附图标记1-前置系统，2-样品管，3-鞘液池，4-流动室，5-第一激光器、6-第二激光器，7-毛细管，8-集光器，9-第二激光器时间分辨荧光检测单元，10-第一激光器荧光检测器，11-数据采集系统，12-微球混合液。具体实施方式为了使本
的人员更好地理解本申请方案，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。需要说明的是，本申请的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本申请的实施例。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。在本申请中，术语“上”、“下”、“左”、“右”、“前”、“后”、“顶”、“底”、“内”、“外”、“中”、“竖直”、“水平”、“横向”、“纵向”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系。这些术语主要是为了更好地描述本申请及其实施例，并非用于限定所指示的装置、元件或组成部分必须具有特定方位，或以特定方位进行构造和操作。并且，上述部分术语除了可以用于表示方位或位置关系以外，还可能用于表示其他含义，例如术语“上”在某些情况下也可能用于表示某种依附关系或连接关系。对于本领域普通技术人员而言，可以根据具体情况理解这些术语在本申请中的具体含义。另外，术语“多个”的含义应为两个以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种时间分辨流式荧光检测分析装置，其特征在于，包括前置系统，样品管，鞘液池，流动室，第一激光器，第二激光器，毛细管，集光器，第二激光器时间分辨荧光检测单元，第一激光器荧光检测器，数据采集系统，其中，所述鞘液池和所述流动室的底部设有开口，所述毛细管用于引导待测的微球混合液的流动，所述毛细管设置在所述鞘液池内，所述毛细管的底部探出所述流动室的开口，并形成检测区，所述第一激光器和所述第二激光器被布置成能够激发所述检测区内的微球混合液。/n

【技术特征摘要】
1.一种时间分辨流式荧光检测分析装置，其特征在于，包括前置系统，样品管，鞘液池，流动室，第一激光器，第二激光器，毛细管，集光器，第二激光器时间分辨荧光检测单元，第一激光器荧光检测器，数据采集系统，其中，所述鞘液池和所述流动室的底部设有开口，所述毛细管用于引导待测的微球混合液的流动，所述毛细管设置在所述鞘液池内，所述毛细管的底部探出所述流动室的开口，并形成检测区，所述第一激光器和所述第二激光器被布置成能够激发所述检测区内的微球混合液。


2.根据权利要求1所述的时间分辨流式荧光检测分析装置，其特征在于，所述的第一激光器的激发波长为600-650nm，所述第二激光器的最佳激发波长为290-380nm。


3.根据利要求1所述的时间分辨流式荧光检测分析装置，其特征在于，所述的第二激光器激发脉冲后，第二激光器时间分辨荧光检测单元延缓4ns-60000ms后检测记录第二激光器激发的荧光信号。


4.根据权利要求3所述的时间分辨流式荧光检测分析装置，其特征在于，所述的第二激光器时间分辨荧光检测单元延缓的时间间隔为8ns-2000ms。


5.根据利要求1所述的时间分辨流式荧光检测分析装置，其特征在于，所述的微球混合液包含荧光染料高分...

【专利技术属性】
技术研发人员：高俊顺，高金波，高俊莉，
申请(专利权)人：杭州广科安德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33