【技术实现步骤摘要】
一种用于检测PTK7的比率荧光探针及其制备方法
本专利技术属纳米材料、荧光比率技术和生物分析检测领域，具体是基于荧光内滤效应和酶切循环放大技术，将黄色荧光的碳点和蓝色荧光的碳点混合，发生内滤效应而使蓝色荧光淬灭，形成比率荧光探针定量生物分子，用于检测PTK7的比率荧光探针，灵敏度高于紫外吸收，具有良好的选择性。
技术介绍
据统计，肺癌已经成为中国癌症发病率排行榜第一位，其高发病率对早期诊断技术的革新提出了新的要求。血清中肿瘤标志物检测以其创伤小、灵敏度高的特性，在早期诊断中展现出重要作用。荧光检测方法作为一种简单、灵敏的检测方法，在临床检验中得到广泛应用，新型荧光纳米材料的发展拓宽了荧光检测的应用范围。比率荧光探针通过两个荧光信号的比值表示待测物的含量，克服单荧光探针易受干扰的缺陷，同时放大检测信号。酪氨酸蛋白激酶7(PTK7)是一种膜蛋白，与肺癌的发生发展具有直接相关性，其在血清中的含量测定对于肺癌诊断具有指征意义，可以作为一种肿瘤标志物。但是PTK7在肺癌发生早期血清含量低，为提高探针的灵敏度，使用酶促循环放大荧光信号。...
【技术保护点】
1.一种用于检测PTK7的比率荧光探针，其特征在于，是采用Fe
【技术特征摘要】
1.一种用于检测PTK7的比率荧光探针，其特征在于，是采用Fe3O4纳米粒作为淬灭剂和磁性分离剂，在Fe3O4纳米粒表面交联PTK7适配体(APT)的互补链(cDNA)以特异性结合黄色荧光发射碳点y-CDs标记的APT并淬灭其荧光；PTK7与cDNA竞争结合APT使其脱离Fe3O4纳米粒恢复荧光，并通过荧光内滤效应淬灭蓝色荧光发射碳点b-CDs，形成比率荧光检测PTK7。
2.权利要求1所述的一种用于检测PTK7的比率荧光探针的制备方法，其特征在于步骤如下：
步骤（1）、分别制备黄色荧光发射碳点y-CDs、蓝色荧光发射碳点b-CDs和Fe3O4纳米粒；
步骤（2）、在Fe3O4纳米粒表面交联PTK7适配体的互补链cDNA形成Fe3O4-cDNA复合物；
步骤（3）、制备黄色荧光发射碳点y-CDs标记的APT，获得y-CDs-APT复合物；
步骤（4）、等体积的Fe3O4-cDNA复合物和y-CDs-APT在5℃摇床反应60min，得到探针Fe3O4-cDNA-APT-y-CDs复合物；
步骤（5）、将DNaseI、b-CDs以及不同浓度的PTK7加入步骤（4）的反应体系中；PTK7与cDNA竞争结合Fe3O4-cDNA-APT-y-CDs复合物表面的APT使其脱离Fe3O4纳米粒，荧光由复合后的淬灭状态改变为恢复荧光；通过荧光内滤效应淬灭蓝色荧光发射碳点(b-CDs)，b-CDs被淬灭时荧光值维持不变，而y-CDs的荧光值随PTK7浓度的增加而提升，y-CDs与b-CDs的荧光比值增大，在一定范围内，y-CDs与b-CDs...
【专利技术属性】
技术研发人员：马云苏，王园，刘永杰，杨冬芝，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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