一种提升梨组培苗大田移栽成活率的方法技术

本发明专利技术公开了一种提升梨组培苗大田移栽成活率的方法。本发明专利技术提供了一套以劈接为基础操作的微嫁接方法，以锡箔纸进行绑缚，其中劈接能够使砧木和接穗更大程度的接触贴合，锡箔纸可以提供有效支撑，并且保持接口密闭不透光，提供黑暗环境以促进愈伤组织生成，使砧木和接穗快速建立联系；最后通过合理炼苗、移栽得到成活率100％且长势良好的嫁接苗。

A method to improve the survival rate of transplanting pear tissue culture seedlings in the field

【技术实现步骤摘要】
一种提升梨组培苗大田移栽成活率的方法
本专利技术涉及微嫁接
，涉及一种提升梨组培苗大田移栽成活率的方法。
技术介绍
组织培养技术也被称为离体培养技术，组织培养就是将植株的器官、组织、细胞分离，接种在培养基中，在人为创造的无菌环境中生长发育成完整植株。将从大田获得的带有嫩芽的梨新梢作为外植体进行消毒，接种在特定培养基中培养，获得无根组培苗，以进行脱毒、转基因等方面的研究，这一技术已经相当成熟。但是，如何将无根的试验材料再从组培环境中高效转移至大田，获得长势良好、稳定的梨苗，这一过程还存在很多问题。目前，普遍使用的方法是，首先在培养基中添加植物激素，促进组培苗底端的根部分化，进而对生根良好的梨苗进行炼苗，最后移栽。研究表明，此方法周期长，生根时间长；由激素催生的根部较弱，且根部长势不一致，与植物体连接不紧密；生根率低；移栽成活率低，移栽后梨苗很难适应大田环境，生长缓慢，抗性差。
技术实现思路
针对以上技术的不足，本专利技术提供了一种利用微嫁接技术高效提升梨组培苗大田移栽成活率的方法。本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：一种利用微嫁接技术高效提升梨组培苗大田移栽成活率的方法，包含以下步骤：(1)砧木准备：对消毒后的梨洁净种胚进行培养，长至3～5厘米时选择单根幼苗作为砧木；(2)接穗准备：选择继代培养20～30天，带有2～3片叶子，茎上无多余分生且叶片舒展的梨组培苗作为接穗；(3)砧木和接穗处理：砧木处理：将单根砧木幼苗从子叶下方横切，去除子叶及以上部分，保留根部和部分茎段，然后从其顶端纵向劈开约1厘米；接穗处理：将接穗底端削成楔形，与砧木长度尽量保持一致；(4)微嫁接：将接穗插入砧木劈口中，绑缚锡箔纸并用镊子将四周捏合紧密，将嫁接苗于生根培养基1/2MS+IBA0.6mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/LPH＝5.90～5.95中进行培养14～16天；(5)炼苗：选择生根良好的嫁接苗，无菌环境中将锡箔纸摘除，闭瓶炼苗7天，忌开瓶炼苗引入杂菌；(6)移栽：将嫁接苗移栽到灭菌的营养土中，浇透水并在营养钵上方覆盖保鲜膜，戳适量小洞透气，置于植物光照培养箱中培养，一周左右嫁接苗生长稳定后摘除保鲜膜继续培养。作为本专利技术的一种优选实施方式，所述的步骤(1)砧木选择野生梨，优选山梨、杜梨和川梨。作为本专利技术的一种优选实施方式，步骤(1)砧木准备：取消毒后的梨洁净种胚在MS+30g蔗糖+7.5g琼脂PH＝5.80～6.0培养基中进行暗培养，待种子子叶变绿，胚根开始伸长，转移至生长培养基MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.5mg/L+蔗糖30g+琼脂7.5gPH＝5.80～6.0中光下培养，长至3～5厘米时选择单根幼苗作为砧木。作为本专利技术的一种优选实施方式，步骤(1)中梨洁净种胚通过以下方法获得：选择干净的野生梨种子，于无菌环境中进行消毒，消毒方法：75％无水乙醇消毒1分钟，10％次氯酸钠溶液消毒5分钟，期间反复震荡，充分消毒杀菌，每一步消毒处理后用灭菌蒸馏水冲洗3～5次；在灭过菌的滤纸上，用镊子按住消毒后的种子，将刀从种子上方垂直插入远离胚根的一端，尽量不伤害种胚，后倾斜角度沿种子侧边划开种皮，去除内外种皮，取出种胚，期间应避免伤及胚根。作为本专利技术的一种优选实施方式，(2)接穗准备：接穗为在MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/LPH＝5.8～6.0的培养基中继代培养20～30天的梨组培苗，带有2～3片叶子，茎上无多余分生且叶片舒展。作为本专利技术的一种优选实施方式，步骤(6)：移栽时用清水将嫁接苗根部残留的培养基轻轻涮洗干净，移栽到经过121℃20min高温高压灭菌后的营养土中，移栽后浇透水并在营养钵上方覆盖保鲜膜，戳适量小洞透气，置于植物光照培养箱，光照16h；光强2500lx；温度24℃±1℃中培养，一周左右嫁接苗生长稳定后摘除保鲜膜继续培养。有益效果：本专利技术对砧木和接穗的选择、嫁接方式、嫁接苗的选择和培养、嫁接苗移栽都做了详细考察优化，提供了一套完整的梨微嫁接方法，极大的提升了嫁接的成活率，并且移栽至大田的成活率达到100％。此外，嫁接完成后，嫁接苗只需要在无菌环境中生长14天左右即可移栽。本专利技术利用微嫁接技术，在无菌环境中将梨组培苗与实生砧木进行嫁接，由于砧木本身具备生根能力，因此使生根时间大大缩短，并且根部长势旺盛；砧木为野生梨，抗性优良，这就为嫁接苗的大田移栽和移栽后的生长发育提供了保障。本专利技术提供了一种最适宜梨种子消毒、萌发和生长的方法，通过调节生长素和细胞分裂素的配比，培养出最适宜微嫁接的实生砧木幼苗；本专利技术还提供了一套以劈接为基础操作的微嫁接方法，以锡箔纸进行绑缚，其中劈接能够使砧木和接穗更大程度的接触贴合，并且对砧穗粗细的一致程度要求较小，锡箔纸可以提供有效支撑，并且保持接口密闭不透光，提供黑暗环境以促进愈伤组织生成，使砧木和接穗快速建立联系；最后通过合理炼苗、移栽得到成活率100％且长势良好的嫁接苗。附图说明图1为在无菌环境中培养的适宜作为砧木的梨苗状态。图2为适宜进行嫁接且底部被削成楔形的接穗。图3为劈接示意图(上为秋子梨接穗，下为杜梨砧木)图4为锡箔纸绑缚示意图，即嫁接完成后的状态。图5为炼苗后移栽至大田初期的处理方法。图6为移栽成活(有新叶长出)的嫁接苗生长状态。具体实施方式实施例1步骤1.选择干净的野生梨种子，于无菌环境中进行消毒，消毒方法：75％无水乙醇消毒1分钟，10％次氯酸钠溶液消毒5分钟，期间反复震荡，充分消毒杀菌，每一步消毒处理后用灭菌蒸馏水冲洗3～5次。步骤2.在灭过菌的滤纸上，用镊子按住消毒后的种子，将刀从种子上方垂直插入远离胚根的一端，尽量不伤害种胚，后倾斜角度沿种子侧边划开种皮，去除内外种皮，期间应避免伤及胚根。步骤3.取出洁净种胚后在MS+30g蔗糖+7.5g琼脂PH＝5.80～6.0培养基中进行暗培养，待种子子叶变绿，胚根开始伸长，转移至生长培养基MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.5mg/L+蔗糖30g+琼脂7.5gPH＝5.80～6.0中光下培养，长至3～5厘米时选择单根幼苗作为砧木(图1)。步骤4.接穗为在MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/LPH＝5.8～6.0的培养基中继代培养20天的梨组培苗，带有2～3片叶子，茎上无多余分生且叶片舒展。步骤5.砧木处理：选择长至3～5厘米的单根砧木幼苗，从子叶下方横切，去除子叶及以上部分，保留根部和部分茎段，然后从其顶端纵向劈开约1厘米；接穗处理：将接穗底端削成楔形，与砧木长度尽量保持一致(图2)；步骤6.微嫁接：将接穗插入砧木劈口中(图3)，绑缚锡箔纸并用镊子将四周捏合紧密，四角折合(图4)。后将嫁接苗于生根培养基1/2MS+IBA0.6mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/LPH＝5.9本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用微嫁接技术高效提升梨组培苗大田移栽成活率的方法，其特征在于包含以下步骤：/n(1)砧木准备：对消毒后的梨洁净种胚进行培养，长至3～5厘米时选择单根幼苗作为砧木；/n(2)接穗准备：选择继代培养20～30天，带有2～3片叶子，茎上无多余分生且叶片舒展的梨组培苗作为接穗；/n(3)砧木和接穗处理：砧木处理：将单根砧木幼苗从子叶下方横切，去除子叶及以上部分，保留根部和部分茎段，然后从其顶端纵向劈开约1厘米；接穗处理：将接穗底端削成楔形，与砧木长度尽量保持一致；/n(4)微嫁接：将接穗插入砧木劈口中，绑缚锡箔纸并用镊子将四周捏合紧密，将嫁接苗于生根培养基1/2MS+IBA 0.6mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L PH＝5.90～5.95中进行培养14～16天；/n(5)炼苗：选择生根良好的嫁接苗，无菌环境中将锡箔纸摘除，闭瓶炼苗7天；/n(6)移栽：将嫁接苗移栽到灭菌的营养土中，浇透水并在营养钵上方覆盖保鲜膜，戳适量小洞透气，置于植物光照培养箱中培养，6～9天嫁接苗生长稳定后摘除保鲜膜继续培养。/n

【技术特征摘要】
1.一种利用微嫁接技术高效提升梨组培苗大田移栽成活率的方法，其特征在于包含以下步骤：
(1)砧木准备：对消毒后的梨洁净种胚进行培养，长至3～5厘米时选择单根幼苗作为砧木；
(2)接穗准备：选择继代培养20～30天，带有2～3片叶子，茎上无多余分生且叶片舒展的梨组培苗作为接穗；
(3)砧木和接穗处理：砧木处理：将单根砧木幼苗从子叶下方横切，去除子叶及以上部分，保留根部和部分茎段，然后从其顶端纵向劈开约1厘米；接穗处理：将接穗底端削成楔形，与砧木长度尽量保持一致；
(4)微嫁接：将接穗插入砧木劈口中，绑缚锡箔纸并用镊子将四周捏合紧密，将嫁接苗于生根培养基1/2MS+IBA0.6mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/LPH＝5.90～5.95中进行培养14～16天；
(5)炼苗：选择生根良好的嫁接苗，无菌环境中将锡箔纸摘除，闭瓶炼苗7天；
(6)移栽：将嫁接苗移栽到灭菌的营养土中，浇透水并在营养钵上方覆盖保鲜膜，戳适量小洞透气，置于植物光照培养箱中培养，6～9天嫁接苗生长稳定后摘除保鲜膜继续培养。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的步骤(1)砧木选择野生梨，优选山梨、杜梨和川梨。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(1)砧木准备：取消毒后的梨洁净种胚在MS+30g蔗糖+7.5g琼脂PH＝5.80～6.0培养基中进行暗培养，待种子子叶变绿，胚根...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴俊，冯鑫慧，李甲明，张绍铃，朱荣香，泥江萍，张明月，齐开杰，赵渴娇，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32