将悬浮液组分粘附到基材的溶液和方法技术

本公开涉及一种用于将细胞学或组织学样品(诸如血沉棕黄层)粘附至基材(诸如显微镜载玻片)的方法和附着溶液。附着溶液包括附着基质、抗凝剂和非甾体抗炎药。附着基质可以是醇、酸、氧化剂、有机卤、酮或它们的任何组合。一旦获得样品，就可以将样品重悬浮在附着溶液中，或者可以将附着溶液添加到样品中。然后可以将样品以一个或多个液滴的形式分配到分析平台上并进行固化。

Solution and method for adhesion of suspension components to substrate

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】将悬浮液组分粘附到基材的溶液和方法相关申请的交叉引用本申请是2015年12月2日提交的申请号为14/956,622的部分继续申请，其要求2014年12月2日提交的临时申请号62/086,309的权益，其是2014年6月27日提交的申请号14/317,683的部分继续申请，其要求2013年7月19日提交的临时申请号61/856,498号和2013年7月19日提交的临时申请号61/856,506的权益。
本公开总体上涉及分析悬浮液，并且特别地涉及用于将悬浮液组分粘附至基材的溶液和方法。背景当前的诊断方法和技术依赖于组织学和细胞学样品的解释。在这些解释中的一个重要方面是：样品保持粘附在要对其进行分析和处理的基材(例如显微镜载玻片)上。然后，由于样品的粘附可以在随后的处理中从样品中获得有价值的诊断信息。附图说明图1显示了用于制作示例附着溶液的示例方法的流程图。图2显示了用于将样品粘附至基材的示例方法的流程图。图3A显示了已重悬浮在示例附着溶液中的示例样品。图3B显示了示例样品与附着溶液混合以形成重悬浮的细胞学样品的示例样品。图3C显示了沉积在示例分析平台上的重悬浮的样品。图3D显示了已散布并粘附在分析平台上的重悬浮样品。详细说明本公开涉及用于将细胞学或组织学样品粘附至基材的方法和附着溶液。附着溶液包括附着基质和非甾体抗炎药。附着基质可以是醇，酸，氧化剂，有机卤素，酮(例如丙酮)或其任何组合，例如卡诺溶液(Carnoy’ssolution)。附着溶液还可包含抗凝剂。一旦获得样品，就可以将样品重悬浮在附着溶液中，或者可以将附着溶液添加到样品中。样品以一个或多个液滴的形式分配到分析平台上并固化。然后可以将样品固定、渗透、标记、封闭和洗涤。然后可以对样品进行成像和分析。在下面的描述中，术语“样品”用于描述要分析的样本。样本可以是悬浮液，悬浮液的一部分或悬浮液的组分。例如，当悬浮液是抗凝全血时，样品可以是抗凝全血(即悬浮液)，血沉棕黄层(即悬浮液的一部分)或循环肿瘤细胞(即悬浮液的组分)。附着溶液附着溶液可以将样品粘附至基材。样品可以是血样的血沉棕黄层，并且基材可以是显微镜载玻片的表面。附着溶液包括附着基质和非甾体抗炎药。附着溶液也可以包含水。代替水或除水之外，还可以包括缓冲剂或可以使用缓冲溶液。缓冲剂或缓冲溶液的缓冲剂可包括但不限于ACES,ADA,AMP,AMPD,AMPSO,BES,Bicine,BIS-TRIS,BIS-TRIS丙烷,CABS,CAPS,CAPSO,CHES,DIPSO,EDTA,HEPPS(EPPS),Gly-Gly,HEPBS,HEPES,MES,MOPS,MOPSO,PIPES,POPSO，磷酸钾，磷酸钠(一元和/或二元)，TAPS,TAPSO,TES,Tricine,tris,及其组合。缓冲剂或缓冲溶液的pH值范围可以是5至12。应当注意，在第一实施方案中，附着溶液包括盐，例如生理盐水溶液中的盐，其中附着溶液相对于样品保持低渗，因为当干燥或固化时等渗或高渗附着溶液可能导致样品破裂。备选地，附着溶液不包含盐，例如生理盐水溶液中包含的盐，因为盐可能会导致样品在干燥或固化时破裂。附着基质可以包括醇，例如乙醇，甲醇，丙醇，异丙醇，丁醇和酸，氧化剂，有机卤，酮，例如丙酮，或其任意组合例如卡诺溶液。附着基质体可能能够固定样品组分，例如细胞，而不会交联其他样品组分，例如蛋白质。防止其他样品组分(例如蛋白质)的交联可以避免其他处理步骤，例如抗原修复。换句话说，将样品组分通过附着基质固定在基材上就排除了抗原修复的过程。附着基质也可以具有快速(即小于一小时)的固化时间。例如当附着溶液和样品已经混合时，附着基质的最终浓度可以为60-70体积％，更具体地为63-68体积％。具有附着基质的浓度超出所需范围可能会由于例如裂解、结块而影响样品或其一部分，无法粘附至基材等。附着基质的最终浓度可以由待粘附的样品的测量特性来确定，包括但不限于样品体积、细胞压积、血细胞比容水平、血液类型、样品类型(即血液、尿液、血沉棕黄层、单个细胞等)。非甾体抗炎药可以是但不限于乙酰水杨酸、塞来昔布(Celebrex)、双氯芬酸(Voltaren)、双氟尼醛(Dolobid)、依托度酸(Lodine)、布洛芬(Motrin)、消炎痛(Indocin)、酮洛芬(Orudis)、酮咯酸(Toradol)、萘丁美酮(Relafen)、萘普生(Aleve、Naprosyn)、奥沙普嗪(Daypro)、吡罗昔康(Feldene)、Salsalate(Amigesic)、舒林酸(Clinoril)、托美汀(Tolectin)等。非甾体抗炎药可以起到抗血栓形成的作用(即减少血液凝结，例如通过降低各种血液组分的血液凝结功能)。非甾体抗炎药的终浓度可以为100-1000ug/mL。附着溶液还可以包含抗凝剂，其可以是但不限于肝素、肝素钠、肝素/右旋糖、乙二胺四乙酸、达肝素钠、阿加曲班、比伐卢定、来匹卢定(lepirudin)等。抗凝剂防止样品的凝结(即结块、凝结或凝固)。抗凝剂的最终浓度可以为10-1000ug/mL。附着溶液还可以包括生物聚合物，以增加样品和基材之间的粘附力。生物聚合物可以包括但不限于仿生粘合剂聚合物(例如来自海洋生物的多酚蛋白；3,4-二羟基苯基丙氨酸)，纤维蛋白胶，明胶-间苯二酚-甲醛，聚-L-赖氨酸，聚-D-赖氨酸等。制备附着溶液的方法以下是用于制作附着溶液的示例试剂：1.肝素2000μg/mL：通过溶解20mg肝素钠盐(SigmaH3393)在10mL水中制备2.BDCell-Tak:BD细胞和组织粘合剂(TissueAdhesive)(BD354241)–约1500μg/mL储备液浓度3.Cell-Tak缓冲液5X:通过溶解21g碳酸氢钠(NaHCO3)到500mL水中制备4.Cell-Tak缓冲液1X:通过溶解4.2g碳酸氢钠(NaHCO3)到500mL水中并加入2.5mL1M盐酸(HCl)制备5.SigmaAldrich494437:甲醇(约99.93体积％)下述是用于附着溶液的示例制剂，如图1所示:1.甲醇70体积％,100ug/mL肝素,300ug/mL乙酰水杨酸,50ug/mLA.混合350uL和650uLCell-Tak缓冲液1XB.充分混合C.加入1.5mL水D.加入500uL肝素2000ug/mLE.加入7.0mL甲醇F.加入3000ug乙酰水杨酸G.充分混合2.甲醇60体积％,300ug/mL乙酰水杨酸:A.加入6000uL甲醇到4000uL水中B.加入3000ug乙酰水杨酸C.充分混合使用附着溶液的方法图2显示了用于将样品粘附至基材的示例方法。在方框202中，获得样本。为了获得样品，可以直接从受试者中取出样品，或者可以对样品进行富集和/或本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种溶液，包含：/n醇；和/n最终浓度为100-1000ug/mL的非甾体抗炎药，/n其中所述最终浓度为与样品混合时所述非甾体抗炎药的浓度。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171018 US 15/787,1851.一种溶液，包含：
醇；和
最终浓度为100-1000ug/mL的非甾体抗炎药，
其中所述最终浓度为与样品混合时所述非甾体抗炎药的浓度。


2.根据权利要求1所述的溶液，其中，所述醇为甲醇。


3.根据权利要求2所述的溶液，其中，所述非甾体抗炎药是乙酰水杨酸。


4.根据权利要求3所述的溶液，还包括缓冲剂。

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【专利技术属性】
技术研发人员：D·E·坎普顿，J·诺德伯格，R·C·苏伯特，S·卡雷，
申请(专利权)人：瑞尔赛特股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US