一种副粘病毒的拯救系统和副粘病毒拯救方法技术方案

本发明专利技术提供了一种副粘病毒拯救方法，包括以下步骤：(1)将副粘病毒基因组质粒、N质粒、P质粒、L质粒、pT7‑T7RNAP质粒、pCDIBP‑T7RNAP质粒和动物细胞混合；(2)使用物理或化学方法介导多质粒共转染；(3)培养细胞；(4)收集病毒。所述pT7‑T7RNAP质粒是带有T7启动子和T7RNA聚合酶DNA序列的质粒；所述pCDIBP‑T7RNAP质粒是带有CMV启动子和T7RNA聚合酶DNA序列的质粒。本发明专利技术可以高效拯救出副粘病毒，并且能够适用于人用副粘病毒减毒活疫苗的生产。

A rescue system and method of paramyxovirus

【技术实现步骤摘要】
一种副粘病毒的拯救系统和副粘病毒拯救方法
本专利技术涉及病毒反向遗传学领域，特别涉及一种副粘病毒的拯救系统和方法。
技术介绍
副粘病毒是与粘液蛋白有特殊亲和性的一类病毒，其中麻疹、呼吸道合胞、新城疫病毒等可感染人或动物，人们通常用减毒活疫苗对副粘病毒感染进行预防。减毒活疫苗是指病原体经过各种处理后，发生变异，毒性减弱，但仍保留其免疫原性的毒株。副粘病毒是一种负链RNA病毒。RNA病毒的反向遗传学,是采用病毒的遗传材料，在培养细胞或易感宿主中重新拯救出活病毒或类似病毒物质。采用反向遗传学系统不需要经过传统毒株的变异筛选即可拯救获得活疫苗中的活性成分病毒减毒株。与正链RNA病毒相比，负链RNA病毒裸露的基因组或由cDNA转录所得的RNA无感染性，需与核衣壳蛋白，RNA依赖型RNA聚合酶等形成核糖核蛋白复合物，才能开始正常的复制和组装。因此，利用反向遗传学系统拯救副粘病毒，需共转染含病毒全长cDNA的质粒和表达病毒N、P、L蛋白的辅助质粒，其中N蛋白也称NP蛋白。T7RNA聚合酶，是一种高度特异识别T7启动子序列的DNA依赖的5'→3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种副粘病毒的拯救系统，其特征在于，它包括：病毒基因组质粒、N质粒、P质粒、L质粒、pCDIBP-T7RNAP质粒和pT7-T7RNAP质粒；/n所述病毒基因组质粒是带有T7启动子、且带有副粘病毒的基因组或反基因组序列的质粒；/n所述N质粒是带有启动子序列和前述副粘病毒对应N蛋白或NP蛋白的DNA序列的质粒；/n所述P质粒是带有启动子序列和前述副粘病毒对应P蛋白的DNA序列的质粒；/n所述L质粒是带有启动子序列和前述副粘病毒对应L蛋白的DNA序列的质粒；/n所述pCDIBP-T7RNAP质粒是带有CMV启动子和T7RNA聚合酶DNA序列的质粒；/n所述pT7-T7RNAP质粒是带有T7启动...

【技术特征摘要】
1.一种副粘病毒的拯救系统，其特征在于，它包括：病毒基因组质粒、N质粒、P质粒、L质粒、pCDIBP-T7RNAP质粒和pT7-T7RNAP质粒；
所述病毒基因组质粒是带有T7启动子、且带有副粘病毒的基因组或反基因组序列的质粒；
所述N质粒是带有启动子序列和前述副粘病毒对应N蛋白或NP蛋白的DNA序列的质粒；
所述P质粒是带有启动子序列和前述副粘病毒对应P蛋白的DNA序列的质粒；
所述L质粒是带有启动子序列和前述副粘病毒对应L蛋白的DNA序列的质粒；
所述pCDIBP-T7RNAP质粒是带有CMV启动子和T7RNA聚合酶DNA序列的质粒；
所述pT7-T7RNAP质粒是带有T7启动子和T7RNA聚合酶DNA序列的质粒。


2.如权利要求1所述的拯救系统，其特征在于，所述pCDIBP-T7RNAP质粒具有如SEQIDNO.1所述的序列。


3.如权利要求1或2所述的拯救系统，其特征在于，所述pT7-T7RNAP质粒具有如SEQIDNO.2所示的序列。


4.一种副粘病毒拯救方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将权利要求1～3所述病毒基因组质粒、N质粒、P质粒、L质粒、pCDIBP-T7RNAP质粒、pT7-T7RNAP质粒和动物细胞混合；
(2)使用物理或化学方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘兰军，张勇侠，高雅丽，陈宗香，
申请(专利权)人：成都生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：四川;51