新城疫病毒及其用途制造技术

本发明专利技术描述的是经工程改造以表达免疫细胞的共刺激信号的激动剂的嵌合的新城疫病毒和包含这样的病毒的组合物。本发明专利技术还描述的是经工程改造以表达免疫细胞的抑制信号的拮抗剂的嵌合的新城疫病毒和包含这样的病毒的组合物。该嵌合的新城疫病毒和组合物可用于治疗癌症。另外，本发明专利技术描述的是用于治疗癌症的方法，包括给予新城疫病毒与免疫的共刺激信号的激动剂和/或免疫细胞的抑制信号的拮抗剂的组合。

Newcastle disease virus and its application

【技术实现步骤摘要】
新城疫病毒及其用途本申请是申请日为2014年03月04日、申请号为201480026748.7、名称为“新城疫病毒及其用途”的专利技术申请的分案。本申请要求美国临时申请号61/782,994(申请日为2013年3月14日)的优先权，所述美国临时申请以其整体并入本文作为参考。本专利技术是在政府资助下完成的，资助号为5T32CA009207-35和HHSN26620070010C，资助奖金由美国国家卫生研究院(theNationalInstitutesofHealth)提供。美国政府在本专利技术中具有一定的权利。1.
本文描述的是经工程改造以表达免疫细胞的共刺激信号的激动剂的嵌合的新城疫病毒，和包含这样的病毒的组合物。本文还描述的是经工程改造以表达免疫细胞的抑制信号的拮抗剂的嵌合的新城疫病毒，和包含这样的病毒的组合物。所述嵌合的新城疫病毒和组合物可用于治疗癌症。另外，本文描述的是用于治疗癌症的方法，包括给予新城疫病毒与免疫细胞的共刺激信号的激动剂和/或免疫细胞的抑制信号的拮抗剂的组合。2.
技术介绍
新城疫病毒(NewcastleDiseaseVirus,NDV)是副粘病毒科(Paramyxoviridae)中的禽腮腺炎病毒属或禽副粘病毒属(Avulavirus)的成员，已表明可感染许多禽类物种(Alexander,DJ(1988).Newcastledisease,Newcastlediseasevirus--anavianparamyxovirus(新城疫，新城疫病毒—一种禽副粘病毒).KluwerAcademicPublishers:Dordrecht,TheNetherlands.,第1-22页)。NDV具有呈负义的单链RNA基因组并且不经历与宿主基因组或与其它病毒重组(Alexander,DJ(1988).Newcastledisease,Newcastlediseasevirus--anavianparamyxovirus(新城疫，新城疫病毒—一种禽副粘病毒).KluwerAcademicPublishers:Dordrecht,TheNetherlands.第1-22页)。该基因组RNA含有以3'-NP-P-M-F-HN-L-5’的顺序的基因，这在下文有更详细的描述。两种另外的蛋白质V和W由NDV的P基因通过RNA编辑产生的可变mRNA产生。该基因组RNA还在3'末端含有前导序列。病毒体(virion)的结构元件包括病毒包膜，病毒包膜是来源于细胞质膜的脂质双层。糖蛋白血凝素-神经氨酸酶(hemagglutinin-neuraminidase,HN)从包膜中伸出，使得病毒含有血凝素(例如，受体结合/基因融合)和神经氨酸酶两种活性。融合糖蛋白(F)，也与病毒膜相互作用，首先作为无活性前体产生，然后经翻译后修饰切割产生两条经二硫键连接的多肽。有活性的F蛋白通过促进病毒包膜与宿主细胞质膜的融合来参与NDV的穿透进入宿主细胞。基质蛋白(M)参与病毒装配，并且与病毒膜以及核衣壳蛋白二者相互作用。核衣壳的主要蛋白质亚基是核衣壳蛋白(NP)，其赋予衣壳上的螺旋状对称。与核衣壳缔合的是P蛋白和L蛋白。经受了磷酸化的磷酸蛋白(P)被认为在转录时起调节作用，并且也可以参与甲基化、磷酸化和聚腺苷酸化。L基因，编码依赖RNA的RNA聚合酶，与P蛋白一起是病毒RNA合成所需要的。L蛋白，几乎占到病毒基因组的编码容量的一半，是病毒蛋白中最大的，并且在转录和复制中起到重要的作用。V蛋白已被证明抑制干扰素-α并且对NDV的毒力作出贡献(Huang等人(2003).NewcastlediseasevirusVproteinisassociatedwithviralpathogenesisandfunctionsasanAlphaInterferonAntagonist(新城疫病毒V蛋白与病毒的致病性相关并且起α干扰素拮抗剂的作用).JournalofVirology77:8676-8685)。已有报道指出，天然存在的NDV在多种动物肿瘤模型中是有效的溶瘤剂(oncolyticagent)(Sinkovics,JG和Horvath,JC(2000).Newcastlediseasevirus(NDV):briefhistoryofitsoncolyticstrains(新城疫病毒(NDV)：其溶瘤株的生活简史).JClinVirol16:1-15；Zamarin等人,2009；MolTher17:697；Elankumaran等人,2010；JVirol84:3835；Schirrmacher等人,2009；MethodsMolBiol542:565；Bart等人,1973；NatNewBiol245:229)。天然存在的NDV毒株已在对抗人类晚期癌症的多种临床试验中使用(Sinkovics,JG和Horvath,JC(2000).Newcastlediseasevirus(NDV):briefhistoryofitsoncolyticstrains(新城疫病毒(NDV)：其溶瘤株的生活简史).JClinVirol16:1-15；Lorence等人(2007).Phase1clinicalexperienceusingintravenousadministrationofPV701,anoncolyticNewcastlediseasevirus(使用PV701—一种溶瘤新城疫病毒的静脉内给药的1期临床体验).CurrCancerDrugTargets7:157-167；Hotte等人(2007).AnoptimizedclinicalregimenfortheoncolyticvirusPV701(用于溶瘤病毒PV701的最优化临床方案).ClinCancerRes13:977-985；Freeman等人(2006).PhaseI/IItrialofintravenousNDV-HUJoncolyticvirusinrecurrentglioblastomamultiforme(静脉内NDV-HUJ溶瘤病毒在复发性多形性成胶质细胞瘤中的I/II期试验).MolTher13:221-228；Pecora等人(2002).PhaseItrialofintravenousadministrationofPV701,anoncolyticvirus,inpatientswithadvancedsolidcancers(PV701—一种溶瘤病毒的静脉内给药在晚期实体癌症患者中的I期试验).JClinOncol20:2251-2266；Csatary等人(2004).MTH-68/Honcolyticviraltreatmentinhumanhigh-gradegliomas(人类高级别胶质瘤中的MTH-68/H溶瘤病毒治疗).JNeurooncol67:83-93)。然而，天然存在的NDV毒株在这些针对人类晚期癌症的临床试验中的成功仅仅是边缘的(Hotte等人(2007).Anoptimizedclinicalregimenfortheonco本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.嵌合的新城疫病毒(NDV)，包含编码免疫细胞的共刺激受体的激动剂的包装基因组，其中所述激动剂由该病毒表达。/n

【技术特征摘要】
20130314 US 61/782,9941.嵌合的新城疫病毒(NDV)，包含编码免疫细胞的共刺激受体的激动剂的包装基因组，其中所述激动剂由该病毒表达。


2.嵌合的NDV，包含编码免疫细胞的抑制受体的拮抗剂的包装基因组，其中所述拮抗剂由该病毒表达。


3.权利要求1或2的嵌合的NDV，其中所述包装基因组编码突变的F蛋白并且所述突变的F蛋白由该病毒表达。


4.权利要求1或2的嵌合的NDV，其中所述免疫细胞是T淋巴细胞或自然杀伤(NK)细胞。


5.权利要求1的嵌合的NDV，其中所述共刺激受体是糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)、OX40、CD27、CD28、4-1BB或CD40。


6.权利要求2的嵌合的NDV，其中所述抑制受体是细胞毒性T-淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、编程性细胞死亡蛋白1(PD1)、B和T-淋巴细胞弱化子(BTLA)、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)、淋巴细胞激活基因3(LAG3)或T-细胞膜蛋白3(TIM3)。


7.权利要求1的嵌合的NDV，其中所述激动剂是特异性结合至共刺激受体的抗体。


8.权利要求1的嵌合的NDV，其中所述激动剂是特异性结合至共刺激受体的配体。


9.权利要求1的嵌合的NDV，其中所述激动剂是特异性结合至GITR、OX40、CD27、CD28、4-1BB或CD40的抗体。


10.权利要求7或9的嵌合的NDV，其中所述抗体是单克隆抗体或单链Fv。


11.权利要求8的嵌合的NDV，其中所述配体是GITRL、CD40L、CD137L、OX40L、CD70或ICOSL。


12.权利要求2的嵌合的NDV，其中所述拮抗剂是特异性结合至抑制受体的抗体。


13.权利要求2的嵌合的NDV，其中所述拮抗剂是特异性结合至CTLA-4、PD-1、BTLA、KIR、LAG3或TIM3的抗体。


14.权利要求2的嵌合的NDV，其中所述拮抗剂是抑制受体的配体的可溶性受体。


15.权利要求2的嵌合的NDV，其中所述拮抗剂是特异性结合至抑制受体的配体的抗体。


16.权利要求2的嵌合的NDV，其中所述拮抗剂是特异性结合至PDL1、PDL2、B7-H3、B7-H4、HVEM或Gal9的抗体。


17.权利要求14的嵌合的NDV，其中所述可溶性受体是PD1、BTLA、KIR、LAG3或TIM3的胞外结构域。


18.权利要求12、13、15或16的嵌合的NDV，其中所述抗体是单克隆抗体或sc-Fv。


19.药物组合物，包含权利要求1、5、7、8、9或11的嵌合的NDV和药学上可接受的载体。


20.药物组合物，包含权利要求2、6、12、13、14、15、16或17的嵌合的NDV和药学上可接受的载体。


21.用于生产药物组合物的方法，所述方法包括：
a.将权利要求1、2、5-9或11-17中任一项的嵌合的NDV在对NDV感染敏感的细胞系中繁殖；和
b.收集子代病毒，
其中使所述病毒生长至足够数量，并且在所述病毒没有污染的足够条件下生长，使得所述子代病毒适合于配制成药物组合物。


22.用于生产药物组合物的方法，所述方法包括：
a.将权利要求1、2、5-9或11-17中任一项的嵌合的NDV在含胚卵中繁殖；和
b.收集子代病毒，
其中使所述病毒生长至足够数量，并且在所述病毒没有污染的足够条件下生长，使得所述子代病毒适合于配制成药物组合物。


23.细胞系，包含权利要求1、2、5-9或11-17中任一项的嵌合的NDV。


24.含胚卵，包含权利要求1、2、5-9或11-17中任一项的嵌合的NDV。


25.用于治疗癌症的方法，包括向有其需要的对象给予包含权利要求1、5、7、8、9或11中任一项的嵌合的NDV的药物组合物。


26.用于治疗癌症的方法，包括向有其需要的对象给予包含权利要求2、6、12、13、14、15、16或17中任一项的嵌合的NDV的药物组合物。


27.权利要求25的方法，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：彼得·帕雷斯，阿道夫·加西亚塞斯特，德米特里·扎马林，詹姆斯·艾利森，杰德·D·沃尔乔克，
申请(专利权)人：西奈山伊坎医学院，纪念斯隆凯特林癌症中心，
类型：发明
国别省市：美国;US