含有噻唑烷-4-酮的免疫调节剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了含有噻唑烷‑4‑酮的免疫调节剂或其对映异构体及其应用，所述噻唑烷‑4‑酮的免疫调节剂具有如下的结构：

Immunomodulator containing thiazolidine-4-one and its application

【技术实现步骤摘要】
含有噻唑烷-4-酮的免疫调节剂及其应用
本专利技术涉及药物领域，尤其涉及含有噻唑烷-4-酮的免疫调节剂及其应用。
技术介绍
自体免疫细胞疗法是肿瘤生物治疗的重要方法之一。自体免疫细胞疗法是将从自体外周血中分离出单个核细胞，在多种免疫活性因子的作用下，通过体外培养，有效活化和扩增为免疫活性细胞，包括NK细胞、CIK细胞和NKT(naturalkillerT)细胞等，再输入患者体内，使免疫细胞直接杀伤肿瘤细胞或病毒感染细胞，或调节和增强机体的免疫功能的治疗方法NKT细胞是人外周血单个核细胞在体外经IL-2等多种细胞因子刺激后，获得的以表达CD3+CD6+标志为主的免疫效应细胞，具有T淋巴细胞的杀瘤活性，为新一代杀伤效应细胞。NKT细胞的主要特征为T细胞受体(TCR)基因表达的恒定性、CD1d的限制性以及细胞因子产生的迅速、高水平性。NKT细胞既能增强免疫反应又能抑制免疫反应，从而在抗肿瘤、抗感染、抑制自身免疫性疾病及移植耐受中发挥重要作用。NKT细胞虽也以CD3+CD6+标志的细胞为效应细胞，但是和CIK细胞的不同，NKT来源于外周血中CD4-CD8-标志的细胞。孟明等人在《中华微生物学和免疫学杂志》2013年6月中提到了一种含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂，其能够显著促进纯化的iNKT细胞体外增殖，但是其增殖率仅有30％左右，因此，存在进一步的改进空间。本专利技术正是在该文献的基础上，通过对化合物进行改造，以便能够进一步提高含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂对于iNKT细胞的增殖效率。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够促进NKT细胞体外增殖的免疫调节剂。为了实现本专利技术的目的，拟采用如下技术方案：本专利技术的目的之一是提供含有噻唑烷-4-酮的免疫调节剂或其对映异构体，所述噻唑烷-4-酮的免疫调节剂具有如下的结构：在上述结构式中，所述X为卤素。出人意料的，本专利技术通过在噻唑烷-4-酮引入卤素取代基，特别是引入Cl取代基，有效的提升了其对NKT细胞的增殖作用。在本专利技术的一个优选实施方式中，所述X为选自Cl或Br的卤素。本专利技术另一方面还涉及上述含有噻唑烷-4-酮的免疫调节剂的制备方法，所述方法是由下式所示的CH1a在通入Cl2的情况反应得到。在本专利技术的一个优选实施方式中，所述的反应是在Na2CO3的存在下进行的。通过加入Na2CO3控制体系的pH维持在9～11之间，有助于反应的顺利进行。本专利技术另一方面还涉及上述含有噻唑烷-4-酮的免疫调节剂的应用，特别是在制备免疫调节剂中的应用。本专利技术另一方面还涉及上述含有噻唑烷-4-酮的免疫调节剂在促进NKT细胞增殖中的应用。在本专利技术的一个优选实施方式中，所述的NKT细胞是iNKT细胞。在本专利技术的另一个优选实施方式中，所述的细胞增殖是指体外细胞增殖。本专利技术首次通过在噻唑烷-4-酮引入卤素取代基，特别是引入Cl取代基，有效的提升了其对NKT细胞的增殖作用，有助于其作为免疫调节剂的应用。附图说明图1：化合物CH1a-Cl的1H-NMR图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以下是对本专利技术的解释而不是限定，本专利技术中所用的方法及其相关的试剂，可以有其他可选择和替代方案，能够达到相同技术结果即可。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照所属领域的常规操作进行，或按照制造厂商所建议的条件进行。合成实施例1选择下式左侧的CH1a作为反应原料，以水作为溶剂得到浓度为1mM的溶液，然后加入Na2CO3调整溶液的pH值为10.0，通入Cl2反应20分钟，反应结束后停止通Cl2，加入氯仿萃取，减压蒸馏，然后通过HPLC以乙醇作为流动相进行分离得到目标产物，目标产物CH1a-Cl的1H-NMR如图1所示。实施例2：细胞增殖实验将iNKT细胞以2×106个/ml密度接种在96孔平底培养板上，每孔90微升，实验设阴性对照组(常规培养基)、阳性对照组(常规培养基中加入10μmol/L的CH1a)和实验组(常规培养基中加入10μmol/LCH1a-Cl)，每组设6个复孔，置于37℃，5％CO2条件下培养60小时，每孔加入10μL5mg/ml的MTT溶液，继续培养4h，2500rpm离心10分钟，弃上清液，每孔加入100μLDMSO，震荡均匀后570nm处测定吸光度(A)值，根据公式计算增殖率：增殖率＝(A给药组-A阴性对照组)*100％。实验结果显示，阳性对照组的细胞增值率为32±6％，而实验组的细胞增值率为45±5％，由此说明，CH1a通过氯化实现了更好的细胞增殖活性。实施例3：荧光标记靶细胞阵列辅助T细胞分析法(fluorescenttargetarrayThelperassay)将iNKT细胞的密度调整为1×106/mL，加入5μmol/mLCFDA-SE，置于37℃水浴中标记15min，在标记过程中每隔一段时间混匀细胞1次；加入预冷的、含有血清的培养基中止标记，在4℃冰箱中静置5min，离心沉淀；用培养基再洗涤1次，尽量洗净未结合的游离的CFDA-SE。然后将目标细胞置于增殖体系中。将CFDA-SE标记后的iNKT细胞用含100ml/L胎牛血清的RP-MI1640调整密度到2×106/mL，培养于96孔板中，每孔90μL(1.8×106个细胞)。实验设1L-2组(阴性对照组)、IL-2+CH2a组(阳性对照组)及IL-2+CH2a-Cl组(实验组)。1L-2组加入10μLIL-2(100ng/mL),IL-2+CH2a组加入10μL1L-2(100ng/mL)和10μL最佳有效浓度的CH2a(50μmol/L),IL-2+CH2a-Cl组加入10μLIL-2(100ng/mL)和10μL最佳有效浓度的CH2a-Cl(50μmol/L)；每组设3个复孔，置于50ml/LCO2,37℃培养箱孵育，68h时加入10μLBD公司的Golgi反应终止液，72h时收集细胞。利用流式细胞技术(FCM)检测细胞表面特异性黏附分子。以阴性对照组的iNKT细胞的增值率为100％作为基准，与阴性对照组相比，阳性对照组(IL-2+CH2a组)的细胞增值率增加了25±3％，实验组(IL-2+CH2a-Cl组)的细胞增值率增加了37±5％。细胞孵育72h后，iNKT细胞的增殖呈现不同分代状态。阴性对照组中，iNKT细胞约96％停留在前3代(Generation0～2)；阳性对照组中，在IL-2+CH2a共同剌激下，60％为后4代(Generation4～7)的iNKT细胞；阳性对照组中，在IL-2+CH2a-Cl共同剌激下，82％为后4代(Generation4～7)的iNKT细胞。以上具体实施方式仅为本专利技术的较佳实施例，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神及原则之内所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。以上所述是本专利技术的优选实施例，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.含有噻唑烷-4-酮的免疫调节剂或其对映异构体，所述噻唑烷-4-酮的免疫调节剂具有如下的结构：/n

【技术特征摘要】
1.含有噻唑烷-4-酮的免疫调节剂或其对映异构体，所述噻唑烷-4-酮的免疫调节剂具有如下的结构：



在上述结构式中，所述X为卤素。


2.根据权利要求1所述的含有噻唑烷-4-酮的免疫调节剂或其对映异构体，所述X为选自Cl或Br的卤素。


3.权利要求1所述的含有噻唑烷-4-酮的免疫调节剂的制备方法，所述方法是由下式所示的CH1a在通入Cl2的情况反应得到。





4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐刚，张全武，杨凯，吕培培，魏彬，
申请(专利权)人：魏彬，
类型：发明
国别省市：吉林;22