一种荧光探针及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种荧光探针及其制备方法，该荧光探针具有式(1)中的化学结构式：

【技术实现步骤摘要】
一种荧光探针及其制备方法和应用
本专利技术属于化学分析检测
，尤其涉及一种荧光探针及其制备方法和应用。
技术介绍
苯硫酚(C6H5SH,PhSH)是一种具有高反应活性的芳基硫化物，在合成工业中有着广泛的应用，如磺胺类药物、农药及高分子的合成。但另一方面苯硫酚具有很高的毒性，呼吸及皮肤的摄入会导致各种病症，如呼吸困难、肌无力、中枢神经损伤甚至死亡。美国职业安全健康局限定了苯硫酚的工作环境最高浓度为0.1ppm。随着苯硫酚的大量工业使用排放及毒害作用，开发高灵敏、高选择检测苯硫酚的方法对环境检测与保护是非常必要的。基于分子探针的荧光法检法具有样品处理简洁、成本低廉及操作简便快速等优点，近年来得到了发展与利用。但目前用于检测苯硫酚的荧光探针分子还存在合成复杂、选择性及灵敏度不够高、水溶性差等问题(ZhangW.J.DyesandPigments2016,133,248；PagidiS.Langmuir2018,34,8170；GengaY.Sensors&Actuators:B.Chemical2018,273,1670.)，因此，亟待开发性能优良的苯硫酚检测探针去克服存在的上述问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，克服以上
技术介绍
中提到的不足和缺陷，提供一种易于制备、性能稳定、分析性能优良、水溶性好的荧光探针及其制备方法和应用。为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为：一种荧光探针，具有式(1)中的化学结构式：本专利技术在对荧光探针进行设计时，通过向分子内引入吡啶基团以增强荧光探针的水溶性，同时，考虑到苯硫酚具有较强的亲核反应能力、能与缺电子分子或基团发生反应的分子特性，在分子设计时引入了2,4-二硝基苯醚基团，利用2,4-二硝基苯醚能与苯硫酚发生特异性反应的特点，将其作为苯硫酚的响应基团；在采用比色法或荧光法进行检测时，苯硫酚将会亲核进攻荧光探针的苯氧基，进一步通过脱除反应，使得探针的酚羟基游离出来，而由于本专利技术对于探针的分子设计，游离出来的酚羟基将会进一步与荧光探针中的氰根发生分子内加成、成环反应，从而得到了香豆素类荧光分子；香豆素类荧光分子具有稳定性好、发光强度高、水溶性好等优点，且反应活性位点与光谱性质可调控，这也是本专利技术将荧光探针设计为具有香豆素母体结构的分子骨架的结构的原因。基于同一技术构思，本专利技术还提供了一种上述荧光探针的制备方法，具体包括以下步骤：(1)准备原料；(2)将化合物A、吡啶乙腈和催化剂溶于溶剂中，加热反应1～24h，得到混合溶液；化合物A具有式(2)中的化学结构式：(3)将混合溶液去除溶剂后经层析柱分离，得到荧光探针。上述荧光探针通过4-(二乙氨基)-2-(2,4-二硝基苯氧基)-苯甲醛与吡啶的羟醛缩合反应得到，具体制备方法的反应流程如下：本技术方案选择了化合物A，即4-(二乙氨基)-2-(2,4-二硝基苯氧基)-苯甲醛和吡啶乙腈作为原料，该两种原料来源广泛、价格低廉，反应获得的荧光探针产率高，且反应条件温和、设备简单、步骤简便，为荧光探针的产业化生产提供了理论指导，并且通过本技术方案的方法制备得到的荧光探针具有性能稳定、分析性能优良、水溶性好的优点。作为上述技术方案的优选，步骤(2)中反应时间为5h。作为上述技术方案的优选，催化剂为哌啶、乙酸、乙酸钠和三乙胺中的一种或多种；进一步地，催化剂为哌啶。上述催化剂对羟醛缩合反应具有良好的催化效果，能够提高反应效率及荧光探针最终收率。作为上述技术方案的优选，步骤(2)中反应温度为50～120℃；进一步地，步骤(2)中反应温度为80℃。反应温度过低则可能导致反应不完全，温度过高则容易产生副反应，影响最终产物收率。作为上述技术方案的优选，溶剂为乙腈、乙醇、乙酸钠和三乙胺中的一种或多种。基于同一技术构思，本专利技术还提供一种上述荧光探针的应用，荧光探针应用于水体、土壤和生物体系中苯硫酚的测定。作为上述技术方案的优选，该荧光探针应用于水体或土壤中苯硫酚的检测，具体包括以下步骤：(1)绘制标准曲线：将该荧光探针溶于磷酸混合缓冲体系中，得到探针溶液；向探针溶液中加入不同浓度的苯硫酚并测量特定波长下加入苯硫酚后探针溶液的荧光强度，以所得的荧光发射强度对探针溶液中苯硫酚的浓度绘制标准曲线；(2)将待测水体或土壤样品配置成待测溶液，在待测溶液中加入荧光探针，测定其在特定波长下的荧光强度，根据该荧光强度和标准曲线即得到待测溶液中苯硫酚的浓度。作为上述技术方案的优选，荧光探针应用于生物体系中苯硫酚的测定，具体包括以下步骤：将生物体系的样品与该荧光探针一同进行培育，利用荧光成像的方法对细胞生物样品中进行分析。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术提供了一种荧光探针及其制备方法，还提供了该荧光探针在检测苯硫酚领域的应用；(2)本专利技术的荧光探针分子具有良好的稳定性(荧光探针母液能在室内稳定存放三个月以上，其光谱性质保持不变)和光学性能，反应前单独荧光探针溶液无荧光发射，随着苯硫酚的加入，荧光探针分子在～510nm处有强的荧光发射性质；且本专利技术的荧光探针具有高选择性和高灵敏度，对苯硫酚识别能力强，响应速度较快，响应范围为0～10μmol·L-1，检测限低(16nmol·L-1)，用于苯硫酚的检测时各项性能优越；(3)本专利技术的荧光探针的制备方法，所用原料易得，合成产率较高(达85％以上)，且反应条件温和、设备简单、步骤简便，为荧光探针的产业化生产提供了理论指导。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为实施例1中荧光探针的核磁共振氢谱图；图2为实施例4中加入苯硫酚后的荧光探针溶液的荧光发射强度对苯硫酚浓度的曲线图；图3为实施例4中荧光强度对苯硫酚的浓度标准曲线图；图4为实施例4中荧光探针对苯硫酚选择性的测试结果；图5为实施例5荧光探针检测人胃癌细胞(MGC-803)内苯硫酚的成像图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本专利技术做更全面、细致地描述，但本专利技术的保护范围并不限于以下具体实施例。除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本专利技术的保护范围。除非另有特别说明，本专利技术中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。荧光探针的合成：实施例1：将化合物A(0.76g,2.12mmol)和4-吡啶乙腈(0.25g,2.12mmol)溶于无水乙醇(10本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种荧光探针，其特征在于，具有式(1)中的化学结构式：/n

【技术特征摘要】
1.一种荧光探针，其特征在于，具有式(1)中的化学结构式：





2.一种权利要求1所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)准备原料；
(2)将化合物A、吡啶乙腈和催化剂溶于溶剂中，加热反应1～24h，得到混合溶液；所述化合物A具有式(2)中的化学结构式：



(3)将所述混合溶液去除溶剂后经层析柱分离，得到所述荧光探针。


3.如权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述催化剂为哌啶、乙酸、乙酸钠和三乙胺中的一种或多种。


4.如权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(3)中混合溶液去除溶剂的方法为，将所述混合溶液进行减压旋干。


5.如权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)的反应温度为50～120℃。


6.如权利要求2-5任一项所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述溶剂为乙腈、乙醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：李学强，孙圣，梁波，夏旭伟，张雅南，
申请(专利权)人：湖南中大检测技术集团有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43