一种铁皮石斛活性成分的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种铁皮石斛活性物质的提取方法，包括酶‑溶剂提取、酶‑Sevag试剂脱蛋白、活性炭脱色、透析、干燥步骤。本发明专利技术在常规水提取之前进行乙酸乙酯脱脂和酶解，并在Sevag试剂脱蛋白前先酶解，有效地增加了铁皮石斛多糖的释放、减少了铁皮石斛多糖的损失、降低了脂溶性成分和醇溶性糖的含量，同时保证了石斛多糖较高的提取率和较高的活性。本方法避免了单一成分提取对名贵药材的浪费，在获得石斛多糖的同时获得石斛碱，不仅保持了多糖的高收率，且具有较高的经济效益。

An extraction method of active components from Dendrobium candidum

【技术实现步骤摘要】
一种铁皮石斛活性成分的提取方法
本专利技术属于植物多糖领域，具体涉及一种铁皮石斛活性成分的提取方法。
技术介绍
铁皮石斛是属兰科石斛多年附生的草本植物，俗称黑节草、铁吊兰，是中国传统的名贵药材，享有“救命仙草”、“中华仙草”等美誉。铁皮石斛已被《中华人民共和国药典(2015版)》收载。铁皮石斛中含有多糖、生物碱、菲类和微量元素等，其中铁皮石斛多糖是最主要的活性成分，具有的抗氧化、抗衰老和治疗某些疾病等作用，因此作为功效原料广泛应用于药品、保健食品和化妆品。铁皮石斛提取物已作为化妆品原料收录于《已使用化妆品原料名称目录(2015版)》中，同时《中华人民共和国药典》也将铁皮石斛多糖的含量作为评价铁皮石斛质量的重要指标。石斛多糖的提取多采用传统的水提醇沉方法，原理是基于多糖易溶于水、不溶或微容于有机溶剂的性质，用高浓度乙醇(80％左右)将其从水中沉淀析出，再用适量无水乙醇或丙酮洗涤，经冷冻干燥后获得粗多糖，其基本流程是：样品→脱脂→70％～80％乙醇除杂→蒸馏水浸提→醇沉过夜→离心→冷冻干燥→粗多糖。超声波辅助提取法是基于超声波的机械效应、热效应和空化效应作用，从而增大物质分子运动的频率和速度，提高溶剂穿击力，加快有效物质溶出，从而缩短提取时间。近年来，又有若干制备工艺在石斛多糖的提取中获得应用。微波辅助提取法是基于微波穿透能力强的特点，利用物质在微波场中吸收微波能力的差异，使物质的某些区域或某些组分被选择性溶出。闪式提取法是一种用于植物软硬组织破碎的新型提取技术，依靠高速机械剪切力和超动分子渗滤技术，在室温及溶剂存在下数秒内把物料粉碎至细微颗粒，并使有效成分迅速达到组织内外平衡，通过过滤达到提取的目的，具有溶剂用量少、提取时间短、效率高等优点。酶解提取法是指利用酶促反应，加速植物细胞壁结构的破坏，从而有利于有效成分从细胞中释放出来，缩短提取时间，同时酶促反应是在较温和的条件下进行，可以有效降低生物活性物质的失活率。
技术实现思路
本专利技术提供一种铁皮石斛活性成分的提取方法，能够高效地提取出石斛多糖和铁皮石斛总生物碱，提高石斛多糖提取率同时较大限度保持多糖的活性。本专利技术的技术解决方案如下：一种铁皮石斛活性成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1)酶解提取：以80目以上的干铁皮石斛粗粉为原料，加入乙酸乙酯脱脂，过滤，得到的滤渣Ⅰ干燥后中加入加适量水和酶试剂，在40～70℃进行酶解，酶解pH为3.0～6.0；升温使酶灭活，过滤，得到的滤渣Ⅱ干燥后加入酸性乙醇加热回流进行醇提，过滤得到滤液①和滤渣Ⅲ，在干燥的滤渣Ⅲ中加水进行水提，过滤得到滤液②和滤渣Ⅳ；将滤液②浓缩至适量，加入乙醇醇沉，在2～5℃下醇沉过夜；过滤，得到的滤渣Ⅴ干燥后得到粗多糖；2)脱蛋白：取粗多糖复溶，加入蛋白酶30～50℃进行恒温处理，离心，取上清液，加入由氯仿：正丁醇(vol)＝4.0:1～4.5:1形成的Sevag试剂，剧烈震荡，离心取上清液，重复上述步骤至无变性蛋白析出；3)脱色：向步骤2)中脱蛋白后的溶液加入活性炭或大孔吸附树脂进行脱色,抽滤，得到溶液A；4)透析：将步骤3)中脱色后的溶液A进行透析除去水溶性小分子杂质，得到溶液B；5)干燥：将步骤4)处理后的溶液B冷冻干燥，得到铁皮石斛多糖。进一步的，上述步骤1)还包括：滤液①经过减压蒸干、1～2％盐酸水溶液溶解、二氯甲烷萃取、氨水调节pH＝8～12、氯仿萃取、减压蒸干，可以得到铁皮石斛总生物碱提取物。可以得到铁皮石斛总生物碱。进一步的，上述步骤1)的酶试剂为纤维素酶和/或果胶酶，添加量为0.5～2.0％。进一步的，上述步骤1)中的乙酸乙酯的加入量为10～30倍量，温度为50～90℃。进一步的，上述步骤1)中的醇提为加入10～30倍量70～95％酸性乙醇(pH＝3～5)、40～70℃回流提取1.5～2.5h，重复1～4次。进一步的，上述步骤1)中的水提为加入10～30倍量水提取1～4h，重复1～4次。进一步的，上述步骤1)中的醇沉的含醇量为65～85％，醇沉时间为12～24h。进一步的，上述步骤2)中的蛋白酶为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶的一种或多种。进一步的，上述步骤2)中的Sevag试剂与粗多糖溶液的体积比为1∶3～1∶5。进一步的，上述步骤3)中的活性炭的加入量为0.5～1.5％，水浴时间为0.5～2h；或加入4～7％预处理后的大孔树脂于200r/min摇床震荡吸附2h。进一步的，上述步骤4)为：将步骤3)中脱色后的溶液装入已处理好的透析袋中，置于容器中通自来水，使水流自下而上；之后，按上述过程通纯净水透析，其中自来水透析24～48h、纯净水透析12～24h。本专利技术的有益效果：本专利技术以干铁皮石斛粗粉为原料，通过溶剂提取法除去脂溶性成分和醇溶性糖，保证粗多糖有较高的纯度，同时结合酶法在较温和的条件下分解植物组织，加快多糖的释放，较大限度保持多糖的活性，同时还可获得铁皮石斛总生物碱，在提纯多糖的同时，减少名贵药材资源的浪费也可获得较高的经济效益；在粗多糖溶液中含有大量蛋白质，这些蛋白质会结合多糖形成糖蛋白，对后续的多糖分离造成很大的影响，本专利技术通过Sevag-酶联合脱蛋白法除去粗多糖溶液中蛋白质，在传统的Sevag法上结合酶法，以温和的条件使蛋白质变性，增加了蛋白脱除率，降低了多糖的损失；此外，本专利技术在特定步骤结合了酶法，进一步降低了有机溶剂的使用量和工艺条件，提高了产品的纯度和质量。与现有技术相比，本专利技术所述的一种铁皮石斛多糖的提取及精制方法，根据副产物和杂质的特性，改变提取和萃取溶剂，适当引入生物酶，将铁皮石斛粗多糖提取率由原来20％提高到30％以上，将副产物铁皮石斛总生物碱的提取率由原来的0.6％提高到3％以上；在联合脱蛋白中采用Sevag试剂，避免了三氯乙酸法处理后多糖发黄和盐酸法分解多糖的缺点，使得到的多糖色泽洁白且含量高，经蛋白酶处理后，显著的减少了Sevag试剂使用次数，减少了有机溶剂的污染；经过本专利技术得到的多糖具有更优越的抗氧化性，其自由基清除率高于常规产品。【附图说明】图1为本专利技术的步骤流程示意图；图2为本专利技术多糖脱色前后效果对比结果；图3为本专利技术多糖部分理化性质检测结果。【具体实施方式】下面用具体实施例对本专利技术做进一步详细说明，但本专利技术不仅局限于以下具体实施例。本专利技术公开了一种铁皮石斛活性成分的提取方法，主要步骤，如图1所示，具体包括：1)酶解提取：以80目以上的干铁皮石斛粗粉为原料，加入乙酸乙酯脱脂，过滤，得到的滤渣Ⅰ干燥后中加入加适量水和酶试剂，在40～70℃进行酶解，酶解pH为3.0～6.0；升温使酶灭活，过滤，得到的滤渣Ⅱ干燥后加入酸性乙醇加热回流进行醇提，过滤得到滤液①和滤渣Ⅲ，在干燥的滤渣Ⅲ中加水进行水提，过滤得到滤液②和滤渣Ⅳ；将滤液②浓缩至适量，加入乙醇醇沉，在2～5℃下醇沉过夜；过滤，得到的滤渣Ⅴ干燥后得到粗多本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种铁皮石斛活性成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)酶解提取：以80目以上的干铁皮石斛粗粉为原料，加入乙酸乙酯脱脂，过滤，得到的滤渣Ⅰ干燥后中加入加适量水和酶试剂，在40～70℃进行酶解，酶解pH为3.0～6.0；升温使酶灭活，过滤，得到的滤渣Ⅱ干燥后加入酸性乙醇加热回流进行醇提，过滤得到滤液①和滤渣Ⅲ，在干燥的滤渣Ⅲ中加水进行水提，过滤得到滤液②和滤渣Ⅳ；将滤液②浓缩至适量，加入乙醇醇沉，在2～5℃下醇沉过夜；过滤，得到的滤渣Ⅴ干燥后得到粗多糖；/n2)脱蛋白：取粗多糖复溶，加入蛋白酶30～50℃进行恒温处理，离心，取上清液，加入由氯仿：正丁醇(vol)＝4.0:1～4.5:1形成的Sevag试剂，剧烈震荡，离心取上清液，重复上述步骤至无变性蛋白析出；/n3)脱色：向步骤2)中脱蛋白后的上清液加入活性炭或大孔吸附树脂脱色，抽滤，得到溶液A；/n4)透析：将步骤3)中脱色后的溶液A进行透析除去水溶性小分子杂质，得到溶液B；/n5)干燥：将步骤4)处理后的溶液B冷冻干燥，得到铁皮石斛多糖。/n

【技术特征摘要】
1.一种铁皮石斛活性成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)酶解提取：以80目以上的干铁皮石斛粗粉为原料，加入乙酸乙酯脱脂，过滤，得到的滤渣Ⅰ干燥后中加入加适量水和酶试剂，在40～70℃进行酶解，酶解pH为3.0～6.0；升温使酶灭活，过滤，得到的滤渣Ⅱ干燥后加入酸性乙醇加热回流进行醇提，过滤得到滤液①和滤渣Ⅲ，在干燥的滤渣Ⅲ中加水进行水提，过滤得到滤液②和滤渣Ⅳ；将滤液②浓缩至适量，加入乙醇醇沉，在2～5℃下醇沉过夜；过滤，得到的滤渣Ⅴ干燥后得到粗多糖；
2)脱蛋白：取粗多糖复溶，加入蛋白酶30～50℃进行恒温处理，离心，取上清液，加入由氯仿：正丁醇(vol)＝4.0:1～4.5:1形成的Sevag试剂，剧烈震荡，离心取上清液，重复上述步骤至无变性蛋白析出；
3)脱色：向步骤2)中脱蛋白后的上清液加入活性炭或大孔吸附树脂脱色，抽滤，得到溶液A；
4)透析：将步骤3)中脱色后的溶液A进行透析除去水溶性小分子杂质，得到溶液B；
5)干燥：将步骤4)处理后的溶液B冷冻干燥，得到铁皮石斛多糖。


2.根据权利要求1所述的铁皮石斛活性成分的提取方法，其特征在于，所述步骤1)还包括：滤液①经过减压蒸干、1～2％盐酸水溶液溶解、二氯甲烷萃取、氨水调节pH＝8～12、氯仿萃取、减压蒸干可以得到铁皮石斛总生物碱提取物。


3.根据权利要求1所述的铁皮石斛活性成分的提取方法，其特征在于，所述步骤1)的酶试剂为纤维素酶和/或果胶酶，每100mL溶液添加酶试剂0.5～2.0g。


4.根据权利要求1所述的铁皮石斛活性成分的提取方法，其特征在于，所述步骤1...

【专利技术属性】
技术研发人员：王淑玲，高建华，李欣岳，夏仙，
申请(专利权)人：杭州奥得科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33