一种绵羊多胎性状的ELISA快速检测方法和应用技术

本发明专利技术提供了绵羊多胎性状的ELISA快速检测方法和应用，涉及绵羊多胎检测技术领域，利用分子生物学、生物化学及免疫学的方法对绵羊FecB基因进行真核表达、单克隆抗体制备，构建绵羊FecB基因间接ELISA快速检测方法；通过克隆FecB基因编码区序列，真核表达FecB基因表达产物，运用抗体重组技术获得FecB基因表达产物的单克隆抗体，最终建立一种检测绵羊多胎性状的基于单克隆抗体的间接ELISA检测体系，并用于青海地区绵羊多胎性状的快速检测。经验证，本发明专利技术所述方法重复性好，灵敏度高。

A rapid detection method and application of ELISA for ovine multiparous

【技术实现步骤摘要】
一种绵羊多胎性状的ELISA快速检测方法和应用
本专利技术属于绵羊多胎检测
，具体涉及一种绵羊多胎性状的ELISA快速检测方法和应用。
技术介绍
我国是世界上绵羊的主要生产国，饲养绵羊数量和绵羊品种遗传资源均居世界第一位。在青海省乃至全国农牧区，养羊业已成为重要产业和主要经济来源。繁殖性能是绵羊重要的经济性状，其中产羔性能是影响生产效率的最主要因素，直接影响到养羊业生产的效率和成本，对养羊业的发展起到了关键性的作用。绵羊产羔性状分为单羔性状、双羔性状和多羔性状3种，不同品种间、同品种不同个体间的产羔率差异较大。研究已证明FecB基因是由BMPR-1B基因突变引起，突变体BB使得受体对配体GDF5和BMP4不敏感，从而高剂量的GDF5抑制了孕酮的分泌，使排卵率上升。目前大量的研究已证明BMPR-1B基因的FecB突变位点是绵羊的多胎主效基因。青海省养羊业的基本情况是饲养绵羊数量在牲畜总数中占有的比例最多，分布最广，其组成结构主要有藏系绵羊本交选育、引用良种对当地品种改良及绒山羊改良三部分。目前青海省养羊业发展很快，并且青海又是全国养羊业的主本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种绵羊多胎性状的间接ELISA快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待测绵羊的RNA，反转录后利用引物克隆FecB基因，利用克隆得到的所述FecB基因构建克隆载体；所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2所示；/n(2)将所述克隆载体与真核质粒载体进行连接后，转染Sf9昆虫细胞，进行真核表达，得重组蛋白FecB；/n(3)以所述重组蛋白FecB作为抗原免疫小鼠，筛选后得单克隆抗体；/n(4)利用所述单克隆抗体进行间接ELISA检测，当显示抗体阳性时，则所述待测绵羊含有多胎主效基因FecB基因，具有产多羔潜力。/n

【技术特征摘要】
1.一种绵羊多胎性状的间接ELISA快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待测绵羊的RNA，反转录后利用引物克隆FecB基因，利用克隆得到的所述FecB基因构建克隆载体；所述引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1～2所示；
(2)将所述克隆载体与真核质粒载体进行连接后，转染Sf9昆虫细胞，进行真核表达，得重组蛋白FecB；
(3)以所述重组蛋白FecB作为抗原免疫小鼠，筛选后得单克隆抗体；
(4)利用所述单克隆抗体进行间接ELISA检测，当显示抗体阳性时，则所述待测绵羊含有多胎主效基因FecB基因，具有产多羔潜力。


2.根据权利要求1所述ELISA快速检测方法，其特征在于，步骤(1)中提取待测绵羊卵巢的RNA。

【专利技术属性】
技术研发人员：贾建磊，陈倩，侯生珍，李海琴，任昊，谢雯，
申请(专利权)人：青海大学，
类型：发明
国别省市：青海;63