鉴定用于治疗阿尔茨海默氏病的治疗性药物或试剂的筛选平台制造技术

公开了用于筛选预防或治疗神经退行性病症诸如阿尔茨海默氏病的候选物质的方法和组合物。本公开还涉及鉴定已知或疑似阿尔茨海默氏病药物的作用机制并通常涉及用于调节表达CD33的细胞的功能的组合物和方法。

Identification of a screening platform for therapeutic drugs or reagents for the treatment of Alzheimer's disease

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】鉴定用于治疗阿尔茨海默氏病的治疗性药物或试剂的筛选平台相关申请本申请要求根据35U.S.C.§119(e)于2017年7月8日提交的美国临时申请No.62/530,125和于2017年7月21日提交的美国临时申请No.62/535,589的权益，其中的每一个的内容通过引用整体并入本文。
本公开通常涉及用于筛选预防或治疗神经退行性病症所用的候选物质的方法和组合物。本公开通常还涉及用于调节表达CD33的细胞的功能的组合物和方法。
技术介绍
神经退行性疾病是一个严重、普遍且不断发展的全球性问题。这些包括阿尔茨海默氏病(AD)、认知损害、帕金森氏病、痴呆、精神分裂症、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、亨廷顿氏病或多发性硬化。特别是在老年人中，神经退行性疾病引起痛苦、生活质量下降，并且是死亡率的主要预测指标。阿尔茨海默氏病(AD)是老年人中最常见形式的神经退行性疾病，并且随着美国和世界范围内老年人口的增加，AD已达到流行病的比例。AD的特征是进行性痴呆和人格障碍。淀粉样斑块在变性神经元和反应性星形胶质细胞附近的异常累积是AD的病理特征。小胶质细胞是脑驻留的免疫细胞，负责清除毒性病原体，诸如淀粉样-β(Abeta,Aβ)。在AD进展期间，小胶质细胞从神经保护/吞噬前转变为神经毒性状态，其特征在于促炎性细胞因子分泌增加(Heneka等人NatureImmunology,2015)。已发现，小神经胶质受体CD33在大型科基GWAS分析中是晚期AD危险因素(Bertram等人,Am.J.Hum.Genet.,2008)。还发现CD33通过抑制小神经胶质细胞中Aβ的摄取和清除而促进了淀粉样病理学(Griciuc等人,Neuron,2013)。诸如多奈哌齐和美金刚的药物治疗AD的症状，但是它们不治疗疾病本身。一种新药T-817MA(1-{3-[2-(1-苯并噻吩-5-基)乙氧基]丙基}-3-氮杂环丁醇马来酸酯)正处于第1期和第2期临床试验及其对来自Aβ的毒性的神经保护作用和促进神经突向外生长的作用已得到充分证明(Takamura等人,NeurobiolAging,2014)。这些药物如何相互作用和调节CD33的活性尚不清楚。另外，仍然需要发现针对神经退行性疾病诸如AD的新疗法。例如，可以应用于生物相关的化合物及化合物组合的快速筛选方法，及其剂量响应将在该领域提供重大进展，并带来可帮助根除和控制这些疾病的突破性疗法和药物。专利技术概述本公开涉及发现用于筛选预防或治疗神经退行性病症所用的候选物质的方法。本公开还涉及发现小神经胶质受体CD33作为神经退行性疾病中的危险因素，并且用于调节表达CD33的细胞的作为筛选测定和机制探针的功能的组合物和方法。在一方面，提供了用于测试用于神经退行性病症的预防剂或治疗剂的候选物质的治疗功效的方法。通常，该方法包括用相关浓度的候选物质处理表达全长人CD33的免疫细胞或免疫样细胞(还在本文中被称为表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞)，用相关浓度的淀粉样-β(Abeta,Aβ)或脂多糖进一步处理所述已处理的表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞，并测量Aβ(对于Aβ处理的细胞)的细胞内水平或促炎性细胞因子(对于脂多糖处理的细胞)的培养基水平。表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞可以任选在用候选物质处理之前进行培养。在包括用Aβ处理的方法的实施方案中，相对于阴性对照，在用候选物质处理的CD33细胞中较高水平的Aβ指示经测试的候选物质具有治疗功效。在包括用脂多糖处理的方法的实施方案中，相对于阴性对照，在用候选物质处理的CD33细胞的培养基中较低水平的一种或多种促炎性细胞因子指示经测试的候选物质具有治疗功效。在一些实施方案中，该方法包括用相关浓度的候选物质处理表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞；进一步用相关浓度的淀粉样-β(Abeta,Aβ)处理所述经处理的表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞；并测量所述表达CD33的细胞中Aβ的细胞内水平，其中相对于阴性对照，用候选物质处理的CD33细胞中的更高水平的Aβ指示经测试的候选物质具有治疗功效。在一些实施方案中，该方法包括用相关浓度的候选物质处理表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞；进一步用脂多糖处理所述已处理的表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞；以及测量所述表达CD33的细胞的培养基中促炎性细胞因子的水平，其中相对于阴性对照而言，用候选物质处理的CD33细胞的培养基中较低水平的促炎性细胞因子指示经检测的候选物质具有治疗功效。在另一方面，提供了用于测试物质与人CD33结合相互作用的方法。通常，该方法包括用相关浓度的候选物质处理所述表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞；以及使用标准测定测量结合相互作用的读出，其中相对于阴性对照，用物质处理的CD33细胞中的更高读出指示结合相互作用。表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞可以任选地在用候选物质处理之前进行培养。在本文所述的各方面的一些实施方案中，表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞是小神经胶质细胞。在本文所述的各方面的一些实施方案中，表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞任选地可在用候选物质处理之前培养。被鉴定为具有治疗功效或与CD33具有结合相互作用的物质可用于调节小神经胶质细胞的功能。小神经胶质细胞可以在体外、在体内或离体。因此，在另一方面，本文提供了用于调节受试者中小神经胶质细胞功能的方法。通常，该方法包括向患者或有需要的受试者施用通过本文所述的方法鉴定的物质。在一些实施方案中，通过本文所述的方法将施用给受试者的物质鉴定为具有治疗功效。在一些实施方案中，施用给受试者的物质是1-(3-(2-(1-苯并噻吩-5-基)乙氧基)丙基)氮杂环丁烷-3-醇或其盐.在一些实施方案中，该方法可用于治疗或预防受试者中的神经退行性疾病。例如，通过向有需要的患者或受试者施用治疗性剂量或用量的通过本文所述方法鉴定的物质。示例性神经退行性病症包括但不限于阿尔茨海默氏病、轻度认知损害、帕金森氏病、痴呆、精神分裂症、肌萎缩侧索硬化症、亨廷顿氏病和多发性硬化。例如，该方法可应用于阿尔茨海默氏病。在另一方面，提供了用于调节小神经胶质细胞的功能的药物组合物。通常，药物组合物包含1-(3-(2-(1-苯并噻吩-5-基)乙氧基)丙基)氮杂环丁烷-3-醇或其盐。在一些实施方案中，药物组合物还包含药学上可接受的赋形剂或载体。在本文所述的各方面的一些实施方案中，该方法增强了吞噬或抑制小神经胶质细胞的细胞因子产生。在本文所述的各方面的一些实施方案中，化合物是1-(3-(2-(1-苯并噻吩-5-基)乙氧基)丙基)氮杂环丁烷-3-醇马来酸酯，还在本文中被称为T-817MA。根据详述和权利要求，本专利技术的其他特征和优点将变得显而易见。因此，本专利技术的其他方面在以下公开中得以描述，并且在本专利技术的范围内。附图简述图1显示了用DMSO、817MA、817A11和614P处理5小时后，来自对原初BV2小神经胶质细胞的乳酸脱氢酶(LDH)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于测试神经退行性病症的预防剂或治疗剂的候选物质的治疗功效的方法，所述方法包括：/na.任选地培养表达全长人CD33的免疫细胞或免疫样细胞；/nb.用相关浓度的所述候选物质处理所述表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞；/nc.用相关浓度的淀粉样-β(Aβ)处理所述表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞；/nd.测量所述表达CD33的细胞中的Aβ的细胞内水平；/n使得相对于阴性对照，用所述候选物质处理的CD33细胞中的更高水平的Aβ将指示所述治疗功效。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170708 US 62/530,125;20170721 US 62/535,5891.用于测试神经退行性病症的预防剂或治疗剂的候选物质的治疗功效的方法，所述方法包括：
a.任选地培养表达全长人CD33的免疫细胞或免疫样细胞；
b.用相关浓度的所述候选物质处理所述表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞；
c.用相关浓度的淀粉样-β(Aβ)处理所述表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞；
d.测量所述表达CD33的细胞中的Aβ的细胞内水平；
使得相对于阴性对照，用所述候选物质处理的CD33细胞中的更高水平的Aβ将指示所述治疗功效。


2.如权利要求1所述的方法，其中所述免疫细胞或免疫样细胞是小神经胶质细胞。


3.用于测试神经退行性病症的预防剂或治疗剂的候选物质的治疗功效的方法，所述方法包括：
a.任选地培养表达全长人CD33的免疫细胞或免疫样细胞；
b.用相关浓度的所述候选物质处理所述表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞；
c.用脂多糖处理所述表达CD33的免疫细胞或免疫样细胞；
d.测量所述表达CD33的细胞的培养基中促炎性细胞因子的水平；
使得相对于阴性对照，用所述候选物质处理的CD33细胞的培养基中的较低水平的促炎性细胞因子将指示所述治疗功效。


4.如权利要求3所述的方法，其中所述免疫细胞或免疫样细胞是小神经胶质细胞。


5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述神经退行性病症选自但不限于：阿尔茨海默氏病、轻度认知损害、帕金森氏病、痴呆、精神分裂症、肌萎缩侧索硬化症、亨廷顿氏病和多发性硬化。


6.用于测试物质与人CD33的结合相互作用的方法，所述方法包括：
a.任选地培养表达全长人CD33的免疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：鲁道夫·E·坦济，路易莎·昆蒂，金斗渊，
申请(专利权)人：综合医院公司，
类型：发明
国别省市：美国;US