鉴定人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和卡介苗的技术方法技术

本发明专利技术提供了一种鉴定人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和卡介苗的技术方法，选择16S rRNA、IS6110、Rv2659c、ESAT6和Rv1510五个目的基因进行多个PCR扩增，能快速准确地鉴别结核分枝杆菌，有效排除牛分枝杆菌和BCG弱毒株(卡介苗)的干扰。

Identification of Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis and BCG

【技术实现步骤摘要】
鉴定人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和卡介苗的技术方法
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种用于鉴定人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和卡介苗的技术方法，能快速有效地鉴定人结核分枝杆菌。
技术介绍
结核病是严重危害人类以及畜牧业健康的传染性疾病。据世界卫生组织(WHO)估计,目前全球已有20亿人感染结核分枝杆菌(MTB)，平均每1秒钟就有1个新感染者出现,每年新发结核病人达800万～1000万，300万人死于结核病，是死亡率最高的感染性疾病。引发人和动物结核感染的病原体为结核分枝杆菌，在病原学上结核分枝杆菌包括结核分枝杆菌复合体(Mycobacteriumtuberculosiscomplex,MTC)和非结核分枝杆菌(Nontuberculousmycobacteria,NTM)。MTC由人型结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等组成。NTM则指除MTC和麻风分枝杆菌以外的其它分枝杆菌。其中人型和牛型结核分枝杆菌可以造成人和反刍类动物的交叉感染，MTB是引起人类结核病的主本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鉴定人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和卡介苗的技术方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：使用16SrRNA、IS6110、Rv2659c、ESAT6和Rv1510五个目的基因进行多个PCR扩增进行鉴定。/n

【技术特征摘要】
1.一种鉴定人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和卡介苗的技术方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：使用16SrRNA、IS6110、Rv2659c、ESAT6和Rv1510五个目的基因进行多个PCR扩增进行鉴定。


2.根据权利要求1所述的技术方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)培养菌体，使用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)提取结核分枝杆菌DNA；
(2)配制PCR反应体系，扩增使用20μL的体系；所述反应体系包含16SrRNA、IS6110、Rv2659c、ESAT6和Rv1510五个目的基因；
(3)PCR反应体系放入PCR仪进行扩增反应；
(4)扩增后的PCR产物用1％琼脂糖凝胶电泳检测；
(5)根据扩增片段的大小进行结果分析。


3.根据权利要求2所述的技术方法，其特征在于，步骤(1)中所述培养菌体的具体方法为：收集结核病患者的痰液或者分离培养菌，痰液可直接煮沸离心取上清使用；结核分枝杆菌培养使用改良罗氏培养基。


4.根据权利要求2所述的技术方法，其特征在于，步骤(2)中所述反应体系中包含2xPCRMix10μL，浓度为10μΜ的上游和下游引物各2μL，结核分枝杆菌DNA模板1μL，最后加ddH2O5μL；所述上游和下游引物参照下表根据目的基因进行选择；

【专利技术属性】
技术研发人员：王宏伟，蒲文渊，赵晨，施旭东，张侠，苏忠兰，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32