一种褐藻糖胶的联合提取方法技术

一种褐藻糖胶的联合提取方法，本方法包括五步，第一步取褐藻，40‑50℃烘干，采用高速多功能粉碎机粉碎，过60‑80目筛；第二步加入10‑15倍体积的95%乙醇脱脂三次，每次约480‑720分钟；第三步离心，所得藻粉加入10‑15倍体积的2%的CaCl2溶液，在60‑70℃下超声提取，使用高剪切乳化机搅拌；第四步去除褐藻淀粉；第五步加入3‑4倍体积95%乙醇沉淀，沉淀物在50‑60℃烘干后得到多糖，通过PMP‑柱前衍生高效液相色谱法测定其单糖组成，氯化钡‑明胶比浊法测定其硫酸基含量，以此确定所得多糖为褐藻糖胶。本发明专利技术用于褐藻糖胶的提取。

A combined extraction method of fucoidan

【技术实现步骤摘要】
一种褐藻糖胶的联合提取方法
本专利技术涉及一种褐藻糖胶的联合提取方法。
技术介绍
褐藻糖胶是褐藻多糖的一种，褐藻多糖包括三种，褐藻胶、褐藻糖胶和褐藻淀粉，其中褐藻糖胶和褐藻胶的含量相对较高，褐藻淀粉含量较少。褐藻糖胶定义为含有相当数量的岩藻糖和硫酸基的多糖，是一种岩藻聚糖硫酸酯。近年来，因其具有多种良好的生物活性，受到人们的广泛关注。常用的褐藻糖胶提取方法有水提法、酸提法、酶法和超声波提取法，这些方法各有利弊：水提法可避免褐藻糖胶降解，是褐藻糖胶常用的提取方法，但是得率低；酸提法可以提高褐藻糖胶的得率，但会显著降解褐藻糖胶，影响褐藻糖胶的生物活性；酶法条件温和，对褐藻糖胶的结构影响不大，也可提高得率，但是成本较高；超声提取法可以提高褐藻糖胶得率，但是时间过长会引起褐藻糖胶的降解。因此，急需一种操作简单、成本低、提取率高、不影响褐藻糖胶结构的提取方法。本专利技术采用热CaCl2溶液-超声波-高剪切乳化机联合的方式提取褐藻糖胶，CaCl2溶液提取可去除褐藻胶，联合提取可显著提高褐藻糖胶的得率。同时，利用褐藻糖胶与褐藻淀粉分子量的差异（褐藻糖胶分子量较大，数量级通常为104-105，且高分子量居多，褐藻淀粉分子量数量级通常为103-104），超滤去除褐藻淀粉，可提高褐藻糖胶的纯度。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种既能增加褐藻糖胶得率，提高褐藻糖胶纯度，又能最大程度保证褐藻糖胶结构完整的一种联合提取方法。上述的目的通过以下的技术方案实现：一种褐藻糖胶的联合提取方法，本方法包括五步，第一步取褐藻，40-50℃烘干，采用高速多功能粉碎机粉碎，过60-80目筛；第二步加入10-15倍体积的95%乙醇脱脂三次，每次约480-720分钟；第三步离心，所得藻粉加入10-15倍体积的2%的CaCl2溶液，在60-70℃下超声提取，使用高剪切乳化机搅拌，转速为13000-19000rpm，每搅拌10分钟，停止10分钟，10-20分钟后关闭超声波，继续提取60-120分钟，提取2次，分离并合并清液；第四步去除褐藻淀粉，将提取液分别在截留分子量为5k,10k,100kDa条件下超滤，各收集200mL透过液，减压浓缩至10mL，采用次甲基蓝法测定岩藻聚糖硫酸酯的含量，选取未检测到岩藻聚糖硫酸酯的最高截留分子量进行超滤，以保证最大程度脱除褐藻淀粉，继续超滤浓缩至原体积的1/10-1/15；第五步加入3-4倍体积95%乙醇沉淀，沉淀物在50-60℃烘干后得到多糖，通过PMP-柱前衍生高效液相色谱法测定其单糖组成，氯化钡-明胶比浊法测定其硫酸基含量，以此确定所得多糖为褐藻糖胶。所述的一种褐藻糖胶的联合提取方法，所述的第三步采用热CaCl2溶液-超声波-高剪切乳化机联合的方式进行提取。所述的一种褐藻糖胶的联合提取方法，所述的第三步超声提取10-20分钟后，关闭超声波，继续提取60-120分钟。所述的一种褐藻糖胶的联合提取方法，所述的第四步通过超滤去除褐藻淀粉，将提取液分别在截留分子量为5k,10k,100kDa条件下超滤，各收集200mL透过液，减压浓缩至10mL，采用次甲基蓝法测定岩藻聚糖硫酸酯的含量，选取未检测到岩藻聚糖硫酸酯的最高截留分子量进行超滤，脱除褐藻淀粉。有益效果1.本专利技术采用热CaCl2溶液-超声波-高剪切乳化机联合的方式进行提取，操作简单，褐藻糖胶的得率显著高于同等条件下普通热CaCl2溶液提取率。褐藻多糖一般含有褐藻胶、褐藻淀粉以及褐藻糖胶，常规提取中，褐藻糖胶中往往含有褐藻淀粉，本专利技术通过超滤的方式去除褐藻淀粉，使得褐藻糖胶的含量升高。本专利技术根据透过液中岩藻聚糖硫酸酯的含量选择截留分子量，可以更准确的去除不同褐藻的褐藻淀粉，也可以减少褐藻糖胶的损失，提高褐藻糖胶的纯度。附图说明图1羊栖菜多糖单糖组成。图2铜藻多糖单糖组成。具体实施方式实施例1一种褐藻糖胶的联合提取方法，本方法包括五步，第一步取褐藻，40-50℃烘干，采用高速多功能粉碎机粉碎，过60-80目筛；第二步加入10-15倍体积的95%乙醇脱脂三次，每次约480-720分钟；第三步离心，所得藻粉加入10-15倍体积的2%的CaCl2溶液，在60-70℃下超声提取，使用高剪切乳化机搅拌，转速为13000-19000rpm，每搅拌10分钟，停止10分钟，10-20分钟后关闭超声波，继续提取60-120分钟，提取2次，分离并合并清液；第四步去除褐藻淀粉，将提取液分别在截留分子量为5k,10k,100kDa条件下超滤，各收集200mL透过液，减压浓缩至10mL，采用次甲基蓝法测定岩藻聚糖硫酸酯的含量，选取未检测到岩藻聚糖硫酸酯的最高截留分子量进行超滤，以保证最大程度脱除褐藻淀粉，继续超滤浓缩至原体积的1/10-1/15；第五步加入3-4倍体积95%乙醇沉淀，沉淀物在50-60℃烘干后得到多糖，通过PMP-柱前衍生高效液相色谱法测定其单糖组成，氯化钡-明胶比浊法测定其硫酸基含量，以此确定所得多糖为褐藻糖胶。实施例2实施例1所述的一种褐藻糖胶的联合提取方法，所述的第三步采用热CaCl2溶液-超声波-高剪切乳化机联合的方式进行提取。实施例3实施例1所述的一种褐藻糖胶的联合提取方法，所述的第三步超声提取10-20分钟后，关闭超声波，继续提取60-120分钟。实施例4实施例1所述的一种褐藻糖胶的联合提取方法，所述的第四步通过超滤去除褐藻淀粉，根据透过液中岩藻聚糖硫酸酯的含量选择截留分子量，可以更准确的去除不同褐藻的褐藻淀粉，也可以减少褐藻糖胶的损失。实施例5实施例1所述的一种褐藻糖胶的联合提取方法，取褐藻羊栖菜500g,40-50℃烘干，高速多功能粉碎机粉碎，过60-80目筛。加入10-15倍体积的95%乙醇脱脂三次，每次8-12小时，离心。所得藻粉加入10-15倍体积的2%的CaCl2溶液，60℃-70℃下超声提取，使用高剪切乳化机搅拌，转速为13000-19000rpm，每搅拌10分钟，停止10分钟，10-20分钟后关闭超声波，继续提取1-2小时，提取2次，分离并合并清液。将提取液分别在截留分子量为5k,10k,100kDa条件下超滤，各收集200mL透过液，减压浓缩至10mL，采用次甲基蓝法测定岩藻聚糖硫酸酯的含量，选取未检测到岩藻聚糖硫酸酯的最高截留分子量进行超滤，以保证最大程度脱除褐藻淀粉。根据测定结果，选定10kDa继续超滤，浓缩至原体积的1/10-1/15，加入3-4倍体积95%乙醇沉淀，沉淀物在50℃烘干后得到羊栖菜多糖，得率为5.29%，高于同等条件下仅使用热CaCl2溶液提取时的得率3.15%。单糖组成测定表明，羊栖菜多糖主要由甘露糖、氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖组成，摩尔比例（mol%）分别为8.17%，2.74%，2.01%，1.45%，25.56%，0.24%，59.83%，岩藻糖含量较高，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种褐藻糖胶的联合提取方法，其特征是: 本方法包括五步，第一步取褐藻，40-50℃烘干，采用高速多功能粉碎机粉碎，过60-80目筛；第二步加入10-15倍体积的95%乙醇脱脂三次，每次约480-720分钟；第三步离心，所得藻粉加入10-15倍体积的2%的CaCl2溶液，在60-70℃下超声提取，使用高剪切乳化机搅拌，转速为13000-19000rpm，每搅拌10分钟，停止10分钟，10-20分钟后关闭超声波，继续提取60-120分钟，提取2次，分离并合并清液；第四步去除褐藻淀粉，将提取液分别在截留分子量为5k, 10k, 100kDa条件下超滤，各收集200mL透过液，减压浓缩至10mL，采用次甲基蓝法测定岩藻聚糖硫酸酯的含量，选取未检测到岩藻聚糖硫酸酯的最高截留分子量进行超滤，以保证最大程度脱除褐藻淀粉，继续超滤浓缩至原体积的1/10-1/15；第五步加入3-4倍体积95%乙醇沉淀，沉淀物在50-60℃烘干后得到多糖，通过PMP-柱前衍生高效液相色谱法测定其单糖组成，氯化钡-明胶比浊法测定其硫酸基含量，以此确定所得多糖为褐藻糖胶。/n

【技术特征摘要】
1.一种褐藻糖胶的联合提取方法，其特征是:本方法包括五步，第一步取褐藻，40-50℃烘干，采用高速多功能粉碎机粉碎，过60-80目筛；第二步加入10-15倍体积的95%乙醇脱脂三次，每次约480-720分钟；第三步离心，所得藻粉加入10-15倍体积的2%的CaCl2溶液，在60-70℃下超声提取，使用高剪切乳化机搅拌，转速为13000-19000rpm，每搅拌10分钟，停止10分钟，10-20分钟后关闭超声波，继续提取60-120分钟，提取2次，分离并合并清液；第四步去除褐藻淀粉，将提取液分别在截留分子量为5k,10k,100kDa条件下超滤，各收集200mL透过液，减压浓缩至10mL，采用次甲基蓝法测定岩藻聚糖硫酸酯的含量，选取未检测到岩藻聚糖硫酸酯的最高截留分子量进行超滤，以保证最大程度脱除褐藻淀粉，继续超滤浓缩至原体积的1/10-1/15；第五步加入3-4倍体积95%乙醇沉淀，沉淀物...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雪，刘昌衡，贾爱荣，张绵松，史亚萍，王加祥，刘新，白新峰，
申请(专利权)人：山东省科学院生物研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37