一种栀子多糖及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种栀子多糖及其提取方法。所述栀子多糖包括下述质量百分比的原料：总糖含量为41‑56％，糖醛酸34‑45％，蛋白含量为7‑10％。所述栀子多糖的制备方法步骤包括：栀子药材粉碎、除脂后，加水浸提提取，乙醇沉淀，再反复冻融除蛋白，经透析后冷冻干燥。本发明专利技术制备的栀子多糖可改善α‑异硫氰酸萘酯(ANIT)和3,5‑二乙氧基羰基‑1,4‑二氢‑2,4,6‑三甲基吡啶(DDC)诱导的胆汁淤积性肝损伤，减轻四氯化碳(CCL

A gardenia polysaccharide and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种栀子多糖及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种栀子多糖及其制备方法和应用，属于中药

技术介绍
多种慢性肝病如各种原因的肝硬化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化、酒精性肝炎、药物性肝病、病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、肝肿瘤等，常伴发肝内胆汁淤积(intrahepaticcholestasis，IHC)，即胆汁流形成、分泌和排泄发生障碍，胆汁流不能正常流入十二指肠，而在肝脏中滞留、并进入血液循环，这些肝病又称为胆汁淤积性肝病/肝损伤。随着病情进展，肝内胆汁淤积可加重肝脏损害和肝纤维化/肝硬化，严重者可导致肝衰竭甚至死亡。针对肝内胆汁淤积性肝病/损伤和肝硬化，临床治疗药物尚显不足，迫切需要研发新的治疗药物。胆汁淤积属中医“黄疸”范畴，中医在长期的临床实践中发现多种中药具有“退黄”保肝的疗效，可以改善胆汁淤积，在治疗胆汁淤积性肝脏疾病方面具有独特优势。中药栀子为茜草科植物栀子(GardeniajasminoidesEllis)的干燥成熟果实。栀子具有清热利湿功效，在《本草纲目》记载中具有解五种黄疸的功效，现代临床上常用于治疗黄疸性肝炎，实验研究也表明栀子具有保肝利胆作用。栀子是常用的退黄保肝、改善胆汁淤积性肝病的中药。有研究确定栀子苷是主要的药效物质，但栀子苷具有肝毒性，限制了其进一步的研发，也与临床上栀子的广泛使用相矛盾，提示栀子苷并不能完全代表栀子的退黄保肝的效应物质，栀子中可能还含有其它退黄保肝的成分。但现有技术中并未有其他保肝成分的相关报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题之一是提供一种栀子多糖及其制备方法，所要解决的技术问题之二是提供所述的栀子多糖的应用。本专利技术是通过以下技术方案来实现的：本专利技术提供一种栀子多糖，包括下述质量百分比的原料：总糖含量为41-56％，糖醛酸34-45％，蛋白含量为7-10％。所述栀子多糖的重均相对分子量为MW：10-20kDa，栀子多糖经完全酸水解后分析，单糖组成包括：鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖。本专利技术还提供所述栀子多糖的制备方法，步骤包括：栀子药材粉碎、除脂后，加水浸提提取，乙醇沉淀，再反复冻融除蛋白，经透析后冷冻干燥，得栀子多糖。优选地，所述栀子多糖的制备方法，步骤包括：(1)栀子药材干燥，粉碎得栀子粉；(2)栀子粉中加入乙醇浸泡除脂，过滤，药渣干燥；(3)药渣加水浸提2-4次，过滤，合并滤液，滤液浓缩，得到浓缩液A，离心，取上清得水提液；(4)水提液加入乙醇，使醇浓度达到65-85％，室温静置过夜；过滤收集沉淀，沉淀用乙醇浸洗1-3次，干燥，加水溶解，65-75℃水浴挥发除去多余醇，得到浓缩液B；(5)浓缩液B在-78℃-82℃和水浴42-44℃反复冻融3-5次，离心除蛋白；(6)透析，冷冻干燥，得栀子多糖。步骤(1)中，所述粉碎过70-90目筛，优选为80目。步骤(2)中，所述栀子粉和乙醇的固液比为1g：(3-8)mL，优选为1g：8mL，所述浸泡时间为20-30h。步骤(3)中，所述浸提温度为80-100℃，优选为100℃；每次浸提时间为2-3.5h，优选为3h；所述浸提次数优选为3次；每次浸提水的质量是药渣质量的10-25倍，优选为20倍；离心条件为以3000-4000g的转速离心8-12min。步骤(4)中，优选醇浓度达到70％，所述干燥为在35-45℃烘箱烘干，所述加水溶解时沉淀和水的固液比为1g：(2-3)mL。步骤(2)和步骤(4)中，所用乙醇为95％乙醇。步骤(5)中，反复冻融的条件优选为在-80℃和水浴43℃反复冻融4次，除蛋白的条件为以3000-4000rpm离心8-12min。步骤(6)中，所述透析条件为采用3000-4000Da的透析袋透析24-48h，优选为采用3500Da的透析袋透析48h。上述醇浓度均为体积百分比。本专利技术还提供了栀子多糖在制备肝保护药物中的应用。本专利技术还提供了栀子多糖在制备抗胆汁淤积性肝损伤和抗肝纤维化药物中的应用。本专利技术采用α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的小鼠急性胆汁淤积肝损伤模型，应用本专利技术的栀子多糖400mg/kg灌胃给药，结果表明，本专利技术的栀子多糖对ANIT诱导的急性胆汁淤积模型小鼠能改善胆汁淤积和减轻肝损伤，具有保肝作用。本专利技术采用3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶即DDC(3,5-diethoxycarbonyl-1,4-dihydrocollidine)诱导的小鼠慢性胆汁淤积肝损伤模型，应用本专利技术的栀子多糖800mg/kg灌胃给药，结果表明，本专利技术的栀子多糖对DDC诱导的慢性胆汁淤积模型小鼠能减轻肝损伤，具有肝保护作用。本专利技术采用CCL4诱导的小鼠肝纤维化性模型，应用本专利技术的栀子多糖200mg/kg灌胃给药，结果表明，本专利技术的栀子多糖对CCL4诱导的肝纤维化性模型小鼠能减轻肝损伤、减轻肝纤维化，具有肝保护作用。本专利技术制备的栀子多糖可改善α-异硫氰酸萘酯(ANIT)和3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶(DDC)诱导的胆汁淤积性肝损伤和CCL4诱导的肝纤维化，而栀子多糖的肝保护作用未见文献报道，说明栀子多糖在制备肝保护药物，尤其在制备抗胆汁淤积性肝损伤和抗肝纤维化药物中的应用具有明显的前景。附图说明图1是本专利技术的栀子多糖对ANIT诱导的模型中肝组织形态学的影响，其中图1a为正常组，图1b为模型组，图1c为熊去氧胆酸组，图1d为栀子多糖组。图2是本专利技术的栀子多糖对DDC诱导的模型中肝组织学形态的影响，其中图2a为正常组，图2b为模型组；图2c为栀子多糖组。图3是本专利技术的栀子多糖对CCl4诱导肝纤维化小鼠肝组织形态学及胶原水平的影响。其中图A为HE染色，图B为天狼星红染色。图4是本专利技术的栀子多糖对肝纤维化小鼠肝组织胶原纤维沉积水平的影响，**p<0.01，与正常组相比；##p<0.01，与模型组相比具体实施方式下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本专利技术。这些实施例应理解为仅用于说明本专利技术而不是用于限制本专利技术的保护范围。在阅读了本专利技术记载的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些变化和修饰同样落入本专利技术权利要求书所限定的范围。实施例1栀子多糖的制备方法，步骤包括：栀子药材晒干，粉碎过80目筛，得栀子粉；栀子粉中加入乙醇浸泡24h除脂，过滤，药渣晾干，其中栀子粉和乙醇的固液比为1g：8mL；药渣加药渣质量20倍量的100℃热水浸提3次，每次3h，过滤，合并滤液，滤液浓缩至原滤液的1/4，得到浓缩液A，浓缩液A以3500×g离心10min，取上清得水提液；水提液加入乙醇，使醇浓度达到70％，室温静置过夜，过滤收集沉淀，沉淀用95％无水乙醇进一步浸洗2次，再置40℃烘箱20min，然后加水溶解，其中沉淀和水的固液比为1g：3mL，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种栀子多糖，其特征在于，包括下述质量百分比的原料：总糖含量为41-56％，糖醛酸34-45％，蛋白含量为7-10％。/n

【技术特征摘要】
1.一种栀子多糖，其特征在于，包括下述质量百分比的原料：总糖含量为41-56％，糖醛酸34-45％，蛋白含量为7-10％。


2.根据权利要求1所述的栀子多糖，其特征在于，所述栀子多糖的重均相对分子量为MW：10-20kDa，栀子多糖完全酸水解后的单糖组成包括：鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖。


3.根据权利要求1或2所述的栀子多糖的制备方法，其特征在于，步骤包括：栀子药材粉碎、除脂后，加水浸提提取，乙醇沉淀，再反复冻融除蛋白，经透析后冷冻干燥。


4.根据权利要求3所述的栀子多糖的制备方法，其特征在于，步骤包括：
(1)栀子药材干燥，粉碎得栀子粉；
(2)栀子粉中加入乙醇浸泡除脂，过滤，药渣干燥；
(3)药渣加水浸提2-4次，过滤，合并滤液，滤液浓缩，得到浓缩液A，离心，取上清得水提液；
(4)水提液加入乙醇，使醇浓度达到65-85％，室温静置过夜；过滤收集沉淀，沉淀用乙醇浸洗1-3次，干燥，加水溶解，65-75℃水浴挥发除去多余醇，得到浓缩液B；
(5)浓缩液B在-78℃-82℃和水浴42-44℃反复冻融3-5次，离心除蛋白；
(6)透析，冷冻干燥，得栀子多糖。
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【专利技术属性】
技术研发人员：马越鸣，吴家胜，王天明，方溯，
申请(专利权)人：上海中医药大学，
类型：发明
国别省市：上海;31