一种鹅不食草多糖及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于植物多糖领域，公开了一种鹅不食草多糖及其制法和应用。该鹅不食草多糖结构式如下所示。本发明专利技术将鹅不食草粉碎，乙醇回流脱脂脱色，热水浸提，得到水提液；醇沉分离，得到鹅不食草粗多糖；利用Sevag试剂除去蛋白后，经纤维素DEAE‑52阴离子交换树脂进行分级分离，依次以水、0.1M、0.2M及0.5M的NaCl溶液洗脱，收集0.1M NaCl溶液洗脱组分，再经G‑200凝胶柱纯化，得到鹅不食草多糖。其具有高效的清除DPPH自由基、ABTS自由基和超氧自由基能力，同时具有抗氧化和抑制α‑糖苷酶活性的性能，可作为天然抗氧化剂，及应用在制备降血糖药物或保健食品中。

A kind of Polysaccharide from Gosling and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种鹅不食草多糖及其制备方法和应用
本专利技术属于植物多糖领域，特别涉及一种鹅不食草多糖及其制备方法和应用。
技术介绍
二型糖尿病为非胰岛素依赖性疾病，是一种由于β-胰岛细胞破损或靶细胞对胰岛素的抵抗导致体内胰岛素的相对不足，引起体内代谢絮乱的慢性疾病。餐后高血糖症是二型糖尿病的主要特征之一，同时也是糖尿病并发症的主要诱导因素之一。延缓碳水化合物的消化是缓解餐后高血糖的有效方法。α-葡萄糖苷酶是糖苷水解酶，其水解末端非还原1→4连接的α-D-葡萄糖残基，从而释放葡萄糖到血液中。因此，抑制α-葡萄糖苷酶可以减少碳水化合物的消化并减缓糖尿病患者的餐后血糖水平。同时，二型糖尿病与氧化应激的增加密切相关。持续高血糖将降低抗氧化酶的活性，导致抗氧化防御系统的破坏。因此，同时具有降低餐后高血糖和氧化应激的药剂或物质可用于治疗二型糖尿病患者。目前，多糖具有多糖生物活性受到人们广泛的研究，其具有提高免疫力、抗炎、抗氧化、抗肿瘤及降血糖等多种生物活性。此外，有研究表明，从桑果、桦褐孔菌和马尾藻中分离的多糖同时具有抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制能力。因此，多糖可作为潜在的降血糖药物或保健食品应用于糖尿病患者。鹅不食草(Centipedaminima)为菊科植物，广泛分布于我国的湖北、江苏广东和浙江等地方。研究表明，鹅不食草可用于治疗鼻炎、气管炎风湿关节炎等疾病，同时还具有抗炎、抗氧化及抗肿瘤活性。目前，关于鹅不食草多糖的结构与生物活性之间的关系鲜见报道。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的缺点与不足，本专利技术的首要目的在于提供一种同时具有抗氧化和抑制α-糖苷酶活性的鹅不食草均一多糖。本专利技术另一目的在于提供上述同时具有抗氧化和抑制α-糖苷酶活性的鹅不食草均一多糖的制备方法。本专利技术再一目的在于提供上述鹅不食草均一多糖作为抗氧化剂，及在制备降血糖药物或保健食品中的应用。本专利技术的目的通过下述方案实现：一种鹅不食草均一多糖，命名为CMP-2B，其结构式如下所示：其中A表示1,6-linked-β-D-Galp；B表示1,3,6-linked-β-D-Manp；C表示1,4-linked-α-D-GalpA；D表示1,3-linked-α-L-Araf；E表示1,4,6-linked-α-D-Galp；F表示1-linked-α-L-Araf；所述的鹅不食草均一多糖CMP-2B主链为1,3,6-linked-D-Manp和1,4,6-linked-D-Galp,其支链上链接有1,4-linked-α-D-GalpA,1,6-linked-β-D-Galp,T-linked-α-L-Araf,和1,3-linked-α-L-Araf.所述的鹅不食草均一多糖CMP-2B分子量分布范围为80-200KDa，重均分子量为126.35KDa。一种上述的鹅不食草均一多糖CMP-2B的制备方法，其包括以下步骤：将鹅不食草粉碎，加乙醇回流脱脂脱色，再热水浸提，得到水提液；对水提液进行醇沉分离，得到鹅不食草粗多糖；利用Sevag试剂除去蛋白后，经纤维素DEAE-52阴离子交换树脂进行分级分离，依次以水、0.1mol/L、0.2mol/L及0.5mol/L的NaCl溶液洗脱，收集0.1mol/LNaCl溶液洗脱组分，再经G-200凝胶柱纯化，得到鹅不食草均一多糖CMP-2B。所述鹅不食草使用前优选先清洗干净，并在45-60℃条件下烘干；所述粉碎优选经粉碎机粉碎后过60-100目筛得鹅不食草粉。所述脱脂脱色的条件优选为在70-80℃回流2-4小时。所述脱脂脱色优选使用无水乙醇反复脱脂脱色三次或以上。所述脱脂脱色后滤渣优选在45-60℃条件下烘干备用。所述热水浸提的条件优选为在60-90℃下水浸提2-4小时。所述醇沉分离优选向水提液中加入无水乙醇后，在-4℃条件下静置8-24小时，离心，收集鹅不食草粗多糖。所述除去蛋白的操作具体为：将粗多糖溶于水中，加入Sevag试剂，震荡，离心，收集上清液，重复除蛋白8-10次，透析，冷冻干燥，得到除蛋白鹅不食草粗多糖。所述分级分离前，优选将除去蛋白的鹅不食草粗多糖溶于水，以8000-10000r/min速度离心6-10min，取上清液再经纤维素DEAE-52阴离子交换树脂进行分级分离。所述经G-200凝胶柱纯化，优选将分级分离后的产物溶于水中，离心，上清液经SephadexG-200凝胶柱进行纯化，以水洗脱，苯酚-硫酸法检测，收集第一组分，浓缩，透析，冷冻干燥，得到纯化的鹅不食草均一多糖CMP-2B。优选的，上述的鹅不食草均一多糖CMP-2B的制备方法，具体包括以下步骤：(1)鹅不食草的前处理：将鹅不食草用水清洗干净，在45-60℃条件下烘干，经粉碎机粉碎后过筛得鹅不食草粉，加入无水乙醇，在70-80℃条件下回流2-4小时，过滤，将滤渣再用乙醇回流脱脂脱色两次，过滤，滤渣在45-60℃条件下烘干备用；(2)提取粗多糖：向步骤(1)中得到的滤渣中加入20-30倍重量的水，在60-90℃下浸提2-4小时，离心、过滤、浓缩得鹅不食草水提液；向水提液中添加无水乙醇，在-4℃条件下静置8-16小时，离心，收集鹅不食草粗多糖；(3)除蛋白：将步骤(2)得到的粗多糖溶于水中，加入Sevag试剂，震荡，离心，收集上清液，重复除蛋白8-10次，透析，冷冻干燥，得到除蛋白鹅不食草粗多糖；(4)多糖纯化：将步骤(3)得到的除蛋白鹅不食草多糖用水溶解，以8000-10000r/min速度离心6-10min，上清液经纤维素DEAE-52阴离子交换树脂进行分级分离，依次以水、0.1mol/L、0.2mol/L及0.5mol/L的NaCl溶液洗脱，收集0.1mol/LNaCl溶液洗脱组分，浓缩，透析，冷冻干燥；再将其溶于水中，离心，上清液经SephadexG-200凝胶柱进行纯化，以水洗脱，收集洗脱组分，浓缩，透析，冷冻干燥，得到鹅不食草均一多糖CMP-2B。优选地，步骤(2)中的离心条件均为：在6000-8000r/min转速下，离心5-8min；此外，在水提液中添加无水乙醇使鹅不食草水提液中的乙醇浓度优选达到75-85％(v/v)。优选地，步骤(3)中所述透析袋的截留分子量为3500-8000Da。优选地，步骤(4)中，多糖经纤维素DEAE-52阴离子交换树脂进行初步纯化，依次以水、0.1mol/L、0.2mol/L及0.5mol/L的NaCl溶液洗脱，苯酚硫酸法检测，绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线的吸收峰，收集0.1mol/L的NaCl溶液洗脱组分，浓缩、透析、冷冻干燥，得到产物；再将产物溶于水中，SephadexG-200凝胶柱进一步纯化，以水洗脱，苯酚-硫酸法检测，绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线得两个吸收峰，合并收集第一个吸收峰，浓缩，透析，冷冻干燥，得到最终产物。经高效凝胶排阻色谱检测，多糖CMP-2B的凝胶色谱图上仅存在一个均一对称的吸收峰，根据保留本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鹅不食草均一多糖，命名为CMP-2B，其特征在于结构式如下所示：/n

【技术特征摘要】
1.一种鹅不食草均一多糖，命名为CMP-2B，其特征在于结构式如下所示：





2.根据权利要求1所述的鹅不食草均一多糖，其特征在于：
所述的鹅不食草均一多糖CMP-2B分子量分布范围为80-200KDa，重均分子量为126.35KDa。


3.一种根据权利要求1或2所述的鹅不食草均一多糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
将鹅不食草粉碎，加乙醇回流脱脂脱色，再热水浸提，得到水提液；对水提液进行醇沉分离，得到鹅不食草粗多糖；利用Sevag试剂除去蛋白后，经纤维素DEAE-52阴离子交换树脂进行分级分离，依次以水、0.1mol/L、0.2mol/L及0.5mol/L的NaCl溶液洗脱，收集0.1mol/LNaCl溶液洗脱组分，再经G-200凝胶柱纯化，得到鹅不食草均一多糖CMP-2B。


4.根据权利要求3所述的鹅不食草均一多糖的制备方法，其特征在于：
所述脱脂脱色的条件为在70-80℃回流2-4小时；
所述热水浸提的条件为在60-90℃下水浸提2-4小时。


5.根据权利要求3所述的鹅不食草均一多糖的制备方法，其特征在于：
所述醇沉分离指向水提液中加入无水乙醇后，在-4℃条件下静置8-24小时，离心，收集鹅不食草粗多糖；
所述除去蛋白的操作具体为将粗多糖溶于水中，加入Sevag试剂，震荡，离心，收集上清液，重复除蛋白8-10次，透析，冷冻干燥，得到除蛋白鹅不食草粗多糖。


6.根据权利要求3所述的鹅不食草均一多糖的制备方法，其特征在于：
所述分级分离前将除去蛋白的鹅不食草粗多糖溶于水，以8000-10000r/min速度离心6-10min，取上清液再经纤维素DEAE-52阴离子交换树脂进行分级分离；
所述经G-200凝胶柱纯化，指将分级分离后的产物溶于水中，离心，上清液经SephadexG-200凝胶柱进行纯化，以水洗脱，苯酚-硫酸法检测，收集第一组分，浓缩，透析，冷冻干燥，得到纯化的鹅不食草均一多糖CMP-2B。


7.根据权利要求3所述的鹅不食草均一多糖的制备方法，其特征在于具体包括以下步骤：
(1)鹅不食草的前处理：将鹅不食草用水清洗干净，在45-60℃条件下烘干，经粉碎机粉碎...

【专利技术属性】
技术研发人员：李琳，陈君诚，李冰，张霞，郑青松，霍达，梁毅，
申请(专利权)人：华南理工大学，广东中轻枫泰生化科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44