制备海红豆提取物的方法、海红豆提取物及其应用技术

本发明专利技术属于医药领域，具体涉及一种制备海红豆提取物的方法，包括如下的步骤：(1)采用水浸提海红豆，固液分离，得到液相物；(2)将液相物进行盐析处理，得到混合物；(3)将混合物进行固液分离，得到固相物；(4)将固相物溶解于水中，得到溶液；(5)将溶液进行透析处理，收集透过液；其中，采用孔径为1000～20000道尔顿的透析膜进行透析处理；(6)将透过液进行层析处理，收集洗脱液即为海红豆提取物；其中，采用DEAE琼脂糖凝胶柱进行层析处理。本发明专利技术还涉及制得的海红豆提取物及其应用。本发明专利技术海红豆提取物可通过诱导炎性肉芽肿建立炎性肉芽肿动物模型，诱导周期短、重复性好，该动物模型可用于评价抗炎性药物的疗效。

【技术实现步骤摘要】
制备海红豆提取物的方法、海红豆提取物及其应用
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种制备海红豆提取物的方法，还涉及制得的海红豆提取物及其医药应用。
技术介绍
海红豆(AdenantherapavoninaLinn.var.microsperma)，别名五彩海红豆、光海红豆、大眼星木、红豆、红金豆、红木、红球田螺意、孔雀豆、双栖树、相思豆、相思格、相思树、银珠。海红豆属落叶乔木，高5～20余米；嫩枝被微柔毛；有二回羽状复叶；叶柄和叶轴被微柔毛，无腺体；羽片3～5对，小叶4～7对，互生，长圆形或卵形，长2.5～3.5厘米，宽1.5～2.5厘米，两端圆钝，两面均被微柔毛，具短柄。总状花序单生于叶腋或在枝顶排成圆锥花序，被短柔毛；花小，白色或黄色，有香味，具短梗；花萼长不足1毫米，与花梗同被金黄色柔毛；花瓣披针形，长2.5～3毫米，无毛，基部稍合生；雄蕊10枚，与花冠等长或稍长；子房被柔毛，几无柄，花柱丝状，柱头小。荚果狭长圆形，盘旋，长10～20厘米，宽1.2～1.4厘米，开裂后果瓣旋卷；种子近圆形至椭圆形，长5～8毫米，宽4.5～7毫米，鲜红色，有光泽。花期4～7月；果期7～10月。海红豆原产于云南、贵州、广西、广东、福建和台湾地区，多生于山沟、溪边、林中或栽培于园庭。在缅甸、柬埔寨、老挝、越南、马来西亚、印度尼西亚等国家也有分布。海红豆的心材为暗褐色，质坚而耐腐，可作为支柱、船舶、建筑用材和箱板。海红豆的种子鲜红色而光亮，甚为美丽，可作装饰品。本变种过去定名为原变种，现据Nielsen(1980)的研究改正，其与原变种不同之处在于后者的花梗及花萼无毛，萼长0.8～1毫米，花瓣长圆状披针形，长3～4.5毫米，荚果较阔，宽13～16毫米，开裂前不太卷，种子近圆形，长8.3～8.5毫米，宽7.1～8毫米；分布于印度、缅甸、泰国、马来西亚和斯里兰卡，我国不出产，越南则可能逸为野生的。海红豆的种子含多种脂肪酸和甾甙、黄酮等，如豆甾醇甙(stigmasterolglucoside)、菠菜甾醇式(α—spinasterolSlucoside)、β—谷甾醇及其甙，还含卫矛醇(dulcitol)和胰蛋白酶抑制性物质。炎性肉芽肿指在局部形成的主要由巨噬细胞和炎细胞构成的边界清楚的结节状慢性炎症病灶，是评价抗炎药物的重要模型之一。根据致炎因子不同，分为异物性肉芽肿和感染性肉芽肿。目前，常用角叉菜胶、琼脂、塑料、巴豆油、灵芝孢子粉棉球等诱导异物性肉芽肿；用皮下注射卡介苗诱导感染性肉芽肿。异物诱导肉芽肿的周期长，形状不规则难以检测定量；卡介苗诱导肉芽肿不但周期长，而且肉芽肿组织的中心还出现干酪样坏死，重复性差。目前需要一种诱导周期短、重复性高的构建炎性肉芽肿动物模型的方法，以作为评价抗炎药物的模型使用。相思子属藤本植物相思子(Abrusprecatorius)，其含有一种分子量在6.3～6.7万道尔顿的剧毒性毒蛋白(isoabrins)。海红豆与相思子属于不同的属种，两者的学名、化学成分均完全不同。
技术实现思路
本专利技术提供了一种制备海红豆提取物的方法，所制得的海红豆提取物可通过诱导炎性肉芽肿来建立炎性肉芽肿动物模型，以作为评价抗炎药物的模型。在此基础上，本专利技术还提供了海红豆提取物及其医药应用。本专利技术第一方面涉及一种制备海红豆提取物的方法，包括如下的步骤：(1)采用水浸提海红豆，固液分离，得到液相物；(2)将液相物进行盐析处理，得到混合物；(3)将混合物进行固液分离，得到固相物；(4)将固相物溶解于水中，得到溶液；(5)将溶液进行透析处理，收集透过液；其中，采用孔径为1000～20000道尔顿(例如2000道尔顿、3000道尔顿、4000道尔顿、5000道尔顿、7000道尔顿、9000道尔顿、10000道尔顿、12000道尔顿、14000道尔顿、16000道尔顿、18000道尔顿)的透析膜进行透析处理；(6)将透过液进行层析处理，收集洗脱液即为海红豆提取物；其中，采用DEAE琼脂糖凝胶柱进行层析处理。本专利技术第一方面的一些实施方式中，步骤(4)中，固相物与水的体积比为1:(1～6)，例如1:2、1:3、1:4、1:5。本专利技术第一方面的一些实施方式中，步骤(6)中，先用Tris-HCl缓冲液洗脱，接着用氯化钠溶液洗脱。本专利技术第一方面的一些实施方式中，步骤(6)中，Tris-HCl缓冲液和氯化钠溶液的重量比为1:(0.7～2)，例如1:0.8、1:1、1:1.5。本专利技术第一方面的一些实施方式中，步骤(6)中Tris-HCl缓冲液和氯化钠溶液的重量之和为步骤(4)中水重量的1～8倍，例如2、3、4、5、6、7倍。本专利技术第一方面的一些实施方式中，步骤(6)中，收集全部洗脱液作为海红豆提取物。本专利技术第一方面的一些实施方式中，所述方法具有如下A至S中的一项或多项特征：A.步骤(1)中，水和海红豆的重量比为(1～10):1，例如2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1；B.步骤(1)中，在1℃～17℃条件下浸提，例如2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃、10℃、12℃、14℃、16℃、15℃；C.步骤(1)中，浸提持续0.5～5小时，例如1小时、2小时、3小时、4小时；D.步骤(1)中，浸提一次或多次，优选为三次，例如1、2、3次；E.步骤(1)中，通过过滤进行固液分离，优选通过滤纸过滤；F.步骤(2)中，在盐析处理前，将液相物进行浓缩，收集浓缩物；优选地，在浓缩后、盐析处理前，将浓缩物进行离心分离，收集上清液，用于盐析处理；优选地，浓缩在1℃～17℃条件下进行，例如2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃、10℃、12℃、14℃、16℃、15℃；优选地，浓缩至原体积的0.1～0.9倍，例如0.2倍、0.3倍、0.4倍、0.5倍、0.6倍、0.7倍、0.8倍；更优选地，离心分离的转速为1000～10000rpm，例如2000rpm、3000rpm、4000rpm、5000rpm、6000rpm、7000rpm、8000rpm、9000rpm；更优选地，离心分离持续2～40分钟，例如5分钟、8分钟、10分钟、12分钟、14分钟、16分钟、18分钟、20分钟、22分钟、24分钟、26分钟、28分钟、30分钟、32分钟、34分钟、36分钟、38分钟、39分钟；G.步骤(2)中，采用选自硫酸铵、硫酸钠和氯化钠中至少一种盐进行盐析处理，优选为硫酸铵；H.步骤(2)中，盐析处理至盐(在液相物中)的溶解度达到饱和；I.步骤(3)中，在固液分离前，将混合物在1℃～17℃(例如2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃、10℃、12℃、14℃、15℃、16℃)条件下静置；优选地，静置持续0.5～9小时，例如1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时；J.步骤(3)中，通过离心处理进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备海红豆提取物的方法，包括如下的步骤：/n(1)采用水浸提海红豆，固液分离，得到液相物；/n(2)将液相物进行盐析处理，得到混合物；/n(3)将混合物进行固液分离，得到固相物；/n(4)将固相物溶解于水中，得到溶液；/n(5)将溶液进行透析处理，收集透过液；其中，采用孔径为1000～20000道尔顿的透析膜进行透析处理；/n(6)将透过液进行层析处理，收集洗脱液即为海红豆提取物；其中，采用DEAE琼脂糖凝胶柱进行层析处理。/n

【技术特征摘要】
1.一种制备海红豆提取物的方法，包括如下的步骤：
(1)采用水浸提海红豆，固液分离，得到液相物；
(2)将液相物进行盐析处理，得到混合物；
(3)将混合物进行固液分离，得到固相物；
(4)将固相物溶解于水中，得到溶液；
(5)将溶液进行透析处理，收集透过液；其中，采用孔径为1000～20000道尔顿的透析膜进行透析处理；
(6)将透过液进行层析处理，收集洗脱液即为海红豆提取物；其中，采用DEAE琼脂糖凝胶柱进行层析处理。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(4)中，固相物与水的体积比为1:(1～6)。


3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(6)中，先用Tris-HCl缓冲液洗脱，接着用氯化钠溶液洗脱；
优选地，Tris-HCl缓冲液和氯化钠溶液的重量比为1:(0.7～2)。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于如下A至S中的一项或多项：
A.步骤(1)中，水和海红豆的重量比为(1～10):1；
B.步骤(1)中，在1℃～17℃条件下浸提；
C.步骤(1)中，浸提持续0.5～5小时；
D.步骤(1)中，浸提一次或多次，优选为三次；
E.步骤(1)中，通过过滤进行固液分离；
F.步骤(2)中，在盐析处理前，将液相物进行浓缩，收集浓缩物；
优选地，在浓缩后、盐析处理前，将浓缩物进行离心分离，收集上清液，用于盐析处理；
优选地，浓缩在1℃～17℃条件下进行；
优选地，浓缩至原体积的0.1～0.9倍；
更优选地，离心分离的转速为1000～10000rpm；
更优选地，离心分离持续2～40分钟；
G.步骤(2)中，采用选自硫酸铵、硫酸钠和氯化钠中至少一种盐进行盐析处理，优选为硫酸铵；
H.步骤(2)中，盐析处理至盐的溶解度达到饱和；
I.步骤(3)中，在固液分离前，将混合物在1℃～17℃条件下静置；
优选地，静置持续0.5～9小时；
J.步骤(3)中，通过离心处理进行固液分离；
优选地，离心处理的转速为1000～1000...

【专利技术属性】
技术研发人员：高翔，钟玉绪，王萧，杨明，董华进，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11