【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于增加蛋白产量的细胞系和方法序列表本申请含有已经以ASCII格式以电子方式提交且特此通过引用以其全文并入的序列表。所述ASCII副本创建于2018年9月28日，名称为0098-0001WO1_SL.txt，大小为17,225字节。
本技术总体上涉及用于增加各种细胞系中的重组蛋白产量的方法。在实施例中，对ULK1基因的作用进行削弱，从而使细胞系的蛋白产量增加。还提供了具有增加的蛋白产量的细胞系，以及制备此类细胞系的方法。
技术介绍
随着生物药物在医学中变得越来越重要，需要从各种细胞类型(包括真核细胞，例如哺乳动物细胞)来提供增加的治疗性蛋白的收率。这还涉及对高且稳定表达的重组细胞系，特别是哺乳动物细胞系的需求。用于制备治疗性蛋白的重组细胞克隆的产生通常需要广泛筛选各个克隆以检测和分离高表达的克隆。然而，即使在筛选方法的过程中鉴定出高表达的克隆，这些最初高表达的克隆常常也会随着时间的推移失去其有利的表达特性，并且表达收率随着时间的推移而降低。因此，必须加以关注以便在一群成功表达的细胞中鉴定出那些在长期培...
【技术保护点】
1.一种分离的细胞，在该分离的细胞中，ULK1基因的表达产物的作用已受到削弱。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171002 US 62/5666811.一种分离的细胞，在该分离的细胞中，ULK1基因的表达产物的作用已受到削弱。
2.如权利要求1所述的分离的细胞，其中该分离的细胞是真核细胞。
3.如权利要求2所述的分离的细胞，其中该真核细胞是哺乳动物细胞。
4.如权利要求3所述的分离的细胞，其中该哺乳动物细胞是人胚肾(HEK)细胞或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
5.如权利要求1-4中任一项所述的分离的细胞，其中该ULK1基因的表达产物的作用已通过突变或编辑该分离的细胞中的该ULK1基因而受到削弱。
6.如权利要求5所述的分离的细胞，其中该突变或编辑消除了或削弱了该ULK1基因的表达产物的一个或多个催化残基，或经翻译后修饰的该ULK1基因的表达产物的一个或多个残基，或者产生了显性负突变。
7.如权利要求5所述的分离的细胞，其中该突变或编辑减少了该细胞中该ULK1基因的表达或敲除了该ULK1基因。
8.如权利要求1-4中任一项所述的分离的细胞，其中该ULK1基因的表达产物的作用已通过转录后基因干扰而受到削弱。
9.如权利要求8所述的分离的细胞，其中该转录后基因干扰利用siRNA干扰、微RNA干扰、反义RNA干扰或小分子干扰。
10.如权利要求1-9中任一项所述的分离的细胞，其中与其中该ULK1基因的表达产物的作用未受到削弱的细胞相比，该ULK1基因的表达产物的作用的削弱会导致重组蛋白的产量的增加。
11.如权利要求10所述的分离的细胞，其中该重组蛋白是分泌蛋白、膜锚定蛋白或细胞内蛋白。
12.如权利要求10-11中任一项所述的分离的细胞，其中该重组蛋白是抗体。
13.如权利要求10-12中任一项所述的分离的细胞，其中该重组蛋白的产量的增加为至少约30％。
14.如权利要求13所述的分离的细胞，其中该重组蛋白的产量的增加为约50％至约500％。
15.一种产生重组蛋白的方法，该方法包括：
a.将编码该重组蛋白的重组基因引入其中ULK1基因的表达产物的作用已受到削弱的分离的细胞中；
b.在允许该重组蛋白表达的条件下培养该分离的细胞；以及
c.如果该重组蛋白由该分离的细胞分泌，则从该分离的细胞或从培养基中分离该重组蛋白。
16.如权利要求15所述的方法，其中该分离的细胞是真核细胞。
17.如权利要求16所述的方法，其中该真核细胞是哺乳动物细胞。
18.如权利要求17所述的方法，其中该哺乳动物细胞是人胚肾(HEK)细胞或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
19.如权利要求15-18中任一项所述的方法，其中该ULK1基因的表达产物的作用已通过突变或编辑该分离的细胞中的该ULK1基因而受到削弱。
20.如权利要求19所述的方法，其中该突变或编辑消除了或削弱了该ULK1基因的表达产物的一个或多个催化残基，或经翻译后修饰的该ULK1基因的表达产物的一个或多个残基，或者产生了显性负突变。
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【专利技术属性】
技术研发人员：R罗特，L迈尔，
申请(专利权)人：阿斯利康瑞典有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞典;SE
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