非细胞根管填料以及非细胞牙体组织再生促进试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种非细胞牙体组织再生促进试剂盒，即使在不移植自体或同种异体干细胞或干细胞来源成分的情况下，也能够有效地使牙体组织再生。该试剂盒包含：含有丝氨酸蛋白酶的预处理剂，以及非细胞根管填料；其中，所述非细胞根管填料包含：含有CCR3拮抗剂、CCL11中和抗体以及ALK5抑制剂中的至少任一种的再生促进化合物，以及细胞外基质。优选用于中高龄个体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】非细胞根管填料以及非细胞牙体组织再生促进试剂盒
本专利技术涉及一种促进牙髓、牙本质以及根尖牙周组织再生的、不使用干细胞或干细胞成分的非细胞根管填料以及非细胞牙体组织再生促进试剂盒。
技术介绍
在超高龄社会中，拥有健康且能咀嚼利落的牙齿对于健康长寿至关重要。但是，在中高龄(中老年)人中，已去除牙齿的神经(拔髓)的牙齿在数十年后再次感染而陷入脓液积聚于牙根下的疾病(感染根管)者超过20％，而且约25％即使接受治疗也无法完全治愈。这种慢性感染病灶对免疫力降低的高龄(老年)人全身的影响很大。在老年人中，多数情况下，在骨质疏松症治疗药服用中无法拔牙。另外，在中老年人中，即使在拔牙的情况下也仍能适用种植体的病例减少。另一方面，牙齿缺失会导致咬合·发音·味觉·触觉·美观性降低、QOL降低。最近，担心由牙齿或口腔功能降低引起的口腔·虚弱(oral·frail)会导致由肌肉力量低或体格功能低等肌肉减少症或营养不良等从而引起生活功能的降低，甚至陷入需要护理的状态。因此，为了维持牙齿以及口腔功能，已经开发了一种牙髓再生治疗法，该方法是将从自己不用的牙齿中分离提取的牙髓干细胞进行自体移植，或者将从其他人不用的牙齿中分离提取的牙髓干细胞进行同种异体移植，这样可以使牙齿恢复原状，即使拔髓也不至于感染根管·拔牙(专利文献1～3)。另外，不仅是牙髓干细胞，即使是将来源于骨髓或脂肪的其他组织的干细胞进行自体或同种异体移植，牙髓也可以被再生。但是，与牙髓干细胞移植相比，牙髓再生量、血管新生量(新生血管形成量)、神经再生量较差(专利文献4)。已经通过临床研究证实了通过自体牙髓干细胞移植的牙髓再生治疗法的安全性，并显示了其有效性(非专利文献1)。另一方面，牙髓再生治疗中，相对于前者的干细胞治疗(stemcelltherapy)(干细胞移植法)，存在细胞归巢(cellhoming)(细胞迁移法)。相对于幼龄(年轻)人的牙根未成熟的牙齿，主流的方法是不使用牙髓干细胞，而在根管内填充血块(非专利文献2)。或者，也有注入PRP(富血小板血浆、Platelet-RichPlasma)代替血块的方法(非专利文献3)。但是，据说几乎没有观察到牙髓固有组织的再生，主要不过是再生了富含血管的纤维性·骨样组织(非专利文献4)。动物实验中，还开发了不使用干细胞而使用基质细胞衍生因子(stromalcellderivedfactor(SDF1α))、碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor(bFGF))、血小板源性生长因子(platelet-derivedgrowthfactor(PDGF))、干细胞因子(stemcellfactor(SCF))、以及粒细胞集落刺激因子(granulocytecolony-stimulatingfactor(G-CSF))等的细胞生长因子(growthfactor)或细胞因子作为趋化因子的细胞归巢(细胞迁移法)(非专利文献5)。但是，据报道，不能进行充分的牙髓再生，且大部分是伴随血管的非常致密的纤维性结缔组织，还存在根管全部被钙化的情况(非专利文献6、7)。因此，迄今为止，已经考虑到干细胞对于牙髓组织的再生是必不可少的，特别是在根发育完全的牙齿中(非专利文献8)。但是，自体干细胞移植存在如下缺点：在使用牙髓干细胞时需要智齿等自己不用的牙齿，在确认细胞加工物的安全性上花费高昂的成本，在必要时不能立即供给细胞，另外，中老年人的干细胞特性发生变化，能够分离提取的牙髓干细胞总数减少，扩增也花费时间。在同种异体移植中，尽管由于每一批的细胞制品数的增加，细胞制造加工后的安全性确认所需的成本与自体移植相比减少，但仍然存在诸如下述未解决的问题：确保安全性的牙齿供给源的问题，因牙髓干细胞制品化而对供给牙齿的人的权利或报酬等法律问题，人的免疫反应的安全性问题等。因此，希望开发出在不使用干细胞或干细胞来源成分的情况下促进拔髓或感染根管治疗之后的牙体组织(即，牙髓、牙本质、根尖部牙周组织)再生的技术。另一方面，通过对用于牙髓再生且能促进宿主细胞迁移(细胞移行)的干细胞来源的进一步研究，认为可以选择适当的信号因子。即，希望今后开发出通过适当的信号因子的牙髓再生法，该信号因子能促进具有血管生成能力或神经分化能力的宿主干细胞的迁移，抑制具有骨形成或牙骨质形成能力的细胞的迁移(非专利文献9)。其中，中高龄个体的牙髓再生与幼龄个体相比延迟。近年来，通过犬类动物实验，在中高龄的牙髓干细胞移植的牙髓再生治疗中，将CCL11中和抗体/CCR3拮抗剂(antagonist)或ALK5抑制剂(inhibitor)与牙髓干细胞一起进行移植则会促进牙髓再生。或者，在牙髓干细胞移植前，使用胰蛋白酶(Trypsin)对中高龄牙齿的根管内进行预处理则促进牙髓再生(专利文献5)。CCL11中和抗体或CCR3拮抗剂可抑制CCL11与CCR3结合，阻断信号传导。另外，GDF11与typeITGF-betasuperfamilyreceptorsACVR1B(ALK4)、TGFBR1(ALK5)以及ACVR1C(ALK7)结合，但是信号传导由ALK4及ALK5进行。ALK5抑制剂阻断了GDF11的信号传导。牙髓再生时，认为来自牙本质中蓄积的牙髓干细胞的分泌因子从牙本质中游离出来，从而促进牙髓再生(非专利文献10)。在体外(invitro)通过在含有老化牙髓干细胞的分泌因子的培养上清中添加CCR3拮抗剂，显著提高了培养上清中的神经突起伸长(神经突起生长)的促进作用以及迁移的促进作用。另外，通过添加ALK5抑制剂，显著提高了培养上清的血管诱导能力以及神经突起伸长促进作用。因此，揭示出中高龄犬中的CCR3拮抗剂或ALK5抑制剂的牙髓再生促进作用是由血管诱导促进、神经突起伸长促进以及迁移促进作用引起的。但是，在幼犬的牙髓再生中，即使将CCR3拮抗剂或ALK5抑制剂与牙髓干细胞一起进行移植，也未观察到效果(专利文献5)。另一方面，胰蛋白酶作为药物用于达到以下目的：使坏死组织或凝血、变性蛋白质得以溶解，并使创面正常化从而促进抗生素的作用(非专利文献11)。在体外(invitro)在胰蛋白酶处理的牙本质面上接种牙髓干细胞时，细胞的附着性增加，观察到向牙本质细胞的分化增进。由此给出如下提示：在中高龄犬的胰蛋白酶预处理下的牙髓再生促进作用，是通过由蛋白溶解作用引起的中高龄牙本质中蓄积的抑制剂失活或者由前体的切断引起的活性化、对细胞附着于牙本质的促进、牙本质细胞分化促进作用所引起的。但是，在幼犬的牙髓再生中，完全没有发现胰蛋白酶预处理的效果(专利文献5)。另外，在仅进行胰蛋白酶预处理而不移植牙髓干细胞的情况下，或者在仅使用CCR3拮抗剂或ALK5抑制剂而不移植牙髓干细胞的情况下，几乎没有观察到牙髓再生(专利文献5)。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特许5621105号公报专利文献2：日本特许6031658号公报专利文献3：日本特许5748194号公报专利文献4：日本特本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种非细胞根管填料，其特征在于，其包含：含有CCR3拮抗剂、CCL11中和抗体以及ALK5抑制剂中的至少任一种的再生促进化合物，以及细胞外基质。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170929 JP 2017-1907441.一种非细胞根管填料，其特征在于，其包含：含有CCR3拮抗剂、CCL11中和抗体以及ALK5抑制剂中的至少任一种的再生促进化合物，以及细胞外基质。


2.如权利要求1所述的非细胞根管填料，其特征在于，其包含：含有CCR3拮抗剂及ALK5抑制剂的再生促进化合物，以及细胞外基质。


3.如权利要求1或2所述的非细胞根管填料，其特征在于，其包含：含有G-CSF、bFGF以及SDF-1中的至少一种的趋化因子。


4.如权利要求1至3中任一项所述的非细胞根管填料，其特征在于，其用于幼龄个体。


5.一种非细胞牙体组织再生促进试剂盒，其特征在于，
其包含：含有丝氨酸蛋白酶的预处理剂，以及非细胞根管填料；
其中，所述非细胞根管填料包含：含有CCR3拮抗剂、CCL11中和抗体以及ALK5抑制剂中的至少任一种的再生促进化合物，以及细胞外基质...

【专利技术属性】
技术研发人员：中岛美砂子，庵原耕一郎，
申请(专利权)人：国立研究开发法人国立长寿医疗研究中心，
类型：发明
国别省市：日本;JP