【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经纯化的抗蠕虫组合物及相关方法联邦政府资助的研究的声明本专利技术是在由美国卫生与公共服务部(DepartmentofHealthandHumanService，HHS)国立卫生研究院(NationalInstituteofHealth，NIH)授予的授权号NIAID5R01AI056189-13和由美国农业部(UnitedStatesDepartmentofAgriculture，USDA)国家粮食与农业研究所(NationalInstitutesofFoodandAgriculture，NIFA)授予的授权号NIFA2016-67015-24861的政府支持下完成的。政府在本专利技术中具有一定的权利。相关申请本申请要求于2017年5月23日提交的美国临时专利申请序列号62/510,081的优先权，其内容通过引用并入本文中。
技术介绍
寄生于人GI道的土壤传播性蠕虫(soil-transmittedhelminth，STH)感染全世界23亿最贫困的人和＞400,000,000最贫困的儿童。由土壤细菌苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis，Bt)产生的晶体(Crystal，Cry)蛋白是提供对STH的安全且有效治疗的候选药剂。然而，尽管Cry蛋白的抗蠕虫生物活性已确立，但是向人和动物的胃肠(gastrointestinal，GI)道有效递送完整的生物活性Cry蛋白用于治疗STH仍存在重大的挑战。Cry蛋白表达和纯化的成本和可扩展性限制其在发展中国家作为实用性STH治疗的应用，在发展中国家，治疗必须...
【技术保护点】
1.药物组合物，其包含由单一类型的杀线虫晶体蛋白形成的分离的天然生物活性杀线虫晶体，其中所述晶体蛋白由宿主细菌的非芽孢形成形式产生，并且其中所述药物组合物基本上不含任何细菌芽孢或除晶体形式杀线虫晶体蛋白之外的宿主细菌蛋白质。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170523 US 62/510,0811.药物组合物，其包含由单一类型的杀线虫晶体蛋白形成的分离的天然生物活性杀线虫晶体，其中所述晶体蛋白由宿主细菌的非芽孢形成形式产生，并且其中所述药物组合物基本上不含任何细菌芽孢或除晶体形式杀线虫晶体蛋白之外的宿主细菌蛋白质。
2.权利要求1所述的药物组合物，其还包含适于经口施用于人对象的赋形剂。
3.权利要求1所述的药物组合物，其中所述宿主细菌是芽孢杆菌属(Bacillus)物种。
4.权利要求1所述的药物组合物，其中所述宿主细菌是苏云金芽孢杆菌(Btillusthuringiensis，Bt)。
5.权利要求1所述的方法，其中所述宿主细菌是大肠杆菌(E.coli)或荧光假单胞菌(P.fluorescens)物种。
6.权利要求1所述的药物组合物，其中所述非芽孢形成宿主细菌被遗传改造以具有导致芽孢形成缺陷的基因突变，使得所述天然生物活性杀线虫晶体被俘获在所述细菌的胞质溶胶中。
7.权利要求6所述的方法，其中所述导致芽孢形成缺陷的基因突变是选自以下的一种或更多种基因的缺失或失活：kinA、kinB、spoOA、spoOB、spoOE、spoOF、spoOJ、spoOMspoIIB、spoIID、spoIIE、spoIIF、spoIIG、spoIIL、spoIIM、spoIIIA、spoIIIB、spoIIIE、spoIVA、spoIVC、spoIVD、spoVG、spoVK、spoVL、spoVM、spoVN、spoVP、spoVQ、spoVID、σH、σF、σE、σG和σK。
8.权利要求6所述的方法，其中所述导致芽孢形成缺陷的基因突变是spoOA基因的缺失或失活。
9.权利要求1所述的药物组合物，其中所述宿主细菌被遗传改造以在非芽孢形成特异性启动子的控制下表达所述单一类型的杀线虫晶体蛋白。
10.权利要求9所述的药物组合物，其中所述非芽孢形成特异性启动子是Cry3A、GerA、GNAT或TadA启动子。
11.权利要求1所述的药物组合物，其中所述单一类型的杀线虫晶体蛋白选自：Cry5B、Cry5C、Cry5D、Cry6A、Cry13A、Cry14A、Cry21A、Cry21B、Cry55B，及其变体和截短体。
12.权利要求11所述的药物组合物，其中所述杀线虫晶体蛋白是Cry5B或者其变体或片段。
13.权利要求12所述的药物组合物，其中所述杀线虫晶体蛋白是Cry5B变体Ser407Cys。
14.权利要求1所述的药物组合物，其还包含第二晶体蛋白，所述第二晶体蛋白为仅由所述第二晶体蛋白形成的分离的天然生物活性杀线虫晶体的形式。
15.权利要求1至14中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含至少95％的分离的天然生物活性杀线虫晶体含量。
16.权利要求1至15中任一项所述的药物组合物，其中所述分离的天然生物活性杀线虫晶体处于可经口利用的剂型中。
17.权利要求1至16中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物为干粉形式并且被药用胶囊包封。
18.用于产生药物组合物的方法，所述方法包括：
(a)对经遗传改造以表达单一类型的杀线虫晶体蛋白的宿主细菌的非芽孢形成形式进行培养，其中所述非芽孢形成宿主细菌产生由所述单一类型的杀线虫晶体蛋白形成的天然生物活性杀线虫晶体，其中将所述宿主细菌在生长培养基中进行培养，并且任选地其中所述非芽孢形成宿主细菌将所述天然生物活性杀线虫晶体释放到所述生长培养基中；以及
(b)分离并浓缩所述天然生物活性杀线虫晶体以形成分离的天然生物活性杀线虫晶体。
19.权利要求18所述的方法，其中所述宿主细菌是芽孢杆菌属物种。
20.权利要求18所述的方法，其中所述宿主细菌是苏云金芽孢杆菌(Bt)。
21.权利要求18所述的方法，其中所述宿主细菌是大肠杆菌或荧光假单胞菌物种。
22.权利要求18所述的方法，其中所述非芽孢形成宿主细菌被遗传改造以具有导致芽孢形成缺陷的基因突变，使得所述天然生物活性杀线虫晶体被俘获在所述细菌的胞质溶胶中。
23.权利要求22所述的方法，其中所述导致芽孢形成缺陷的基因突变是选自以下的一种或更多种基因的缺失或失活：kinA、kinB、spoOA、spoOB、spoOE、spoOF、spoOJ、spoOMspoIIB、spoIID、spoIIE、spoIIF、spoIIG、spoIIL、spoIIM、spoIIIA、spoIIIB、spoIIIE、spoIVA、spoIVC、spoIVD、spoVG、spoVK、spoVL、spoVM、spoVN、spoVP、spoVQ、spoVID、σH、σF、σE、σG和σK。
24.权利要求22所述的方法，其中所述导致芽孢形成缺陷的基因突变是spoOA基因的缺失或失活。
25.权利要求18所述的方法，其中所述宿主细菌被遗传改造以在非芽孢形成特异性启动子的控制下表达所述单一类型的杀线虫晶体蛋白。
26.权利要求25所述的方法，其中所述非芽孢形成特异性启动子是Cry3A、GerA、GNAT或TadA启动子。
27.权利要求18所述的方法，其中所述单一类型的杀线虫晶体蛋白选自：Cry5B、Cry5C、Cry5D、Cry6A、Cry13A、Cry14A、Cry21A、Cry21B、Cry55B，及其变体和截短体。
28.权利要求27所述的方法，其中所述杀线虫晶体蛋白是Cry5B或者其变体或片段。
29.权利要求28所述的药物组合物，其中所述杀线虫晶体蛋白是Cry5B变体Ser407Cys。
30.权利要求18所述的方法，其还包括使所述非芽孢形成宿主细菌暴露于抗微生物化合物以使所述宿主细菌灭活的步骤。
31.权利要求30所述的方法，其中所述抗微生物化合物是碘类。
32.权利要求30所述的方法，其中所述抗微生物化合物是药用抗生素。
33.权利要求30所述的方法，其中所述抗微生物化合物是β-内酰胺类抗生素。
34.权利要求30所述的方法，其中所述抗微生物化合物是选自萜烯、己烷和甲醛的有机溶剂。
35.权利要求34所述的方法，其中所述抗微生物化合物是萜烯。
36.权利要求35所述的方法，其中所述萜烯选自：百里酚、丁香油酚、香叶醇、香芹酚和柠檬醛，或其组合。
37.权利要求36所述的方法，其中所述萜烯是香芹酚。
38.权利要求34所述的方法，其中所述抗微生物化合物是己烷。
39.权利要求30所述的方法，其还包括向经灭活的宿主细菌添加食品级油以从所述杀线虫晶体蛋白提取所述抗微生物化合物、可溶性细胞组分、脂质和细胞壁碎片的步骤。
40.权利要求39所述的方法，其中所述食品级油是玉米油。
41.权利要求30所述的方法，其还包括向经灭活的宿主细菌添加有机溶剂以从所述杀线虫晶体蛋白提取所述抗微生物化合物的步骤。
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【专利技术属性】
技术研发人员：拉菲·万·阿罗扬，加里·R·奥斯特罗夫，
申请(专利权)人：马萨诸塞大学，
类型：发明
国别省市：美国;US
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