基于色价和高效液相色谱法测定栀子黄含量的方法技术

本发明专利技术涉及一种基于色价和高效液相色谱法测定栀子黄含量的方法，利用光度法测定色价方法进行含量测定，对色谱条件进行了改进，高效液相色谱法测定的色谱条件为：C18色谱柱，流动相：乙腈‑0.1%磷酸缓冲溶液（55：45），进样量20μL，流速：0.7 mL/min，确定波长：440 nm。栀子黄色素浓度在0.01‑0.15 mg/mL范围内，峰面积与质量浓度呈良好的线性关系。高效液相色谱法确定栀子黄色素的含量与比色法所测色价之间具有良好的线性关系（r=0.998），其相关性方程为y=0.0018x‑0.0336。该方法准确测定栀子黄色素产品质量，快速获知栀子黄色素色价或含量。

Determination of gardenia yellow based on color value and HPLC

【技术实现步骤摘要】
基于色价和高效液相色谱法测定栀子黄含量的方法
本专利技术涉及栀子黄含量测定领域，具体的说是涉及基于色价和高效液相色谱法测定栀子黄含量的方法。
技术介绍
栀子黄色素是一种非常稀有的水溶性天然色素，其主要成分为藏红花素和藏红花酸。栀子黄色素水溶液在可见光区具有藏红花素和藏红花酸的吸收波长为440nm。国标(GB7912-2010)中配制栀子黄色素浓度为0.15mg/mL，色素公式为是试样液浓度为1％时，采用1cm玻璃比色皿，在440±5nm范围内的最大吸收波长处测得的色价值；A为在440nm出测定栀子黄色素溶液的吸光度；c为被测溶液的浓度，单位是g/mL)。该标准执行以来能够较好地反映出栀子黄色素的质量。《GB5009.149-2016食品安全国家标准食品中栀子黄的测定》修改了《GB5009.149-2003栀子黄的测定》，把原标准第一法高效液相色谱法测定栀子苷修改为高效液相色谱法测定藏花素和藏花酸。GB5009.149-2016标准样品处理等用甲醇处理进样峰型不好，采用了梯度洗脱，分析时间较长。同时无法从色价获知栀子黄含量，又无法从栀子黄色素含量获知色价结果。因此，我们系统研究了比色法测定色价和高效液相色谱法测定栀子黄含量，找出二者之间的关系，力求做到色价和含量互相预测。
技术实现思路
本专利一种基于色价和高效液相色谱法测定栀子黄含量的方法，利用光度法测定色价方法进行含量测定，对色谱条件进行了改进。本专利技术采用的技术方案：一种基于色价和高效液相色谱法测定栀子黄含量的方法，其特征在于按下述步骤操作：精密称取一定质量的栀子黄色素粗品，用50％乙醇溶解稀释定容，配置成0.01mg/mL的试样溶液，以50％乙醇溶液为空白对照，测定其在440nm的吸光值，根据色价公式计算其色价；在给定的色谱条件下，测定栀子黄色素粗品溶液，得到试液的峰面积及含量，所述色谱条件：C18色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，流动相：乙腈-0.1％磷酸缓冲溶液55∶45，进样量：20μL，流速：0.7mL/min，确定波长：440nm；根据所得色价-含量相关性方程y＝0.0018x-0.0336，计算出栀子黄色素含量。下面通过实验检验该测定方法的合理性。1、比色法测定栀子黄色素色价条件的选择(1)色价测定条件的确定精密称取色价为560和583的两种栀子黄色素分别配制成0.01mg/mL的标准储备液，选用440nm作为比色测量下的确定波长，以蒸馏水为空白对照，采用玻璃比色杯测定其吸光值A，根据计算公式计算其色价E，如表1所示：表1实验方法测得的栀子黄色价通过上表数据可以看出，实验所测色价与工厂所给标准栀子黄色素色价数值相差不大，说明用蒸馏水作为溶剂定容稀释栀子黄色素的色价测定方法可行。(2)栀子黄色素色价标准曲线的绘制取上述配好的两种栀子黄色素标准品储备液，通过配制得到的浓度为0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009mg/mL的标准溶液，以蒸馏水为空白对照组，在确定波长为440nm条件下测定两种栀子黄色素标准品的吸光值，然后通过色价公式得出其色价，如表2所示：表2两种标准品不同浓度下所测吸光值及色价栀子黄色素浓度，mg/mL0.0020.0030.0040.0050.0060.0070.0080.009标准品1吸光值0.1070.1470.2110.2440.320.3650.430.478标准品2吸光值0.1050.1770.2250.2910.3240.390.4420.486标准品1的色价107147211244320365430478标准品2的色价105177225291324390442486注：*t0.05＝2.447；**t0.01＝3.707以标准品色价值为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标绘制标准曲线，栀子黄色素标准品1的线性回归方程Y＝54.167X+44(相关系数R＝0.998)，栀子黄色素标准品2的回归方程为Y＝53.81X+62.857(R＝0.998)。说明在0-0.01mg/mL浓度范围内，栀子黄色素色价与吸光值之间具有良好的线性关系。2、高效液相色谱法测定栀子黄色素含量的结果与分析(1)线性关系考察分别吸取标准溶液配制得到0.01、0.03、0.05、0.07、0.09、0.11、0.13、0.15mg/mL的梯度标准溶液，精密吸取各水平的标准溶液20μL分别注入色谱仪中，得到其峰面积，如表3所示：表3液相色谱法线性关系考察实验结果编号浓度/(mg/mL)出峰时间/min峰面积10.012.84340189.3120.032.8231539462.8830.052.7822506340.5040.072.8233391619.5050.092.8324405890.0060.112.845510026.0070.132.8156864692.0080.152.8577862561.50注：*t0.05＝2.447；**t0.01＝3.707以峰面积为Y轴，以质量浓度为X轴的线性回归方程为y＝50000000x-200168(R＝0.999)。当df＝8-2＝6时，t0.05＝2.447；t0.01＝3.707。计算得Sr＝0.066，t＝r/Sr＝15.13＞t0.01。说明在0.01-0.15mg/mL范围内，栀子黄色素浓度和峰面积之间呈极显著相关(r＝0.999**)，高效液相色谱法测定栀子黄色素峰面积的条件以及对样品处理方法是合理的。(2)精密度实验取浓度为0.2mg/mL的标准溶液储备液，配制得到0.09mg/mL的试液。精密吸取此试液20μL注入色谱仪中，连续进5针，并记录峰面积，计算栀子黄色素峰面积的标准偏差和相对标准偏差(RSD)，结果如表4所示：表4精密度实验测定结果...

【技术保护点】
1.一种基于色价和高效液相色谱法测定栀子黄含量的方法，具体按下述步骤操作：/n精密称取一定质量的栀子黄色素粗品，用50％乙醇溶解稀释定容，配置成0.01mg/mL的试样溶液，以50％乙醇溶液为空白对照，测定其在440nm的吸光值，根据色价公式

【技术特征摘要】
20190514 CN 20191040033891.一种基于色价和高效液相色谱法测定栀子黄含量的方法，具体按下述步骤操作：
精密称取一定质量的栀子黄色素粗品，用50％乙醇溶解稀释定容，配置成0.01mg/mL的试样溶液，以50％乙醇溶液为空白对照，测定其在440nm的吸光值，根据色价公式计算其色...

【专利技术属性】
技术研发人员：王莹，杨成敏，孙连贵，刘凤霞，赵强，薛刚，
申请(专利权)人：南阳泰瑞生物科技股份有限公司，河南省安泰检测科技有限公司，南阳理工学院，
类型：发明
国别省市：河南;41