用于检测IL28B基因的方法、试剂盒、引物对及探针技术

本发明专利技术公开了一种用于检测IL28B基因的方法、试剂盒、引物对及探针。所述试剂盒包括PCR反应体系和基因芯片，所述PCR反应体系包括由一上游引物和一下游引物组成的引物对，所述基因芯片包括探针；所述引物对和所述探针选自如本发明专利技术所述的一种或多种组合。本发明专利技术的方法、试剂盒、引物对及探针用于检测IL28B基因时，操作简单、成本低廉，具有较高灵敏度、结果易读精准。通过本发明专利技术所述的方法、试剂盒、引物对、探针及其应用检测患者的IL28B基因型，主动预测慢性丙型肝炎患者对Peg‑IFN/RBV标准治疗方案的疗效和预后，指导临床医生一开始选择并确定药物品种和方案，提供了一种简便易行的解决方案。

Methods, kits, primer pairs and probes for detection of IL28B gene

【技术实现步骤摘要】
用于检测IL28B基因的方法、试剂盒、引物对及探针
本专利技术涉及体外诊断试剂领域，尤其涉及一种用于检测IL28B基因的方法、试剂盒、引物对及探针。
技术介绍
血液作为一种重要的生物样本，其内含有大量的DNA聚合酶抑制物质，如血红素、杂蛋白、脂肪等。为了完成血液样本核酸的PCR扩增，必须先从血液中对核酸物质进行纯化处理。一般包括以下三个过程，一是破裂细胞膜和核膜；二是纯化核酸，即去除蛋白质等影响后续PCR反应的杂质；三是洗脱核酸。通过提取处理虽然可以获得纯度比较高的核酸，但是核酸提取过程往往会导致大量的核酸损失，同时繁琐的提取纯化步骤增加了样本间交叉污染的风险，从而增加了后续PCR扩增失败的可能。此外由于提取过程耗时长，成本高，有些提取方法还需借助苯酚等有害试剂，增加了操作人员感染的风险，且难以实现高通量检测。因此，血液样本能够直接作为模板或经过简单处理就能够作为模板进行PCR扩增检测，成为血液样本扩增需要解决的难题。编码白细胞介素-28B(interleukin-28B,IL28B)的基因位于人体第19号染色体上(19q13.13)，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测IL28B基因的试剂盒，其特征在于，其包括PCR反应体系和基因芯片，所述PCR反应体系包括由一上游引物和一下游引物组成的引物对，所述基因芯片包括探针；其中，所述引物对和所述探针选自以下(1)-(3)的任一种、两种或三种：/n(1)所述引物对和所述探针用于检测IL28B基因的rs12979860位点，其中，所述上游引物和所述下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，和/或，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:8所示；/n(2)所述引物对和所述探针用于检测IL28B基因的rs8099917位点，其中，所述上游引物...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测IL28B基因的试剂盒，其特征在于，其包括PCR反应体系和基因芯片，所述PCR反应体系包括由一上游引物和一下游引物组成的引物对，所述基因芯片包括探针；其中，所述引物对和所述探针选自以下(1)-(3)的任一种、两种或三种：
(1)所述引物对和所述探针用于检测IL28B基因的rs12979860位点，其中，所述上游引物和所述下游引物的核苷酸序列分别如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示，和/或，所述探针的核苷酸序列如SEQIDNO:7和/或SEQIDNO:8所示；
(2)所述引物对和所述探针用于检测IL28B基因的rs8099917位点，其中，所述上游引物和所述下游引物的核苷酸序列分别如SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示，和/或，所述探针的核苷酸序列如SEQIDNO:9和/或SEQIDNO:10所示；
(3)所述引物对和所述探针用于检测IL28B基因的rs12980275位点，其中，所述上游引物和所述下游引物的核苷酸序列分别如SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示，和/或，所述探针的核苷酸序列如SEQIDNO:11和/或SEQIDNO:12所示。


2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应体系中的引物对的浓度为0.12～0.84μM；较佳地：
所述(1)中，所述引物对的浓度均为0.12～0.72μM，所述上游引物的浓度优选0.14μM；和/或，所述下游引物的浓度优选0.6μM；
和/或，所述(2)中，所述引物对的浓度均为0.2～0.64μM，所述上游引物的浓度优选0.2μM；和/或，所述下游引物的浓度优选0.6μM；
和/或，所述(3)中，所述引物对的浓度均为0.2～0.84μM，所述上游引物的浓度优选0.22μM；和/或，所述下游引物的浓度优选0.84μM。


3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述基因芯片中的探针的浓度为1.25～5μM；
较佳地，所述用于检测IL28B基因rs12979860位点的探针的浓度为1.4～5μM，优选3μM；和/或，所述用于检测IL28B基因rs8099917位点的探针的浓度为1.25～2.5μM，优选1.67μM；和/或，所述用于检测IL28B基因rs12980275位点的探针的浓度为1.43～3.3μM，优选2.5μM。


4.如权利要求1～3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述引物对为5’端有生物检测标记物修饰的引物对，所述生物检测标记物优选为生物素、地高辛、荧光素、荧光素衍生物、荧光分子、碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶；
和/或，所述探针为5’端由一基团修饰的探针，所述基团与基因芯片的固相支持物相结合，优选由一氨基修饰的探针，更优选由一氨基和多个碱基T修饰的探针，进一步更优选由一氨基和16个碱基T修饰的探针；所述固相支持物的修饰物优选为醛基；
和/或，所述PCR反应体系还包括强耐受性DNA聚合酶，所述强耐受性DNA聚合酶优选DirectPCRMix、TransDirectTMPCRSuperMix、PhusionBloodDirectPCRMasterMix中的一种或多种；
和/或，用于所述试剂盒的待测样品为含基因组DNA的生物样本，优选全血或口腔黏膜脱落细胞。


5.如权利要求1～4任一项所述的试...

【专利技术属性】
技术研发人员：李洪波，张玉祥，邢军芬，朱滨，
申请(专利权)人：上海百傲科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31