LncRNA在乳腺癌化疗相关心肌损伤患者诊断中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种用于诊断乳腺癌化疗相关心肌损伤的长链非编码RNA基因标志物，所述长链非编码RNA为LINC01471。本发明专利技术利用芯片技术筛选发现，与化疗前乳腺癌患者相比，化疗后患有心肌损伤的患者血液中，LINC01471的表达显著升高，并且该结果在荧光定量PCR中得到了进一步的验证。本发明专利技术的有益效果在于，本发明专利技术提供了一种诊断乳腺癌化疗相关心肌损伤的分子标志物，通过检测该分子标志物可以在乳腺癌患者化疗早期判断患者是否出现心肌损伤，从而及早的采取相应的治疗措施，减少乳腺癌患者治疗过程中发生心肌损伤的可能性。同时，相较于生化类标志物，本发明专利技术所提供的lncRNA标志物具有灵敏度高、特异性强的特点。

Application of lncrna in the diagnosis of chemotherapy-related myocardial injury in breast cancer

【技术实现步骤摘要】
LncRNA在乳腺癌化疗相关心肌损伤患者诊断中的应用
本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种LncRNA在乳腺癌化疗相关心肌损伤患者诊断中的应用。
技术介绍
乳腺癌是女性常见的一种恶性肿瘤，乳腺癌在欧美发达国家以及中国上海等大城市的发病率已经成为女性恶性肿瘤的首位。目前，乳腺癌的综合治疗手段主要包括手术、化疗、放疗、靶向治疗以及免疫治疗等，这其中化疗占有重要的地位。尽管，随着乳腺癌治疗水平的不断提高，患者的生存期不断延长，但是，化疗治疗后，患者的并发症也不断的增加，由化疗所引起的心肌损伤就是其中一种。研究显示，心脑血管疾病已经成为绝经后早期乳腺癌患者的首要死亡原因。肿瘤治疗中潜在的心血管毒性及其所致心血管事件已经成为肿瘤幸存者常见的健康隐患。因此，发现一种检测速度快，检测效果好的乳腺癌化疗相关心肌损伤标志物具有重要的意义。根据基因组学的研究，大约只有1%的基因可以转录成有蛋白编码功能的RNA，而大部分的基因则转录成无蛋白编码功能的RNA，即非编码RNA。长非编码RNA是一类长度大于200碱基的非编码RNA。长非编码RNA具有多种重要的细胞调控功能，能够参与到细胞发育和代谢等多种生命功能调控途径中，包括基因重组、基因印记、细胞周期调控、染色质修饰、转录、翻译、mRNA降解等。根据长非编码RNA与蛋白编码基因的位置关系，长非编码RNA被分为五类：正义长非编码RNA，反义长非编码RNA,双向长非编码RNA，内含子长非编码RNA，基因间长非编码RNA。长非编码RNA广泛存在于多种组织中，并且长非编码RNA的表达具有特异性和时空特异性。大量的研究表明，长非编码RNA与疾病的发病机制有关。现有的研究表明，长非编码RNA在疾病诊断和治疗领域具有巨大的研究前景。目前，LncRNA在人类疾病中的研究依然处于起步阶段，lncRNA在乳腺癌化疗相关心肌损伤中的机制还有待于进一步的研究和揭示。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种乳腺癌化疗相关心肌损伤诊断用的基因标志物，用于快速准确的诊断乳腺癌化疗相关心肌损伤患者。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案本专利技术提供了一种长链非编码RNA，所述长链非编码RNA为LINC01471,所述长链非编码RNALINC01471的编码基因GeneID：101927149，其转录本为NR_125397.1。优选地，所述长链非编码RNALINC01471的序列如SEQIDNO.1所示。此外，本专利技术提供了检测长链非编码RNALINC01471表达的试剂在诊断乳腺癌化疗治疗相关心肌损伤中的应用。优选地，所述试剂包括通过实时定量PCR、反转录PCR、原位杂交、芯片检测LINC01471表达水平的试剂。此外，本专利技术提供了测定样本中LINC01471含量的产品在制备诊断乳腺癌化疗治疗相关心肌损伤工具中的应用。优选地，所述产品包括PCR检测试剂盒。优选地，所述PCR检测试剂盒包括LINC01471的特异性引物和探针。优选地，所述LINC01471特异性引物序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。优选地，所述PCR检测试剂盒还包括缓冲剂、助剂、溶剂。除此之外，本专利技术提供了长链非编码RNALINC01471在用于筛选乳腺癌化疗治疗相关心肌损伤候选药物中的应用。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了一种诊断乳腺癌化疗相关心肌损伤的分子标志物，通过检测该分子标志物能够在乳腺癌患者化疗治疗早期判断患者是否出现心肌损伤，从而及早的采取相应的治疗措施，减少乳腺癌患者治疗过程中发生心肌损伤的可能性。同时，相较于生化类标志物，本专利技术所提供的lncRNA标志物具有灵敏度高、特异性强的特点。附图说明图1利用芯片筛选出的乳腺癌化疗相关心肌损伤患者的差异表达基因LINC01471的表达情况。A:化疗前乳腺癌患者血清B:相应化疗后患有心肌损伤患者的血清图2化疗后未患有心肌损伤患者化疗前后血清中LINC01471的表达情况。C:化疗前乳腺癌患者血清D:相应化疗后未患有心肌损伤患者的血清图3利用荧光定量PCR检测LINC01471在乳腺癌化疗相关心肌损伤患者中的表达情况。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术进行进一步的详细说明。需要说明的是，以下实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例1筛选乳腺癌化疗相关心肌损伤差异表达长链非编码RNA1.研究对象选取5例化疗后出现心肌损伤乳腺癌患者的血液（B组），以及相应乳腺癌患者未化疗前的血液（A组）（患者化疗前未患有心肌损伤），同时，选择5例化疗后未出现心肌损伤患者的血液（D组）以及相应乳腺癌患者未化疗前的血液（C组），本研究通过医院伦理委员会审查和批准，所有患者入组前均签署书面知情通知书。2.RNA提取（1）临床血清样本收集后置于离心机中，12000r/min离心10min，重复2次，将所得血清样本置于-80℃冰箱中保存；（2）将冻存的血清样本置于4℃冰箱中解冻；（3）取250ul血清样本置于离心管中，加入750ulTrizol，吹打混匀后，室温静置5min（4）加入250ul氯仿，震荡混匀后，室温放置15min；（5）4℃12000rpm离心15min；（6）取上清（需要注意不能吸到中间层），转移至另一个离心管中，加入1.5ml预冷的异丙醇混匀，混匀后冰上静置8分钟；（7）4℃12000rpm离心10分钟，去除上清，留沉淀；（8）加入1ml75%乙醇，温和震荡离心管，悬浮沉淀；（9）4℃8000rpm离心5分钟，使用移液器小心的去除上清；（10）室温静置10分钟干燥RNA，之后使用50ulDEPC水溶解沉淀。（11）使用Nanodrop2000微量紫外分光光度计测定组织总RNA的纯度和浓度。3.逆转录用LowRNAInputLinearAmplificationKit将mRNA逆转录成cDNA，同时用Cy3分别标记A-D组。4.LncRNA表达芯片分析使用Arraystar公司的ArraystarHuman1ncRNAArray检测乳腺癌化疗相关心肌损伤患者血清和相应患者未化疗前的血清中LncRNA表达谱的差异，并使用利用AgilentGeneSpring软件对芯片结果进行分析，筛选表达量具有显著性差异(Foldchang≥2.0，P值≤0.05)的lncRNA。5.实验结果结果如图1所示，同未化疗前患者血清相比，患有乳腺癌化疗相关心肌损伤患者的血清中LINC01471基因的表达量显著提高（P值≤0.05），而化疗后未患有心肌损伤的患者血清中LINC01471基因的表达量无显著变化（图2）。实施例2荧光定量PCR验证LINC01471基因的表达差异1.样本选取选取20例化疗后出现心肌损伤乳腺癌患者的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种长链非编码RNA，其特征在于，所述长链非编码RNA为LINC01471,所述长链非编码RNA LINC01471的编码基因Gene ID：101927149。/n

【技术特征摘要】
1.一种长链非编码RNA，其特征在于，所述长链非编码RNA为LINC01471,所述长链非编码RNALINC01471的编码基因GeneID：101927149。


2.根据权利要求1所述的长链非编码RNA，其特征在于，所述长链非编码RNALINC01471的序列如SEQIDNO.1所示。


3.检测长链非编码RNALINC01471表达的试剂在诊断乳腺癌化疗相关心肌损伤中的应用。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂包括通过实时定量PCR、反转录PCR、原位杂交、芯片检测LINC01471表达水平的试剂。


5.测定样本中LINC01471含量...

【专利技术属性】
技术研发人员：王兆平，王颖翠，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院青岛，
类型：发明
国别省市：山东;37