【技术实现步骤摘要】
一种基于精氨酸的奥马珠单抗防聚集方法
本专利技术属于奥马珠单抗纯化
，具体为一种基于精氨酸的奥马珠单抗防聚集方法。
技术介绍
注射用奥马珠单抗单抗是一种重组的人源化单克隆抗体，为抗IgE靶向生物制剂，是全球首个批准治疗中至重度哮喘的靶向治疗药物，该产品于2003年首次在全球上市，已在96个国家获得批准，包括美国、欧盟、日本等，已有超过680,000患者治疗年的奥马珠单抗单抗累积暴露(不通顺)。已完成77个过敏性哮喘研究。在中国是治疗中至重度哮喘患者的首个生物制剂，其疗效和安全性明确，本品的上市，为我国中重度过敏性哮喘患者带来更多个性化用药的治疗选择。精氨酸(Arginine)又称蛋白氨基酸，是氨基酸类化合物。本品在人体内参与鸟氨酸循环，促进尿素的形成，使人体内产生的氨经鸟氨酸循环转变成无毒的尿素，由尿中排出，从而降低血氨浓度。本品有较高浓度的氢离子，有助于纠正肝性脑病时的酸碱平衡。与赖氨酸共同为碱性氨基酸。我们根据现有技术资料提出不同浓度的精氨酸是否可以防止奥马珠单抗在pH为4.4～6.2的环境中产生聚集的情况的问题，并通过实验提出一种基于精氨酸的奥马珠单抗防聚集方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于：为了解决探究不同浓度的精氨酸是否可以防止奥马珠单抗在pH为4.4～6.2的环境中产生聚集的情况问题，提供一种基于精氨酸的奥马珠单抗防聚集方法。本专利技术采用的技术方案如下：一种基于精氨酸的奥马珠单抗防聚集方法，包括如下步骤：S1、准备仪器，实验前准备...
【技术保护点】
1.一种基于精氨酸的奥马珠单抗防聚集方法，其特征在于：包括如下步骤：/nS1、准备仪器，实验前准备电子天平、pH计、层析系统、移液枪、rProtein A填料、XK50/20层析柱；As:1.114、HETP:0.0213、CV:175、H:8.9；/nS2、准备物料耗材，准备好物料为实验制备溶液；/nS3、层析实验，通过漂洗、平衡、上样、淋洗、洗脱、再生、消毒前平衡、消毒、消毒后平衡、二次漂洗、保存的步骤来进行层析实验；/nS4、防聚集实验，通过稀盐酸调节pH，滴加Tris碱进行观察；/nS5、分析结果，分析不同含量下的结果；/nS6、得出结论，跟据分析结果得出结论。/n
【技术特征摘要】
1.一种基于精氨酸的奥马珠单抗防聚集方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1、准备仪器，实验前准备电子天平、pH计、层析系统、移液枪、rProteinA填料、XK50/20层析柱；As:1.114、HETP:0.0213、CV:175、H:8.9；
S2、准备物料耗材，准备好物料为实验制备溶液；
S3、层析实验，通过漂洗、平衡、上样、淋洗、洗脱、再生、消毒前平衡、消毒、消毒后平衡、二次漂洗、保存的步骤来进行层析实验；
S4、防聚集实验，通过稀盐酸调节pH，滴加Tris碱进行观察；
S5、分析结果，分析不同含量下的结果；
S6、得出结论，跟据分析结果得出结论。
2.如权利要求1所述的一种基于精氨酸的奥马珠单抗防聚集方法，其特征在于：所述S2准备物料耗材，其具体步骤如下：
S201、制备ACEQBuffer溶液；向配制容器中加入适量的纯化水，约为配制体积70％～90％，开启搅拌，分别将称量好的5.05g/L的十二水合磷酸氢二钠Na2HPO4·12H2O，0.92g/L的二水合磷酸二氢钠NaH2PO4·2H2O，8.77g/L的氯化钠NaCl缓慢加入配制容器中，搅拌至完全溶解。停止搅拌并用纯化水定量至所需配制体积2L，继续搅拌至混匀，得到20mM磷酸盐缓冲液PBS，含150mMNaCl，pH7.0±0.4；
S202、制备ACELBuffer溶液；准备物料25mM柠檬酸盐缓冲液，pH3.0±0.2，一水合柠檬酸C6H8O7·H2O配4.57g/L,二水合柠檬酸钠C6H5Na3O7·2H2O配0.96g/L，溶液的配制体积为1L；
S203、制备ACStripBuffer溶液；准备物料0.1M磷酸，磷酸配6.2g/L，溶液配制体积为1L；
S204、制备ACSaniBuffer溶液；准备物料1MNaCl，0.1MNaOH，NaCl配58.44g/L，氢氧化钠NaOH配4.00g/L,溶液的配制体积为0.5L；
S205、制备ACStorageBuffer溶液；准备物料2％苯甲醇，0.1MNaAC，苯甲醇配20.00g/L，三水合醋酸钠NaAC·3H2O配13.61g/L，溶液配制体积为0.5L；
S206、制备ACpH调节液；准备物料1MTrisBase，TrisBase配121.14g/L，溶液配制体积0.5L；
S207、制备精氨酸保护剂；准备物料0.6ML-精氨酸，L-精氨酸配104.52g/L，溶液配制体积为0.1L。
3.如权利要求2所述的一种基于精氨酸的奥马珠单抗防聚集方法，其特征在于：所述S3层析实验，其具体步骤如下：
S301、初次漂洗；缓冲液种类为纯化水,体积流速为30ml/min，冲洗柱体积cv大于等于5；
S302、平衡；缓冲液种类为20mM磷酸盐缓冲液PBS,150mMNaCl，pH7.0±0.4,体积流速为30ml/min，冲洗柱体积cv大于等于3；
S303、上样；缓冲液种类为样品(动态吸附载量DBC≤38),体积流速为25ml/min，冲洗柱体积cv为2029ml；
S304、淋洗；缓冲液种类为20mM磷酸盐缓冲液PBS,150mMNaCl，pH7.0±0.4,体积流速为25ml/min，冲洗柱体积cv大于等于4；
S305、洗脱；缓冲液种类为25mM柠檬酸盐缓冲液，pH3.0±0.2,体积流速为25ml/min，冲洗柱体积cv为464.3ml；
S306、再生；缓冲液种类为0.1M磷酸,体积流速为30ml/min，冲洗柱体积cv大于等于3；
S307、消毒前平衡；缓冲液种类为20mM磷酸盐缓冲液PBS,150mMNaCl，pH7.0±0.4,体积流速为30ml/min，冲洗柱体积cv大于等于2；
S308、消毒；缓冲液种类为1MNaCl,0.1MNaOH,体积流速为30ml/min，冲洗柱体积cv大于等于1.5；
S309、消毒后平衡；缓冲液种类为20mM磷酸盐缓冲液PBS,150mMNaCl，pH7.0±0.4,体积流速为30ml/min，冲洗柱体积cv大于等于2；
S310、二次漂洗；缓冲液种类为纯化水,体积流速为30ml/min，冲洗柱体积cv大于等于5；
S311、保存；缓冲液种类为2％苯甲醇,0.1MNaAC,体积流速为30ml/min，冲洗柱体积cv大于等于1.2。
4.如权利要求3所述的一种基于精氨酸的奥马珠单抗防聚集方法，其特征在于：所述S4防聚集实验，其具体步骤如下：
S401、稀盐酸调节pH；用稀盐酸将精氨酸保护剂pH调至3.78；
S402、调制不同浓度精氨酸；取6支50ml离心管加入25ml亲和洗脱下来的样品再加入5ml不同浓度的精氨酸-洗脱液保护剂，使离心管内溶液体系中精氨酸浓度分别为0M，0.01M，0.03M，0.04M，0.05M，0.16M；
S403、滴加Tris；用Tris分别滴定各个离心管中的溶液，模拟纯化步骤中低pH孵育后pH回调的过程；
S404、肉眼观察并记录；用肉眼观察并记录每滴加100μlTris溶液体系的浑浊情况。
5.如权利要求4所述的一种基于精氨酸的奥马珠单抗防聚集方法，其特征在于：所述S5分析结果，其具体步骤如下：
S501、记录含0M精氨酸的样品溶液；累积添加Tris0μl，pH3.67时，溶液状态澄清；累积添加Tris100μl，pH3.85时，溶液状态澄清；累积添加Tris200μl，pH4.06时，溶液状态澄清；累积添加Tris300μl，pH4.29时，溶液状态澄清；累积添加Tris400μl，pH4.50时，溶液状态澄清；累积添加Tris500μl，pH4.69时，溶液状态澄清；累积添加Tris600μl，pH4.82时，溶液状态澄清；累积添加Tris700μl，pH4.91时，溶液状态浑浊；累积添加Tris800μl，pH5.15时，溶液状态浑浊；累积添加Tris900μl，pH5.40时，溶液状态浑浊；累积添加Tris1100μl，pH5.87时，溶液状态浑浊；累积添加Tris1300μl，pH6.35时，溶液状态浑浊；累积添加Tris1400μl，pH6.57时，溶液状态澄清；
S502、记录含0.1M精氨酸的样品溶液；累积添加Tris0μl，pH3.70时，溶液状态澄清；累积添加...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈思凯，李树德，严锐，奚军军，
申请(专利权)人：北大未名合肥生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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