【技术实现步骤摘要】
一种猪乳腺上皮细胞三维持续培养方法
本专利技术涉及细胞培养方法领域，具体涉及一种猪乳腺上皮细胞三维持续培养方法。
技术介绍
乳腺上皮细胞是组成乳腺的主要细胞，具有特殊的乳汁分泌功能，乳汁的许多成分只有乳腺上皮细胞才能合成。乳腺细胞的研究始于20世纪70年代，通过有效的细胞培养方法在细胞水平上培养原代乳腺上皮细胞，并进行传代来研究乳腺的生长、发育及泌乳细胞或分子生物学机制等已成为热点。目前以人、小鼠、牛的乳腺上皮细胞为模型进行的研究颇为丰富，但对猪乳腺上皮细胞的研究少有报道。细胞技术作为医学生物技术中最核心、最基础的技术，已成为当今医学科研工作的必备技能，广泛应用于生命科学的众多领域。传统细胞培养通常为细胞生长在单层的玻璃或塑料平面上，具有较好的伸展性，但不能充分真实模拟体内生长模式，最终影响细胞增殖、分化、凋亡、基因和蛋白表达等细胞过程。与单层细胞培养系统相比，三维细胞培养系统能更准确地反映细胞在组织中的实际微环境。三维细胞培养方法是将细胞放置在模仿体内细胞环境的三维培养载体内进行体外培养，细胞在三维载体的立体空间结...
【技术保护点】
1.一种猪乳腺上皮细胞三维持续培养方法，其特征在于：包括以下步骤：/n（1）分离提取猪乳腺原代上皮细胞10代之前的细胞进行实验；/n（2）用胰蛋白酶消化猪乳腺上皮细胞成单细胞后，1000rpm离心4~6min，弃去上清液，加入1mL普通培养基重悬后，调整细胞浓度至1×10
【技术特征摘要】
1.一种猪乳腺上皮细胞三维持续培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）分离提取猪乳腺原代上皮细胞10代之前的细胞进行实验；
（2）用胰蛋白酶消化猪乳腺上皮细胞成单细胞后，1000rpm离心4~6min，弃去上清液，加入1mL普通培养基重悬后，调整细胞浓度至1×106~5×106cells/mL，600~800rpm离心4~6min后，弃去上清液加入1mL实验用Matrigel重悬，混匀备用；
（3）使用200μL枪头吸取步骤（2）所得的悬液，以20~40μL/每滴的量滴入六孔板，每孔7~8滴，滴完后倒扣置于37℃二氧化碳培养箱中孵育30~40min使其凝固；
（4）在六孔板每孔加入2mL三维培养基，持续培养12~16天，根据培养基颜色每2~3天更换一次三维培养基；
（5）去除培养基，用D-PBS缓冲液洗三遍后，每孔加入2mL胰蛋白酶，使用1mL枪头吹散，37℃培养，每隔2~4min吹散混匀，直至成为单细胞，三维培养基中和消化后，4℃600~1000rpm离心4~6min后，去除上清液，按照步骤（2）~（4）进行传代，并对三维培养细胞RNA和蛋白进行提取检测。
2.根据权利要求1所述的一种猪乳腺上皮细胞三维持续培养方法，其特征在于：步骤（2）所述的Matrigel的配制：50~60%的Matrigel原液+40~50%的三维培养基，-25~-15℃保存一个月，处理前2~3小时放入3~5℃水上或者冰上预热。
3.根据权利要求1所述的一种猪乳腺上皮细胞三维持续培养方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖昊，查翠芳，王丽，杨雪芬，蒋宗勇，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物科学研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。