人类输卵管上皮细胞的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种人类输卵管上皮细胞的培养方法，包括如下步骤：获取壶腹部输卵管组织，置于消化液中消化；消化终止后，置于加有10％FBS的基础培养基中预贴壁培养3‑5h；预贴壁培养后，将上皮细胞转移至完全培养基中培养至细胞长密，然后进行饥饿处理培养2天收取细胞。本申请通过特定的消化液对输卵管组织进行完全消化，而且消化比较温和，不会破坏细胞的形态，此外，在培养过程中对培养基进行了优化。本发明专利技术通过上述培养方法，获得了大量的输卵管上皮细胞，而且纤毛分化比例高，为相关的研究提供了很大的便利。

Culture method of human oviduct epithelial cells

【技术实现步骤摘要】
人类输卵管上皮细胞的培养方法
本专利技术涉及细胞培养
，尤其涉及一种人类输卵管上皮细胞的培养方法。
技术介绍
输卵管一直被认为是被动的生殖，作为受精的场所和运输配子和着床前胚胎的通道。越来越多的证据表明，输卵管还调节精子的功能，并促进着床前胚胎的发育。输卵管的后几种功能是由其上皮细胞介导的。输卵管的管腔内衬有由分泌细胞和纤毛细胞组成的柱状上皮，分泌细胞和纤毛细胞在调节异种生殖的上皮表面方面都具有关键作用。分泌细胞产生的粘液、纤毛的摆动促进配子的运输。这些细胞类型在输卵管不同区域的比例在生殖周期中发生变化。尤其是壶腹区的上皮细胞正在积极合成和分泌各种分子到输卵管的腔内，包括补体蛋白-3和半月形细胞和腮腺蛋白，已知这些分子可以刺激着床前胚胎的发育。此外，最近的研究表明，一些浆液性卵巢癌可能来自输卵管上皮。原位输卵管壶腹部上皮中以纤毛上皮细胞为主，另一种类型的上皮细胞为分泌型上皮细胞。已经有人提出，输卵管纤毛细胞是由分泌样表型的细胞分化而来的。众所周知，体外培养的输卵管上皮细胞失去了与原位上皮相关的形态学特征，包括纤毛。目前尚不清楚在原本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人类输卵管上皮细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤一，将手术切下来的输卵管纵向剖开，置于Ham F12缓冲液中去除输卵管侧面多余的肉；/n步骤二，将步骤一处理后的输卵管置于消化液中消化14-20h；/n步骤三，终止消化后，颠倒，吸取上层液体，离心，置于加有10％FBS的基础培养基中预贴壁培养3-5h；/n步骤四，预贴壁培养后，将上皮细胞转移至完全培养基中培养至细胞长密；/n步骤五，对步骤四中长密的细胞进行饥饿处理培养分化纤毛；/n步骤六，收取样品；/n其中，所述消化液为包含左旋谷氨酰胺、青霉素和链霉素的Ham F12培养基、蛋白酶E以及DNA酶I；/n所述完全培养基包括基础培...

【技术特征摘要】
1.人类输卵管上皮细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，将手术切下来的输卵管纵向剖开，置于HamF12缓冲液中去除输卵管侧面多余的肉；
步骤二，将步骤一处理后的输卵管置于消化液中消化14-20h；
步骤三，终止消化后，颠倒，吸取上层液体，离心，置于加有10％FBS的基础培养基中预贴壁培养3-5h；
步骤四，预贴壁培养后，将上皮细胞转移至完全培养基中培养至细胞长密；
步骤五，对步骤四中长密的细胞进行饥饿处理培养分化纤毛；
步骤六，收取样品；
其中，所述消化液为包含左旋谷氨酰胺、青霉素和链霉素的HamF12培养基、蛋白酶E以及DNA酶I；
所述完全培养基包括基础培养基、胰岛素、转铁蛋白、霍乱毒素、上皮细胞生长因子(EGF)、牛脑垂体提取物、胚牛血清(FBS)、视黄酸(RA)和原代细胞抗生素。


2.根据权利要求1所述的人类输卵管上皮细胞的培养方法，其特征在于，所述胰岛素的浓度为10μg/ml，所述转铁蛋白的浓度为5μg/ml，所述霍乱毒素的浓度为0.1μg/ml，所述EGF的浓度为25ng/ml，所述牛脑垂体提取物的浓度为30μg/ml。


3.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张健，张慧宇，夏玮，赵晓雅，黄振，齐航，朱茜，何小青，梁桂玲，朱晨锋，
申请(专利权)人：中国福利会国际和平妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：上海;31