一种提高食甲基丁酸杆菌电转频率的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高食甲基丁酸杆菌电转频率的方法。该方法在原先电转化的基础上进行了改进，从感受态的制备，电转参数和复苏时间三方面优化转化方法，使得食甲基丁酸杆菌最终转化频率达到3170，较优化前提高10倍。在目前食甲基丁酸杆菌的研究稀少的大背景下，本发明专利技术对于其电转化条件进行了探索及优化，克服了目前对于食甲基丁酸杆菌菌株遗传操作工具研究的难题，具有良好的市场应用前景。

A method to improve the electrokinetic frequency of MTB

【技术实现步骤摘要】
一种提高食甲基丁酸杆菌电转频率的方法
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种提高食甲基丁酸杆菌电转频率的方法。
技术介绍
电转化技术应用于生物领域用于得到有特定功能的工程菌，是一种非常实用的技术。电转化也有人称作高压电穿孔法简称电穿孔法，可用于将DNA导入真核细胞和原核细胞。电转化技术的主要优点在于:对于磷酸钙DNA共沉淀法以及其他技术难以转化的细胞，电穿孔法仍可适用。电转化的效率高，既可用于克隆化基因的瞬间表达，也可用于建立整合有外源基因的细胞系。但是要决定特定细胞系的最佳转化条件必须进行大量工作。非模式菌株食甲基丁酸杆菌，简称Bm，是一种厌氧芽孢梭菌属，属于单碳厌氧型，可以同时利用多种C1原料进行发酵，如CO2、CO和甲醇等。另外,还能代谢多碳物质,包括葡萄糖、乳糖和丙酮酸，对这些物质代谢的主要产物是醋酸、丁酸或二者皆有,以及相应的醇类。Bm可用于生产石油和化学物质，开发食甲基丁酸杆菌作为甲醇利用的模式宿主，对促进甲醇生物转化具有重要意义。然而当前研究中该菌株遗传操作工具的缺乏，限制了其的发展和应用。目前食甲基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高食甲基丁酸杆菌电转频率的方法，以食甲基丁酸杆菌为目的菌株对其转化系统进行研究，包括以下步骤：/n（1）电转化感受态的制备/n（a）将食甲基丁酸杆菌以1:100转接到25 mLYTF培养基中，培养至OD

【技术特征摘要】
1.一种提高食甲基丁酸杆菌电转频率的方法，以食甲基丁酸杆菌为目的菌株对其转化系统进行研究，包括以下步骤：
（1）电转化感受态的制备
（a）将食甲基丁酸杆菌以1:100转接到25mLYTF培养基中，培养至OD600为0.3~0.4时，添加细胞弱化剂，37℃厌氧箱静置培养至OD600值0.7~0.8；
（b）冰浴30~40min后，4℃下4000~5000rpm离心8~10分钟，弃去上清，收集菌体；
（c）用10~12mL等渗的细胞洗涤液重悬菌体，并吹吸均匀，4℃下4000~5000rpm离心8~10分钟收集菌体，重复2-3次；
（d）用初始菌液体积8~10%的等渗蔗糖溶液将细胞吹吸混匀，再添加细胞增溶剂，将细胞吹吸均匀，以每管50~100μL分装于预冷的1.5mL离心管中，即得到感受态细胞；
（2）开始电转化操作
（e）取一管感受态细胞，置于冰上化冻，将2~5μg待转的质粒加入感受态细胞中，混匀，冰浴2~3分钟；
（f）上述混合体系加入预冷的2mm电转杯中，进行电击处理，持续时间5-6ms；
（g）立即加入0.8~1mlYTF培养基，混匀，于厌氧箱中静止复苏2h；

【专利技术属性】
技术研发人员：陈可泉，王静，王昕，马江峰，王雪麟，马琛，金雨琪，欧阳平凯，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32