一种产乳酸和H制造技术

本发明专利技术公开了一种产乳酸和H

A kind of lactic acid and H

【技术实现步骤摘要】
一种产乳酸和H2O2的乳杆菌及其应用
本专利技术涉及微生物领域，具体涉及一种产乳酸和H2O2的乳杆菌及其应用。
技术介绍
健康妇女阴道内存在多种微生物，它们与宿主、环境之间构成了相互制约、相互协调、动态平衡的阴道微生态系统。文献报道健康妇女的阴道菌群主要由乳杆菌构成，且某一种的乳杆菌占绝对优势，根据阴道菌群中占绝对优势乳杆菌菌种的不同可以将女性分为5类：(1)卷曲乳杆菌占优势的女性，(2)格氏乳杆菌(也可称为加氏乳杆菌)占优势的女性，(3)詹氏乳杆菌占优势的女性，(4)惰性乳杆菌占优势的女性，(5)阴道菌群组成多样化的女性。正常情况下乳杆菌对阴道可以起到保护作用，而以乳杆菌占优势的阴道微生态的紊乱则可以导致阴道炎。细菌性阴道病(BV)的发生是由于阴道菌群失调，宿主自身的乳杆菌减少而导致其他条件性病原微生物如加德纳菌、各种厌氧菌、弯曲弧菌等大量繁殖，BV实际上是以加德纳菌为主的一种混合感染。BV与许多严重的妇产科合并症有直接关系，包括与盆腔炎、不孕、不育、流产、妇科和产科手术后感染、早产、胎膜早破、新生儿感染和产褥感染等的发生有关。有文献报道BV发病率约为5.3％，而在妊娠妇女中，BV发病率为20％左右。病患在使用甲硝唑治愈后4周内的复发率为15～25％，3个月内复发率为30％，9个月复发率高达80％。抗生素是目前针对BV的首选治疗方法。BV治疗指南中首先推荐口服和/或阴道内甲硝唑用药治疗。虽然这些药物有效，但治疗1-3个月内约30％患者会有复发。由于副作用，例如胃肠不适、金属味、酒精不耐受和罕见的神经系统及其他器官系统不良反应，患者口服甲硝唑治疗常常耐受度较差。甲硝唑可能的副作用在妊娠女性中特别引起关注，在需要重复和延长甲硝唑疗程的复发性疾病患者中更加明显。此外，应用抗生素治疗，虽然可暂时缓解BV的症状，但也使本已减少的乳杆菌进一步减少，加重阴道微生态失调，从而使BV反复复发。因此，如何控制复发、彻底根治细菌性阴道病是妇产科医生亟需解决的棘手问题。目前，科学研究结果表明产乳酸、H2O2的乳杆菌是健康妇女阴道内的优势菌，是保护女性阴道免受病原体感染的重要因素，此外，这些优势乳杆菌还可以代谢产生一些有效抑制其他细菌特别是致病菌生长繁殖的细菌素。健康妇女阴道内存在多种乳杆菌，不同人的阴道菌群中占优势的乳杆菌菌种具有个体差异性，且同一种乳杆菌各株间抗致病菌能力差异明显。选择乳杆菌益生菌时，需要综合考虑乳杆菌的种类、同种但不同菌株产乳酸和H2O2能力、与阴道上皮细胞黏附的能力，其中乳杆菌能否在阴道成功定殖，是乳杆菌持续作用的基础，也是乳杆菌发挥疗效的关键因素之一。目前市面上大部分已有制品中的活菌均不是筛选自我国健康育龄期女性阴道内的优势菌群，且活菌量低，不能满足妇科临床的需求。已有部分专利申请涉及到优势菌卷曲乳杆菌或者格氏乳杆菌(CN201310002838.X)，但其所保护的菌株产乳酸的能力以及对阴道上皮细胞的黏附能力过低，而后者直接关系到卷曲乳杆菌或者格氏乳杆菌能否在阴道成功定殖，如上所述：后者是乳杆菌持续作用的基础，也是乳杆菌发挥疗效的关键因素之一。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有技术中的格氏乳杆菌和卷曲乳杆菌产乳酸和H2O2能力弱、黏附能力低以及不能很好地抑制阴道病原菌的繁殖等缺陷提供一种产乳酸和H2O2的乳杆菌及其应用。本专利技术的乳杆菌具有极强的产乳酸和H2O2能力和很好地黏附能力，并且体内和体外实验中均能够有效地加德纳菌、白念珠菌等病原菌的繁殖。本专利技术主要通过以下技术手段解决上述技术问题：本专利技术的技术方案之一是：一种产乳酸和H2O2的乳杆菌，所述的乳杆菌为格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)或卷曲乳杆菌(Lactobacilluscrispatus)，所述格氏乳杆菌的保藏编号为CGMCCNo.15815或者CGMCCNo.15816；所述卷曲乳杆菌的保藏编号为CGMCCNo.15813或者CGMCCNo.15814。较佳地，所述保藏编号为CGMCCNo.15815的所述格氏乳杆菌的16SrRNA序列如序列表中SEQIDNO.1所示；所述保藏编号为CGMCCNo.15816的所述格氏乳杆菌的16SrRNA序列如序列表中SEQIDNO.2所示；所述保藏编号为CGMCCNo.15813的所述卷曲乳杆菌的16SrRNA序列如序列表中SEQIDNO.3所示；所述保藏编号为CGMCCNo.15814的所述卷曲乳杆菌的16SrRNA序列如序列表中SEQIDNO.4所示。本专利技术的技术方案之二是：一种培养上述乳杆菌的方法，其包括如下步骤：在培养基中培养所述乳杆菌即可。较佳地，所述的培养基为MRS液体培养基；所述的培养为厌氧培养。本专利技术的技术方案之三是：一种菌剂，其活性成分包括至少一种上述的乳杆菌，即：上述的保藏编号为CGMCCNo.15815的格氏乳杆菌、保藏编号为CGMCCNo.15816的格氏乳杆菌、保藏编号为CGMCCNo.15813的卷曲乳杆菌以及保藏编号为CGMCCNo.15814的卷曲乳杆菌中的一种或多种。本专利技术的技术方案之四是：一种上述的乳杆菌的冻干粉，较佳地，所述的冻干粉通过如下步骤制得：(1)将上述的乳杆菌与冻干保护剂混合得混合物；(2)将所述混合物冷冻干燥即得。其中，步骤(1)中所述乳杆菌的与所述冻干保护剂的相对用量可为本领域常规的、进行冻干粉制备时的相对用量。为进一步提高所述乳杆菌的冻干存活率和增强所述冻干菌粉的稳定性,进而延长所述冻干菌粉的有效期，专利技术人创造性地对所述步骤(1)中的所述冻干保护剂以及步骤(2)中所述冷冻干燥的条件进行了优化。其中：所述的冻干保护剂较佳地包括如下组分：脱脂奶粉6～12％、谷氨酸钠2～4％以及海藻糖1～6％，以水补足至100％，所述的百分比为质量百分比；更佳地包括如下组分：脱脂奶粉7％、谷氨酸钠2％以及海藻糖3％，以水补足至100％，所述的百分比为质量百分比。所述冷冻干燥的条件较佳地为：-52～-48℃预冻2～5小时，然后在-47～-43℃下真空干燥2～48小时，再在26～30℃解析干燥10～40小时；更佳地为-50℃预冻4小时，然后在-45℃下真空干燥24小时，再在28℃解析干燥20小时。本专利技术的技术方案之五是：上述乳杆菌、上述菌剂，或者上述冻干粉在制备调节阴道菌群平衡或用于防治阴道疾病的食品、卫生用品、或者药物中的用途；较佳地，所述的阴道疾病为加德纳菌(Gardnerellavaginalis)、阿托波菌(Atopobiumvaginae)、白色念珠菌(Candidaalbicans)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)、铜绿假单胞菌(Pseudomonaaeruginosa)和沙门氏菌(Salmonellasp)中的一种或多种引发的阴道疾病；更佳地，所述的阴道疾病为阴道炎症性疾病；进一步更佳地，所述的阴道炎症性疾病包括细菌性阴道炎、念本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产乳酸和H

【技术特征摘要】
1.一种产乳酸和H2O2的乳杆菌，其特征在于，所述的乳杆菌为格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)或卷曲乳杆菌(Lactobacilluscrispatus)，所述格氏乳杆菌的保藏编号为CGMCCNo.15815或者CGMCCNo.15816；所述卷曲乳杆菌的保藏编号为CGMCCNo.15813或者CGMCCNo.15814。


2.一种培养如权利要求1所述的乳杆菌的方法，其特征在于，其包括如下步骤：在培养基中培养所述的乳杆菌即可。


3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的培养基为MRS液体培养基；
和/或，所述的培养为厌氧培养。


4.一种菌剂，其活性成分包括至少一种如权利要求1中所述的乳杆菌。


5.一种包含如权利要求1所述的乳杆菌的冻干粉。


6.如权利要求5所述的冻干粉，其特征在于，其通过如下步骤制得：
(1)将权利要求1中所述的乳杆菌与冻干保护剂混合得混合物；所述的冻干保护剂较佳地包括如下组分：脱脂奶粉6～12％、谷氨酸钠2～4％以及海藻糖1～6％，以水补足至100％，所述的百分比为质量百分比；
(2)将所述混合物冷冻干燥即得；所述冷冻干燥的条件较佳地为：-52～-48℃预冻2～5小时，然后在-47～-43℃下真空干燥2～48小时，再在26～30℃解析干...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐晓芬，付美红，王莎莎，高远，尹培军，朱刚刚，王苒君，于鸿晶，孙宁云，文彬，
申请(专利权)人：上海上药信谊药厂有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31