一株能有效降解阿特拉津的门多萨假单胞菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一株有效降解阿特拉津的门多萨假单胞菌株及其应用，属于生物修复技术领域。该门多萨假单胞菌SFAD3，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2019302。本发明专利技术还提供了该菌株的筛选方法以及应用该菌株得到的菌悬液。本发明专利技术的门多萨假单胞菌SFAD3在添加100mg/L的阿特拉津的基础盐培养基中培养15d，降解率达到50.06％，表明该菌株能有效降解阿特拉津；在含阿特拉津的土壤中处理30d，降解率达到72.6％，表明SFAD3对被阿特拉津污染的土壤有较好修复作用；同时采用本发明专利技术筛选的门多萨假单胞菌发酵液对芝麻苗生长具有一定促生作用。

A strain of Pseudomonas Mendoza capable of degrading atrazine and its application

【技术实现步骤摘要】
一株能有效降解阿特拉津的门多萨假单胞菌及其应用
本专利技术涉及一株有效降解阿特拉津的门多萨假单胞菌株，属于生物修复

技术介绍
阿特拉津(atrazine)通用名莠去津，化学名称为2-氯-4-乙胺基-6-异丙胺基-1,3,5-三嗪，属于三嗪类除草剂，广泛用于玉米、高粱、大豆等旱田作物防除一年生禾本科杂草马唐、稗草、狗尾草、莎草及十字花科和豆科杂草，对多年生杂草也有一定抑制作用。阿特拉津属于低毒除草剂，因其在土壤中持留性和半衰期较长，容易对水稻、小麦、大豆等后茬敏感作物产生药害；污染地下水和地表水，威胁到人类和动物健康以及生态环境。微生物降解是一种公认的环境友好型去除污染物的方法。假单胞属ADP菌株(Pseudomonassp.ADP)和节杆菌属TC1(Arthrobactersp.TC1)是研究降解阿特拉津的模式菌株，其降解原理已研究的比较透彻。目前报道门多萨假单胞菌能够降解的农药有甲胺磷、氟磺胺草醚、单甲脒，还没有关于降解阿特拉津的报道。
技术实现思路
本专利技术提供了一株门多萨假单胞菌(Pseudomonasmendocina)菌株，可有效降解阿特拉津，为三嗪类除草剂的环境修复提供理论依据和微生物资源。为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：一株有效降解阿特拉津的门多萨假单胞菌，该门多萨假单胞菌为门多萨假单胞菌SFAD3，已保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国武汉，保藏编号为CCTCCNO：M2019302，保藏日期：2019年04月28日。一种门多萨假单胞菌的筛选方法，在河南省农业科学院原阳实验基地的玉米田采集土壤，将土壤样品充分混匀，取10g土样加入到含阿特拉津10mg/L的基础盐培养基100mL中，30℃、180r/min震荡培养；每7d以10％的转接量将培养物转到阿拉特津浓度递增的基础盐培养基中，基础盐培养基中阿拉特津的浓度分别为10mg/L、20mg/L、30mg/L、50mg/L、100mg/L；取阿特拉津浓度为100mg/L时的富集培养物依次倍比稀释到10-1、10-2、10-3、10-4、10-5，各浓度取100μL分别涂布到含阿特拉津为100mg/L的固体基础盐培养基平板上，将平板放置于30℃恒温箱培养，培养3～5d后，挑取有水解圈的菌落，划线分离纯化，筛选出能有效降解阿特拉津的菌株，经鉴定，获得的降解菌为门多萨假单胞菌SFAD3。所述的基础盐培养基的成分为：0.45gKH2PO4，1.79gK2HPO4，0.4gNaCl，0.2gMgSO4·7H2O，蒸馏水定容至1000mL，pH7.0。一种门多萨假单胞菌降解阿特拉津配制的菌悬液，挑取门多萨假单胞菌SFAD3单菌落接种于LB液体培养基，30℃、200r/min震荡培养16～20h；取过夜培养的菌液，4000r/min离心10min，弃上清，沉淀用基础盐培养基洗涤3次；然后将沉淀用基础盐培养基配制成1×109cfu/mL的菌悬液。所述的菌悬液震荡培养时，在培养基为基础盐培养基，温度为37℃，pH为7，菌悬液的接种量为2％的条件下，降解阿特拉津的效果最好。一种所述的门多萨假单胞菌在有效降解阿特拉津方面的应用。一种所述的门多萨假单胞菌在含有阿特拉津残留的土壤修复方面的应用。一种所述的门多萨假单胞菌发酵液对芝麻苗生长方面的应用。本专利技术有益效果：1.本专利技术提供一株有效降解阿特拉津的菌株SFAD3，结合形态、生理生化特征和分子鉴定结果，确定SFAD3属于假单胞属(Pseudomonas)，为门多萨假单胞菌(Pseudomonasmendocina)。2.本专利技术的门多萨假单胞菌SFAD3在添加100mg/L的阿特拉津的基础盐培养基中培养15d，降解率达到50.06％，表明门多萨假单胞菌SFAD3能有效降解阿特拉津。3.环境条件对本专利技术的门多萨假单胞菌SFAD3的降解效率有显著影响，菌株SFAD3在温度为37℃、pH为7、阿特拉津初始浓度为6.25mg/L、接种量为2％的条件下能够更好地降解阿特拉津。4.本专利技术的门多萨假单胞菌SFAD3在含50mg/Kg阿特拉津的土壤中处理30d，降解率达到72.6％，表明SFAD3对被阿特拉津污染的土壤有较好的修复作用。5.采用本专利技术筛选的门多萨假单胞菌SFAD3的发酵液测定对芝麻苗生长的影响，结果表明1×109cfu/mL的SFAD3发酵液对芝麻苗生长具有一定促生作用，与对照相比，其根长增长14.17％，鲜质量增加20.33％，干质量增加11.76％，促生效果明显。附图说明图1基于16SrDNA同源分析的菌株SFAD3系统发育树；图2环境条件对菌株SFAD3生长及降解阿特拉津的影响；图3菌株SFAD3对土壤中阿特拉津的降解。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。实验材料：基础盐培养基：0.45gKH2PO4，1.79gK2HPO4，0.4gNaCl，0.2gMgSO4·7H2O，蒸馏水定容至1000mL，pH7.0，加入适量阿特拉津作为唯一碳氮源。LB培养基：10g胰蛋白胨，5g酵母粉，10gNaCl，蒸馏水1000mL，pH7.0。阿特拉津甲醇溶液：称取1g阿特拉津原药，加入90mL甲醇溶解，定容至100mL，阿特拉津母液终浓度为10000mg/L。菌株来源：门多萨假单胞菌SFAD3分离自河南省农业科学院实验基地(原阳)玉米田的土壤样品。实施例一：阿特拉津降解菌的筛选筛选方法：在河南省农业科学院原阳实验基地的玉米田采集土壤，取土壤样10g，加入到含阿特拉津10mg/L的基础盐培养基(100mL)中，充分混匀后，30℃、180r/min震荡培养；每7d以10％的转接量将培养物转到阿拉特津浓度递增的基础盐培养基中，基础盐培养基中阿拉特津的浓度分别为10mg/L、20mg/L、30mg/L、50mg/L、100mg/L；取阿特拉津浓度为100mg/L时的富集培养物倍比稀释到10-1、10-2、10-3、10-4、10-5五个浓度，各浓度取100μL分别涂布到含阿特拉津为100mg/L的固体基础盐培养平板上，将平板放置于30℃恒温箱培养，培养3～5d后，挑取有水解圈的菌落，划线分离纯化，筛选出能有效降解阿特拉津的菌株SFAD3。本实施方式从经过富集驯化的土样中获得3株能够降解阿特拉津的菌株，其中编号为SFAD3的菌株5d后能在添加100mg/L的阿特拉津的基础盐平板上形成明显的水解圈，表明SFAD3具有较好的降解能力。实施例二：菌株SFAD3降解能力测定挑取SFAD3单菌落接种于LB液体培养基，30℃，200r/min震荡培养16～20h；取过夜培养的菌液，4000r/min离心10min，弃上清，用基础盐培养基洗涤3次；将沉淀用基础盐培养基配制成1×109cfu/mL的菌悬液。将菌悬液以2％的接入量添加到含100mg/L本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株有效降解阿特拉津的门多萨假单胞菌，其特征在于：所述的门多萨假单胞菌为门多萨假单胞菌SFAD3，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2019302，保藏日期：2019年04月28日。/n

【技术特征摘要】
1.一株有效降解阿特拉津的门多萨假单胞菌，其特征在于：所述的门多萨假单胞菌为门多萨假单胞菌SFAD3，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2019302，保藏日期：2019年04月28日。


2.一种如权利要求1所述的门多萨假单胞菌的筛选方法，其特征在于：在河南省农业科学院原阳实验基地的玉米田采集土壤，将土壤样品充分混匀，取10g土样加入到含阿特拉津10mg/L的基础盐培养基100mL中，30℃、180r/min震荡培养；每7d以10％的转接量将培养物转到阿拉特津浓度递增的基础盐培养基中，基础盐培养基中阿拉特津的浓度分别为10mg/L、20mg/L、30mg/L、50mg/L、100mg/L；取阿特拉津浓度为100mg/L时的富集培养物依次倍比稀释到10-1、10-2、10-3、10-4、10-5，各浓度取100μL分别涂布到含阿特拉津为100mg/L的固体基础盐培养基平板上，将平板放置于30℃恒温箱培养，培养3～5d后，挑取有水解圈的菌落，划线分离纯化，筛选出能有效降解阿特拉津的菌株，经鉴定，获得的降解菌为门多萨假单胞菌SFAD3。


3.根据权利要求2所述的门多萨假单胞菌的筛选方法，其特征在于：所述的基础盐培养基的成分为：0.45gKH2PO4，1.79gK2H...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪云霞，何碧珀，刘新涛，赵辉，刘红彦，赵新贝，千慧敏，
申请(专利权)人：河南省农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：河南;41