本申请公开了一种鳄鱼蛋清水解物，所述鳄鱼蛋清水解物包含硫酸软骨素、氨基酸和小分子肽，其中，按所述鳄鱼蛋清水解物的质量分数计，所述硫酸软骨素的含量为5.8％‑25.8％，所述氨基酸和小分子肽包含：苏氨酸、丝氨酸、缬氨酸、谷氨酸、蛋氨酸、甘氨酸、赖氨酸、组氨酸、异亮氨酸、精氨酸、亮氨酸、丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸、天冬氨酸和酪氨酸。所述鳄鱼蛋清水解物清除自由基；促进海马神经细胞的再生，促进BDNF、CREB1的表达，激活PKA、ERK、CREB1的磷酸化，并抑制GSK‑3的表达；提高海马中抗氧化酶的mRNA表达，抑制乙酰胆碱酯酶；改善焦虑样行为和记忆力衰退行为，提高空间探索能力及物体识别能力。
A kind of alligator egg hydrolysate and its preparation and Application
【技术实现步骤摘要】
一种鳄鱼蛋清水解物及其制备方法和应用
本申请属于生物制品领域，具体地，涉及一种的利用鳄蛋清水解物及其制备方法和应用，所述鳄蛋清水解物具有通过PKA/ERK/CREB1/BDNF信号通路途径修复海马体及大脑皮层并改善老年小鼠记忆力能力，可应用到具有改善老年人记忆力的保健品作用、抗阿尔兹海默症药物等领域。
技术介绍
暹罗鳄为一种中型鳄鱼，主要分布于布于越南、老挝、缅甸、泰国、柬埔寨、文莱、马来西亚、印度尼西亚等地。栖息于热带及亚热带地区的沼泽地、河流保护地段中水流缓慢的区域、湖泊等淡水水域，以及咸淡水水域等。暹罗鳄具有的饲养成本低，繁殖能力强，饲养见效快，经济效益显著的优点。例如，暹罗鳄鱼鳞胶原蛋白多肽可以增强小鼠免疫功能，激活小鼠NK细胞的活性。鳄鱼肉水解多肽具有美白，抗氧化，抗衰老的保健功效。鳄鱼骨胶原活性肽具有抑制血管紧张素酶(ACE)的功能。目前工业上关于蛋清多肽工艺的研究大多仅限于鸡蛋，鸭蛋等传统禽类。暹罗鳄产蛋量大约20-90枚，并且死蛋率较高。如今，随着人工养殖技术的快速发展和日趋成熟，鳄鱼产业的可持续发展已经成为大趋势。更有效地开发利用鳄鱼蛋，提高鳄鱼副产物的产业价值，使鳄鱼蛋其应用于老年保健品的开发已成为亟待解决的问题。
技术实现思路
以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制权利要求的保护范围。鳄鱼蛋中具有大量的粘性蛋白，其具有丰富的糖基化，相比较常见的禽类蛋相比并含有大量的硫酸软骨素。硫酸软骨素(CS)，是共价连接在蛋白质上形成蛋白聚糖的一类糖胺聚糖。硫酸软骨素广泛分布于动物组织的细胞外基质和细胞表面，糖链由交替的葡萄糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺(又称N-乙酰氨基半乳糖)二糖单位组成，通过一个似糖链接区连接到核心蛋白的丝氨酸残基上。工业上硫酸软骨素的来源主要是鲨鱼、牛的软骨，由于在禽类蛋中含量较低，目前还没有从蛋清中提取硫酸软骨素的先例。流行病学研究表明，中国老年人的认知能力下降和心理健康问题的患病率有所上升。衰老和与年龄相关的神经退行性疾病与不同程度的行为障碍有关，包括学习和记忆障碍。硫酸软骨素(CS)是一种多糖或糖胺聚糖，在蛋白质上共价形成蛋白多糖。硫酸软骨素(CS)糖胺聚糖(GAG)在哺乳动物神经递质系统中的功能主要来源于GAG链对培养过程中神经元突起形成和神经元极化的影响。硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)在成熟神经系统中发挥重要作用，在神经系统中引导轴突，维持稳定的连接，促进突触可塑性，防止中枢神经系统损伤后轴突再生。早期研究证实硫酸软骨素蛋白聚糖具有神经营养作用，其调节机制为硫酸软骨素/壳聚糖链。在之前的一份报告中，通过对老年大鼠的行为测试和相关氧化酶的测试，发现食物中多糖和蛋白质的混合物可以改善老年小鼠的记忆力。目前，治疗老年人老年痴呆的药物，但因其具备明显的毒副作用，导致其使用受到限制。而来源于鳄鱼蛋清的含有硫酸软骨素多肽，不但具有良好的抗氧化活性，且分子量小、易吸收、活性强、安全性高，可以显著改善老年小鼠记忆行为，促进海马组织中相关蛋白的表达，通过抑制组织中乙酰胆碱酯酶的活性，提高海马组织中相关抗氧化酶的表达。并通过PKA/ERK/CREB1/BDNF(cAMP依赖蛋白激酶(PKA-proteinkinaseA)、细胞外调节蛋白激酶(ERK-extracellularregulatedproteinkinases)、环磷腺苷效应元件结合蛋白1(CREB1-cAMPresponseelementbindingprotein1)、脑源性神经营养因子(BDNF-brainderivedneurotrophicfactor))信号通路途径促进海马神经细胞的再生。本申请提供一种鳄鱼蛋清水解物，所述鳄鱼蛋清水解物包含硫酸软骨素、氨基酸和小分子肽，其中，按所述鳄鱼蛋清水解物的质量分数计，所述硫酸软骨素的含量为5.8％-25.8％，所述氨基酸和小分子肽包含：苏氨酸15.5ppm-49.5ppm、丝氨酸16.6ppm-40.6ppm、缬氨酸14.0ppm-68.0ppm、谷氨酸37.5ppm-71.5ppm、蛋氨酸9.9ppm-43.9ppm、甘氨酸16.6ppm-50.6ppm、赖氨酸13.9ppm-47.9ppm、组氨酸9.7ppm-53.7ppm、异亮氨酸14.1ppm-58.1ppm、精氨酸9.6ppm-53.6ppm、亮氨酸12.3ppm-76.3ppm、丙氨酸12.9ppm-56.9ppm、酪氨酸19.2ppm-53.2ppm、脯氨酸11.3ppm-55.3ppm、天冬氨酸13.4ppm-67.4ppm和酪氨酸17.3ppm-51.3ppm。在本申请中，按所述鳄鱼蛋清水解物的质量分数计，所述硫酸软骨素的含量可以为14.5％-17.1％，所述氨基酸和小分子肽可以包含：苏氨酸25.5ppm-29.5ppm、丝氨酸26.6ppm-30.6ppm、缬氨酸34.0ppm-38.0ppm、谷氨酸57.5ppm-61.5ppm、蛋氨酸9.9ppm-13.9ppm、甘氨酸16.6ppm-20.6ppm、赖氨酸33.9ppm-37.9ppm、组氨酸9.7ppm-13.7ppm、异亮氨酸24.1ppm-28.1ppm、精氨酸19.6ppm-23.6ppm、亮氨酸42.3ppm-46.3ppm、丙氨酸22.9ppm-26.9ppm、酪氨酸19.2ppm-23.2ppm、脯氨酸21.3ppm-25.3ppm、天冬氨酸43.4ppm-47.4ppm和酪氨酸17.3ppm-21.3ppm。在本申请中，ppm以mgKg-1为单位，指的是每Kg鳄鱼蛋清水解物中包含的氨基酸的毫克数。在本申请中，所述鳄鱼蛋清水解物的平均分子量可以为≤5kD，优选地为≤2kD，更优选地为≤1kD。本申请还提供所述鳄鱼蛋清水解物的制备方法，所述制备方法包括：(1)将鳄鱼蛋清与鳄鱼蛋壳、鳄鱼蛋黄剥离，使用双蒸水溶解所述鳄鱼蛋清，然后破碎处理；(2)采用蛋白酶酶解步骤(1)破碎处理后的混合物，过滤，得到鳄鱼蛋清水解物酶解液；(3)将步骤(2)获得的鳄鱼蛋清水解物水解液，离心过滤，干燥，保存，获得所述蛋清水解物。在本申请中，在步骤(1)中，可以按照所述鳄鱼蛋清与双蒸水的质量比为1:5-1:20，溶解所述鳄鱼蛋清，破碎处理10min-20min。在本申请中，在步骤(2)中，所述蛋白酶可以选自中性蛋白酶，碱性蛋白酶，酸性蛋白酶，胃蛋白酶，胰蛋白酶和木瓜蛋白酶中任一种或更多种，优选地为碱性蛋白酶。在本申请中，在步骤(2)中，酶解的pH可以为8.4-12.4，优选地为9.75-10.75。在本申请中，在步骤(2)中，可以按照所述蛋白酶的质量与破碎处理后的所述鳄鱼蛋清的质量比为1:100-5:100，优选地为4.08:100-3.88:100，添加所述蛋白酶。在本申请中，在步骤(2)中，所述酶解的时间可以为1h-5h，优选地为4.5h±10min。在本申请中，在步骤(2)中，所述酶解的温度可以为30℃-65℃，优选地为50本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种鳄鱼蛋清水解物，所述鳄鱼蛋清水解物包含硫酸软骨素、氨基酸和小分子肽，其中，按所述鳄鱼蛋清水解物的质量分数计，所述硫酸软骨素的含量为5.8％-25.8％，所述氨基酸和小分子肽包含：苏氨酸15.5ppm-49.5ppm、丝氨酸16.6ppm-40.6ppm、缬氨酸14.0ppm-68.0ppm、谷氨酸37.5ppm-71.5ppm、蛋氨酸9.9ppm-43.9ppm、甘氨酸16.6ppm-50.6ppm、赖氨酸13.9ppm-47.9ppm、组氨酸9.7ppm-53.7ppm、异亮氨酸14.1ppm-58.1ppm、精氨酸9.6ppm-53.6ppm、亮氨酸12.3ppm-76.3ppm、丙氨酸12.9ppm-56.9ppm、酪氨酸19.2ppm-53.2ppm、脯氨酸11.3ppm-55.3ppm、天冬氨酸13.4ppm-67.4ppm和酪氨酸17.3ppm-51.3ppm。/n
【技术特征摘要】
1.一种鳄鱼蛋清水解物，所述鳄鱼蛋清水解物包含硫酸软骨素、氨基酸和小分子肽，其中，按所述鳄鱼蛋清水解物的质量分数计，所述硫酸软骨素的含量为5.8％-25.8％，所述氨基酸和小分子肽包含：苏氨酸15.5ppm-49.5ppm、丝氨酸16.6ppm-40.6ppm、缬氨酸14.0ppm-68.0ppm、谷氨酸37.5ppm-71.5ppm、蛋氨酸9.9ppm-43.9ppm、甘氨酸16.6ppm-50.6ppm、赖氨酸13.9ppm-47.9ppm、组氨酸9.7ppm-53.7ppm、异亮氨酸14.1ppm-58.1ppm、精氨酸9.6ppm-53.6ppm、亮氨酸12.3ppm-76.3ppm、丙氨酸12.9ppm-56.9ppm、酪氨酸19.2ppm-53.2ppm、脯氨酸11.3ppm-55.3ppm、天冬氨酸13.4ppm-67.4ppm和酪氨酸17.3ppm-51.3ppm。
2.根据权利要求1所述的鳄鱼蛋清水解物，其中，按所述鳄鱼蛋清水解物的质量分数计，所述硫酸软骨素的含量为14.5％-17.1％，所述氨基酸和小分子肽包含：苏氨酸25.5ppm-29.5ppm、丝氨酸26.6ppm-30.6ppm、缬氨酸34.0ppm-38.0ppm、谷氨酸57.5ppm-61.5ppm、蛋氨酸9.9ppm-13.9ppm、甘氨酸16.6ppm-20.6ppm、赖氨酸33.9ppm-37.9ppm、组氨酸9.7ppm-13.7ppm、异亮氨酸24.1ppm-28.1ppm、精氨酸19.6ppm-23.6ppm、亮氨酸42.3ppm-46.3ppm、丙氨酸22.9ppm-26.9ppm、酪氨酸19.2ppm-23.2ppm、脯氨酸21.3ppm-25.3ppm、天冬氨酸43.4ppm-47.4ppm和酪氨酸17.3ppm-21.3ppm。
3.根据权利要求1所述的鳄鱼蛋清水解物，其中，所述鳄鱼蛋清水解物的平均分子量为≤5kD，优选地为≤2kD，更优选地为≤1kD。
4.权利要求1至3中任一项所述的鳄鱼蛋清水解物的制备方法，所述制备方法包括：
(1)将鳄鱼蛋清与鳄鱼蛋壳、鳄鱼蛋黄剥离，使用双蒸水溶解所述鳄鱼蛋清，然后破碎处理；
(2)采用蛋白酶酶解步骤(1)破碎处理后的混合物，过滤，得...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘笑天，熊佑熊，李华亮，董欣，陈清西，
申请(专利权)人：福建鼍龙实业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：福建;35
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