寡聚粒子试剂及其使用方法技术

本文提供寡聚试剂，包括链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白的寡聚试剂、及其组合物、及制造寡聚试剂的方法，包括可靠地制造具有所需尺寸的寡聚粒子试剂的方法。在一些情况下，该试剂为含有多个针对剂的结合位点的寡聚粒子试剂，且因此该一种或多种剂是通过可逆地结合至该寡聚粒子试剂而多聚化，例如由此产生多聚化寡聚粒子试剂，其具有在其上多聚化的刺激剂。还提供使用该寡聚试剂进行孵育或培养的方法，例如以诱导刺激细胞(诸如淋巴细胞群体)的组合物扩增(增殖)、活化、共刺激和/或存活。在一些方面中，本发明专利技术提供刺激例如细胞群体的扩增(增殖)、存活或续存、活化、共刺激或其他效应的方法及试剂，其涉及将剂结合至细胞表面上的分子，由此向该细胞提供一种或多种信号。

Oligomeric particle reagent and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】寡聚粒子试剂及其使用方法相关申请的交叉引用本申请案要求2017年4月27日提交的名称为“OLIGOMERICPARTICLEREAGENTSANDMETHODSOFUSETHEREOF”的美国临时专利申请62/491,245的优先权，其内容以全文引用的方式并入本文中。序列表以引用的方式并入本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表提供为2018年4月25日创建的名称为735042008542SeqList.TXT的文件，其大小为110,426位字节。电子格式的序列表中的信息以全文引用的方式并入。
本公开内容提供寡聚试剂，包括链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白的寡聚试剂，及其组合物以及用于制造寡聚试剂的方法，包括用于可靠地制造具有所需尺寸的寡聚粒子试剂的方法。在一些情况下，试剂为含有多个用于剂的结合位点的寡聚粒子试剂，且因此一种或多种剂(例如一种或多种选择剂或刺激剂)是通过可逆地结合至寡聚粒子试剂而多聚化，例如由此产生刺激剂或选择剂在其上多聚化的多聚化寡聚粒子试剂。本公开内容还提供使用寡聚试剂进行孵育或培养，以诱导刺激细胞(诸如淋巴细胞群体)的组合物的扩增(增殖)、活化、共刺激和/或存活的方法。在一些方面中，本公开内容提供用于刺激例如细胞群体的扩增(增殖)、存活或维持、活化、共刺激或其他效应(例如亲和性选择)的方法及试剂，其包含将剂结合至细胞表面上的分子，由此向细胞提供一种或多种信号。
技术介绍
各种策略可用于体外刺激T细胞群体，包括用于体外扩增抗原特异性T细胞以用于过继性细胞免疫疗法或癌症疗法，其中已显示这类T细胞的输注在携有肿瘤的宿主中具有抗肿瘤反应性或用于治疗病毒感染。需要用于体外扩增细胞群体的改进的策略，包括用于研究、诊断及治疗目的。
技术实现思路
本文提供包含多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子的寡聚粒子试剂，其中寡聚粒子试剂的尺寸包含i)大于25nm的半径，例如流体动力半径，ii)至少5×106g/mol的分子量；和/或(iii)每一寡聚粒子试剂至少100个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白四聚体。在本文中提供的寡聚粒子试剂中的任一者的特定实施方案中，链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子结合至或能够结合至生物素、生物素类似物(例如脱硫生物素、亚氨基生物素)或至链霉亲和素结合肽(例如Strep-tagII(WSHPQFEK，SEQIDNO:8))。在本文提供的寡聚粒子试剂中的任一者的某些实施方案中，链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子可逆地结合至或能够可逆地结合至生物素、生物素类似物或至链霉亲和素结合肽(例如Strep-tagII(WSHPQFEK，SEQIDNO:8))。在本文提供的寡聚粒子试剂中的任一者的一些实施方案中，寡聚粒子试剂包含多个链霉亲和素突变蛋白分子，其中链霉亲和素突变蛋白分子在对应于参照SEQIDNO:1中所示的氨基酸序列中的链霉亲和素中的位置的位置44至47的序列位置处包含氨基酸序列Va144-Thr45-Ala46-Arg47或Ile44-Gly45-Ala46-Arg47。在本文提供的寡聚粒子试剂中的任一者的特定实施方案中，链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子结合至或能够结合至生物素、亲和素、生物素类似物或突变蛋白、亲和素类似物或突变蛋白和/或其生物学活性片段。在本文提供的寡聚粒子试剂中的任一者的特定实施方案中，链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子可逆地结合至或能够可逆地结合至生物素、亲和素、生物素类似物或突变蛋白、亲和素类似物或突变蛋白和/或其生物学活性片段。在本文提供的寡聚粒子试剂中的任一者的一些实施方案中，寡聚粒子试剂包含多个链霉亲和素突变蛋白分子，其中链霉亲和素突变蛋白分子在对应于参照SEQIDNO:1中所示的氨基酸序列中的链霉亲和素中的位置的位置44至47的序列位置处包含氨基酸序列Va144-Thr45-Ala46-Arg47或Ile44-Gly45-Ala46-Arg47。在本文提供的寡聚粒子试剂中的任一者的特定实施方案中，寡聚粒子试剂包含多个链霉亲和素突变蛋白分子，所述链霉亲和素突变蛋白分子包含：a)SEQIDNO:3-6、27、28、60或61中的任一者中所示的氨基酸序列；b)与SEQIDNO:3-6、27、28、60或61中的任一者展现至少85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性且含有对应于Va144-Thr45-Ala46-Arg47或Ile44-Gly45-Ala46-Arg47的氨基酸序列和/或可逆地结合至生物素、生物素类似物或链霉亲和素结合肽的氨基酸序列；或与SEQIDNO:3-6、27、28、60或61中的任一者展现至少85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性且含有对应于Va144-Thr45-Ala46-Arg47或Ile44-Gly45-Ala46-Arg47的氨基酸序列和/或结合至生物素或其生物学活性形式、生物素类似物或突变蛋白或其生物学活性片段或链霉亲和素结合肽的氨基酸序列a)或b)的功能片段，该功能片段结合至生物素或其生物学活性形式、生物素类似物或突变蛋白或其生物学活性片段或链霉亲和素结合肽和/或可逆地结合至生物素、生物素类似物或链霉亲和素结合肽；或c)a)或b)的功能片段，该功能片段结合至生物素、生物素类似物或链霉亲和素结合肽。在本文提供的寡聚粒子试剂中的任一者的某些实施方案中，其中寡聚粒子试剂包含多个包含SEQIDNO:6或61中所示的氨基酸序列的链霉亲和素突变蛋白分子。在本文提供的寡聚粒子试剂中的任一者的一些实施方案中，链霉亲和素突变蛋白分子在对应于参照SEQIDNO:1中所示的氨基酸序列中的链霉亲和素中的位置的117、120和/或121位置处进一步包含一个或多个氨基酸置换。在本文提供的寡聚粒子试剂中的任一者的特定实施方案中：一个或多个氨基酸置换选自Glu117、Asp117、Arg117、Ser120、Ala120、Gly120、Trp121、Tyr121或Phe121；或一个或多个氨基酸置换选自Glu117、Gly120或Tyr121中的一个或多个；或多个氨基酸置换选自Glu117、Gly120或Tyr121。在本文提供的寡聚粒子试剂中的任一者的某些实施方案中，寡聚粒子试剂包含多个链霉亲和素突变蛋白分子，该分子包含：a)SEQIDNO:27或28中所示的氨基酸序列；b)与SEQIDNO:28展现至少85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性且含有对应于Va144、Thr45、Ala46、Arg47、Glu117、Gly120和Tyr121的氨基酸序列和/或结合至生物素或生物学活性片段、生物素类似物或突变蛋白或其生物学活性片段或链霉亲和素结合肽；或c)a)或b)的功能片段，该功能片段结合至生物素或生物学活性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种寡聚粒子试剂，其包含多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子，其中该寡聚粒子试剂的尺寸包含i)大于50nm的半径，ii)至少5×10

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170427 US 62/491,2451.一种寡聚粒子试剂，其包含多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子，其中该寡聚粒子试剂的尺寸包含i)大于50nm的半径，ii)至少5×106g/mol的分子量；和/或(iii)每一寡聚粒子试剂至少100个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白四聚体。


2.如权利要求1的寡聚粒子试剂，其中该链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子可逆地结合至或能够可逆地结合至生物素、生物素类似物或链霉亲和素结合肽。


3.如权利要求1至2中任一项的寡聚粒子试剂，其中该寡聚粒子试剂包含多个链霉亲和素突变蛋白分子，其中该链霉亲和素突变蛋白分子在对应于参照SEQIDNO:1中所示的氨基酸序列中的链霉亲和素的位置的位置44至47的序列位置处包含氨基酸序列Va144-Thr45-Ala46-Arg47或Ile44-Gly45-Ala46-Arg47。


4.如权利要求1至3中任一项的寡聚粒子试剂，其中该寡聚粒子试剂包含多个链霉亲和素突变蛋白分子，该链霉亲和素突变蛋白分子包含：
a)SEQIDNO:3-6、27、28、60或61中的任一者中所示的氨基酸序列；
b)与SEQIDNO:3-6、27、28、60或61中的任一者展现至少85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性且含有对应于Va144-Thr45-Ala46-Arg47或Ile44-Gly45-Ala46-Arg47的氨基酸序列和/或可逆地结合至生物素、生物素类似物或链霉亲和素结合肽的氨基酸序列；或
c)可逆地结合至生物素、生物素类似物或链霉亲和素结合肽的a)或b)的功能片段。


5.如权利要求1至4中任一项的寡聚粒子试剂，其中该寡聚粒子试剂包含多个链霉亲和素突变蛋白分子，该链霉亲和素突变蛋白分子包含SEQIDNO:6或61中所示的氨基酸序列。


6.如权利要求1至5中任一项的寡聚粒子试剂，其中该寡聚粒子试剂结合至或能够结合至一种或多种剂。


7.如权利要求6的寡聚粒子试剂，其中该一种或多种剂包含结合伴侣，其中该结合伴侣能够结合，可选地可逆地结合，至该寡聚粒子试剂上的一个或多个结合位点。


8.如权利要求7的寡聚粒子试剂，其中该结合伴侣包含链霉亲和素结合肽。


9.如权利要求7或8的寡聚粒子试剂，其中该结合伴侣包含选自由以下组成的组的链霉亲和素结合肽：Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys(SEQIDNO:8)、Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(GlyGlyGlySer)3-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys((SEQIDNO:17)、Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(GlyGlyGlySer)2-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys(SEQIDNO:18)和Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(GlyGlyGlySer)2Gly-Gly-Ser-Ala-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys(SEQIDNO:19)。


10.如权利要求7至9中任一项的寡聚粒子试剂，其中该一种或多种剂为或包含抗体或其抗原结合片段。


11.如权利要求10的寡聚粒子试剂，其中该一种或多种剂为或包含单价抗体片段。


12.如权利要求10或权利要求11的寡聚粒子试剂，其中该一种或多种剂为或包含Fab。


13.如权利要求7至12中任一项的寡聚粒子试剂，其中该一种或多种剂为结合至或能够结合至表达于靶细胞表面上的受体的受体结合剂。


14.如权利要求7至13中任一项的寡聚粒子试剂，其中该受体结合剂为或包含能够结合至靶细胞表面上的分子的刺激剂，其中结合诱导或调节该靶细胞中的信号。


15.如权利要求13或权利要求14的寡聚粒子试剂，其中该靶细胞为免疫细胞。


16.如权利要求13至15中任一项的寡聚粒子试剂，其中该靶细胞为T细胞。


17.如权利要求13至16中任一项的寡聚粒子试剂，其中该受体结合剂能够在T细胞中起始TCR/CD3复合物相关的信号，结合至TCR/CD3复合物的成员；和/或特异性结合至CD3。


18.如权利要求13至17中任一项的寡聚粒子试剂，其中该刺激剂为第一受体结合剂且该寡聚粒子试剂包含第二受体结合剂，其中该第二受体结合剂能够特异性结合至该靶细胞表面上的第二分子，其中结合至该第二分子可选地能够诱导或调节该靶细胞中的信号。


19.如权利要求18的寡聚粒子试剂，其中该第二受体结合剂特异性结合至共刺激分子、辅助分子、免疫检查点分子，为TNF家族成员或TNF家族受体、细胞因子受体、趋化因子受体，或者为或包含黏附分子或诱发细胞因子产生、趋化因子产生和/或黏附分子表达的因子。


20.如权利要求18或权利要求19的寡聚粒子试剂，其中该第二受体结合剂特异性结合至共刺激分子且该共刺激分子为CD28。


21.如权利要求7至20中任一项的寡聚粒子试剂，其中该一种或多种剂为抗CD3抗体及抗CD28抗体，可选为抗CD3Fab及抗CD28Fab。


22.如权利要求13至16中任一项的寡聚粒子试剂，其中该受体结合剂特异性结合至共刺激分子、辅助分子、免疫检查点分子，为TNF家族成员或TNF家族受体、细胞因子受体、趋化因子受体，或者为或包含黏附分子或诱发细胞因子产生、趋化因子产生和/或黏附分子表达的因子。


23.如权利要求7至22中任一项的寡聚粒子试剂，其中该一种或多种剂包含选择剂，其中该选择剂结合至或能够结合至表达于靶细胞表面上的选择标记物。


24.如权利要求23的寡聚粒子试剂，其中该靶细胞为免疫细胞，可选为T细胞。


25.如权利要求23或权利要求24的寡聚粒子试剂，其中该选择标记物为CCR7、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD27、CD45RA、CD45RO、CD62L和/或CD127。


26.如权利要求1至25中任一项的寡聚粒子试剂，其中该寡聚粒子试剂包含：大于60nm、大于70nm、大于80nm、或大于90nm的半径。


27.如权利要求1至26中任一项的寡聚粒子试剂，其中该寡聚粒子试剂包含：含上下限值的50nm与150nm之间、75nm与125nm之间、80nm与115nm之间、或90nm与110nm之间的半径；或
90nm±15nm，或95nm±20-25nm的半径。


28.如权利要求26或权利要求27的寡聚粒子试剂，其中该半径为流体动力半径。


29.如权利要求1至28中任一项的寡聚粒子试剂，其中该寡聚粒子试剂包含如下分子量：
至少5×107g/mol，或至少1×108g/mol；和/或
5×107g/mol与5×108g/mol之间、1×108g/mol与5×108g/mol之间、或1×108g/mol与2×108g/mol之间。


30.如权利要求1至29中任一项的寡聚粒子试剂，其中该寡聚粒子试剂包含至少500个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白四聚体、至少1,000个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白四聚体、至少1,500个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白四聚体、或至少2,000个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白四聚体；和/或1,000与20,000个之间的链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白四聚体、1,000与10,000个之间的链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白四聚体、或2,000与5,000个之间的链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白四聚体。


31.如权利要求1至30中任一项的寡聚粒子试剂，其中该多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白包含赖氨酸残基，其中小于20％、10％、5％、1％的该赖氨酸残基包含N-取代的亚氨基硫杂环戊烷。


32.一种组合物，其包含多种如权利要求1至31中任一项所述的寡聚粒子试剂。


33.如权利要求32的组合物，其中该多种寡聚粒子试剂包含i)大于70nm的平均半径；ii)至少1×108g/mol的平均分子量；和/或iii)每一寡聚粒子试剂的链霉亲和素或链霉亲和素四聚物的平均数量为至少2,000个；和/或iv)其中至少95％的该多种寡聚粒子试剂包含10nm至150nm之间的半径的半径尺寸分布。


34.如权利要求32或33的组合物，其中该多种寡聚粒子试剂包含大于50nm、大于60nm、大于70nm、大于80nm、大于90nm、或大于100nm的平均半径。


35.如权利要求32至34中任一项的组合物，其中：
该多种寡聚粒子试剂包含含上下限值的在50nm与150nm之间、75nm与125nm之间、80nm与110nm之间、或90nm与110nm之间的平均半径；或
该多种寡聚粒子试剂包含90nm±15nm、95nm±20-25nm、或97±10nm的平均半径。


36.如权利要求32至35中任一项的组合物，其中至少95％的该多种寡聚粒子试剂包含在50nm与150nm之间、70nm与140nm之间、80nm与120nm之间、80nm与115nm之间、80nm与100nm之间、90nm与110nm之间、和/或100nm与120nm之间的半径。


37.如权利要求32至36中任一项的组合物，其中至少95％的该寡聚粒子试剂包含该多种寡聚粒子试剂的平均和/或中值半径的±50％、±25％、±20％、±15％、±10％和/或±5％之间的半径。


38.如权利要求32至37中任一项的组合物，其中该多种寡聚粒子试剂包含在80nm与115nm之间的平均半径且其中至少95％的该寡聚粒子试剂包含该平均半径的±25％之间的半径。


39.如权利要求32至38中任一项的组合物，其中该多个粒子包含：
(i)含上下限值的1×108g/mol与5×108g/mol之间或1×108g/mol与2×108g/mol之间的平均分子量；和/或
(ii)每一寡聚粒子试剂的链霉亲和素或链霉亲和素四聚体的平均数量为各含上下限值的至少100个、至少500个、至少1,000个、至少1,500个、或至少2,000个，或在1,000个与20,000个之间、1,000个与10,000个之间、或2,000个与5,000个之间。


40.如权利要求32至39中任一项的组合物，其中当在大约或低于-80℃、大约或低于-20℃和/或大约或低于4℃下储存至少1周时，该多个寡聚物粒子的平均半径不增加超过25％或10％。


41.一种产生包含链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白的寡聚粒子试剂的方法，该方法包含：
孵育多个包含能够与巯基官能团反应的巯基反应性官能团的活化链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子及多个包含一个或多个巯基官能团的巯基化链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子，由此产生包含该寡聚粒子的粒子组合物；
从单体和/或较小寡聚分子中分离该寡聚粒子；以及
使该寡聚粒子与稳定剂接触，由此产生该寡聚粒子试剂。


42.如权利要求41的方法，其中该多个活化链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子是通过将第一多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子与能够将一个或多个胺转化为巯基反应性官能团的活化剂一起孵育而产生。


43.如权利要求41或权利要求42的方法，其中该多个巯基化链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子是通过将第二多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子与添加或能够添加巯基官能团至一个或多个赖氨酸残基的巯基化剂一起孵育而产生。


44.一种产生寡聚粒子试剂的方法，该方法包含：
(a)在将一个或多个胺转化为能够与巯基官能团反应的巯基反应性基团的条件下，将第一多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子与活化剂一起孵育，由此产生多个活化的链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子；
(b)将第二多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子与添加或能够添加巯基官能团至一个或多个赖氨酸残基的巯基化剂一起孵育，由此产生多个巯基化的链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子；以及
(c)将该多个活化的链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子与该多个巯基化的链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子一起孵育，由此产生包含该寡聚粒子试剂的粒子组合物；
其中该方法在如下条件下进行：其中在开始(c)的孵育时，该多个巯基化的链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子使得至少60％的该赖氨酸平均包含一个巯基官能团，和/或每一巯基化的链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白四聚体平均至少10个赖氨酸包含一个巯基官能团。


45.如权利要求44的方法，其进一步包含从单体和/或较小寡聚链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子中分离该寡聚粒子试剂。


46.如权利要求41至45中任一项的方法，其中该第一多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子与该活化剂的孵育是在链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白与该活化剂的1:1与1:10之间摩尔比下进行。


47.如权利要求41至46中任一项的方法，其中该第一多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子与该活化剂的孵育是在链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白与该活化剂的1:2±2％的摩尔比下进行。


48.如权利要求41至47中任一项的方法，其中该活化剂包含杂双官能团交联剂，可选为4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸磺基琥珀酰亚胺酯(磺基SMCC)和/或6-[(β-马来酰亚胺基丙酰胺基)己酸琥珀酰亚胺酯(SMPH)。


49.如权利要求41至48中任一项的方法，其中该巯基反应性官能团为马来酰亚胺基。


50.如权利要求41至49中任一项的方法，其中该第一多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子与该活化剂是在各含上下限值的6.8与7.5之间、7.0与7.4之间，可选在或在约7.2的pH下孵育。


51.如权利要求41至50中任一项的方法，其中该第一多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子与该活化剂是在室温下，可选在含上下限值的20℃与25℃之间，可选在或在约23℃或24℃下孵育。


52.如权利要求41至51中任一项的方法，其中该第一多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子与该活化剂孵育各含上下限值的15分钟至6小时之间、30分钟至2小时之间，可选孵育1小时或约1小时。


53.如权利要求43至52中任一项的方法，其中：
该第二多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子与该巯基化剂的孵育是在该巯基化剂与每一链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子的各伯胺为含上下限值的10:1与1:1之间的摩尔比下进行；
和/或该第二多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子与该巯基化剂的孵育是在链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白四聚体与该巯基化剂的含上下限值的1:50与1:500之间的摩尔比下，可选在或在链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白四聚体与该活化剂的1:100或约1:100的摩尔比下进行。


54.如权利要求43至53中任一项的方法，其中该巯基化剂为或包含2-亚氨基硫杂环戊烷。


55.如权利要求43至54中任一项的方法，其中：
该第二多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子与该巯基化剂是在7.0或更大，可选含上下限值的7.0与8.0之间的pH下，可选在约7.7的pH下孵育；和/或
该第二多个链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子与该巯基化剂的孵育在pH为8.0或更大，可选在含上下限值的8.0与9.0之间，可选为8.5或约8.5的缓冲液的存在下开始。


56.如权利要求43至55中任一项的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·施密特，C·斯坦伯格，T·科夫斯基，K·普伦蒂斯，
申请(专利权)人：朱诺治疗学有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE